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MicroRNA-dependent development revealed by RNA interference-mediated gene silencing of LmDicerl in the migratory locust 被引量:11
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作者 Yan-Li Wang Mei-Ling Yang +2 位作者 Feng Jiang Jian-Zhen Zhang Le Kang 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2013年第1期53-60,共8页
MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding RNAs, which participate in many biological processes. The small RNA transcriptome in the migratory locust has been characterized and 50 conserved miRNA families and 185 potenti... MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding RNAs, which participate in many biological processes. The small RNA transcriptome in the migratory locust has been characterized and 50 conserved miRNA families and 185 potential locust-specific miRNA family candidates have been identified using high-throughput sequencing. However, it is unclear whether miRNAs influence a wide variety of locusts' biological processes, such as growth or development. In insects, Dicerl ribonuclease transforms miRNA precursors into mature miRNAs. Thus, using systemic RNA interference (RNAi) to silence the expression of Dicer1 in the migratory locust, Locusta migratoria, we reduced miRNA contents in the locust and disrupted two types of molt (nymph-nymph, and nymph-adult). The RNAi of LmDicerl also resulted in a high mortality in L. migratora. Our study revealed that LmDicerl was essential for miRNA regulation and development ofL. migratoria. These results further support our notion that LmDicerl could serve as an excellent target for developing novel strategies for controlling this important insect pest. 展开更多
关键词 DEVELOPMENT dicerl Locusta migratoria MICRORNA
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microRNA-103下调Dicer1对卵巢癌侵袭转移影响及其机制探讨 被引量:12
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作者 杨宗元 魏晓 +3 位作者 周晓水 刘毅 龚成 高庆蕾 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2014年第22期1757-1763,共7页
目的探讨卵巢癌细胞中microRNA-103对Dicer1的调控作用以及对侵袭转移能力的影响,研究其作用分子机制。方法收集华中科技大学同济医学附属同济医院2009-02-01-2012-07-02确诊为浆液性卵巢癌患者石蜡切片共135例,免疫组织化学检测配对原... 目的探讨卵巢癌细胞中microRNA-103对Dicer1的调控作用以及对侵袭转移能力的影响,研究其作用分子机制。方法收集华中科技大学同济医学附属同济医院2009-02-01-2012-07-02确诊为浆液性卵巢癌患者石蜡切片共135例,免疫组织化学检测配对原位转移卵巢癌病灶,高低级别浆液性卵巢癌病灶Dicer1表达水平;收集武汉同济医院2013-01-03-2013-03-20新鲜卵巢癌标本组织和正常卵巢标本各5例,提取RNA后qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-103表达差异;用生物信息学的方法特异预测出miR-103特异作用Dicer1位点,后通过双荧光素酶报告体系进行验证。上调miR-103表达后,蛋白质印迹法检测Dicer1的表达变化;上调miR-103或下调Dicer1水平后Transwell实验观察卵巢癌细胞迁移侵袭能力的改变;Confocal观察EMT相关分子N-cadherin的表达。结果 Dicer1在卵巢癌发生发展过程中表达下降,转移灶与原位灶相比显著表达下调,χ2=15.0,P<0.01;高级别浆液性癌较低级别Dicer1明显表达下调,χ2=21.4,P<0.01。miR-103在上皮性卵巢癌组织的相对表达量为4.28±1.22,较正常卵巢(0.69±0.13)明显增加,t′=-6.381,P=0.002;同时在卵巢癌细胞系中相对表达量为3.71±1.36,较正常卵巢上皮细胞(0.98±0.19)显著增加,t=-4.851,P=0.005。荧光素酶报告系统示,miR-103能特异结合Dicer1-3′-UTR区域;卵巢癌细胞系SKOV3中过表达miR-103后其迁移细胞数目为77.5±8.4,较对照组(17.5±3.1)明显增加,差异有统计学意义,t=-21.44,P<0.001;侵袭数目为50.7±4.2,较对照组(13.5±1.3)增加显著,差异有统计学意义,t=-19.74,P<0.001。Dicer1蛋白水平被显著抑制;Dicer1-siRNA下调Dicer1水平后卵巢癌细胞系SKOV3(t=16.67,P<0.001)和CAOV3(t=18.63,P<0.001)迁移侵袭能力增加;miR-103过表达或Dicer1-si后细胞形态呈现间质化改变,间质标志分子N-cadherin表达明显上升。结论 miR-103在卵巢癌中作为一个促癌miR促进卵巢癌侵袭转移,其分子机制是通过下调Dicer1介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR-103或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效方法。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 微小RNA-103 Dicer1 上皮间质转化 N-CADHERIN
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miR-107靶向调控Dicer1促进卵巢癌细胞系侵袭转移 被引量:4
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作者 杨宗元 孙朝阳 +5 位作者 周波 李娜 何扬 丁冬 陈刚 朱涛 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期660-666,共7页
目的检测microRNA-107(miR-107)在卵巢癌中的表达水平,探讨其对卵巢癌细胞系侵袭转移的调控作用及分子机制。方法 qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-107表达差异,用生物信息学的方法特异预... 目的检测microRNA-107(miR-107)在卵巢癌中的表达水平,探讨其对卵巢癌细胞系侵袭转移的调控作用及分子机制。方法 qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-107表达差异,用生物信息学的方法特异预测出miR-107靶基因Dicer1后,通过双荧光素酶报告体系进行验证。上调miR-107表达后,Western blot检测Dicer1的表达变化;划痕实验、Tr-answell实验观察卵巢癌细胞运动和侵袭能力的改变;qRT-PCR及Confocal观察EMT相关分子E-cad-herin、β-Catenin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin、ICAM-1、MMP-9的表达。结果 miR-107在上皮性卵巢癌组织的表达较正常卵巢组织显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统验证预测结果正确。上调miR-107后,Western blot结果显示Dicer1蛋白质水平被显著抑制,卵巢癌细胞系SKOV3细胞形态发生间质细胞样转变,间质标志分子β-Catenin、N-cadherin及MMP-9表达上升;体外实验表明卵巢癌细胞的运动和侵袭能力得到明显促进。结论本研究表明miR-107促进卵巢癌侵袭转移的分子机制是通过下调miRNA加工机器Dicer1,从而介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR-107或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效手段。 展开更多
关键词 卵巢癌 微小RNA-107 Dicer1 上皮间质转化
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Dicer1转基因小鼠模型的建立 被引量:2
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作者 郑志红 高峰 +7 位作者 杨葳 汪瑛 于洋 周生来 李兆阳 吕相川 张梅英 王禄增 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期258-260,I0003,共4页
目的建立Dicer1转基因小鼠模型。方法构建pcDNA3.1-Dicer1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的ICR受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过免疫组... 目的建立Dicer1转基因小鼠模型。方法构建pcDNA3.1-Dicer1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的ICR受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过免疫组化检测Dicer1基因表达。结果显微注射172枚卵,移植119枚卵于3只受体输卵管中,2只怀孕,共产仔15只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern检测6只均为阳性。对Southern检测阳性转基因小鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明Dicer1基因在肝脏、肾脏、肺内均有表达。对腹腔肿胀的转基因阳性1号鼠解剖发现肝脏、脾脏明显增大,胚胎发育异常。结论成功建立Dicer1基因表达的转基因小鼠模型,该模型为进一步研究DICER1基因功能及miRNA的表达及功能等奠定基础。 展开更多
关键词 Dicer1 显微注射法 转基因小鼠
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应用Dicer1转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究
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作者 李兆阳 姜川 +3 位作者 郭晓冲 杨葳 董婉维 郑志红 《实验动物与比较医学》 CAS 2015年第4期294-297,共4页
目的应用D妇r1(编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族)转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL/6J小鼠前肢腋下,观察两种小鼠的荷瘤情况,包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C57BL/6J... 目的应用D妇r1(编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族)转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL/6J小鼠前肢腋下,观察两种小鼠的荷瘤情况,包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C57BL/6J小鼠组肿瘤比较,Dicer1转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体A(P〈0.05)。结论应用Dicer1转基因小鼠建立了黑色素瘤模型,结果显示Dicer1基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响。 展开更多
关键词 Dicer1 转基因小鼠 黑色素瘤
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新型非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立
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作者 苏晓鸥 陈静 +3 位作者 戚新明 周向梅 乔俊文 任进 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期87-91,95,I0004,共7页
为了开发与人类非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)特征相似的动物疾病模型,本试验利用肝脏特异性Dicer1基因敲除(KO)小鼠,经高脂高糖饮食诱导12周构建了一种新型NASH小鼠模型。试验分为4组包括正常饮食的野生型... 为了开发与人类非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)特征相似的动物疾病模型,本试验利用肝脏特异性Dicer1基因敲除(KO)小鼠,经高脂高糖饮食诱导12周构建了一种新型NASH小鼠模型。试验分为4组包括正常饮食的野生型小鼠组(CW组)、正常饮食的KO小鼠组(CK组)、高脂高糖饮食的野生小鼠组(HW组)、高脂高糖饮食的KO小鼠组(HK组,本试验模型组)。研究结果显示,HK组小鼠体重和肝脏比重升高,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平显著升高;HK和HW组肾周白色脂肪和附睾白色脂肪比重均明显升高;血脂相关指标显示,HK组甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDLC)水平明显升高;口服糖耐量测试(OGTT)结果显示,HW、HK组糖耐量降低;组织病理学方面,HK组和CK组均可见肝脏脂肪变性、肝小叶炎症及纤维化,且HK组程度更为严重;此外,HK组还可见肝细胞气球样,个别肝细胞胞浆内Mallory-Denk小体,以及单个肝细胞凋亡。而HW组仅存在肝细胞脂肪变性。油红O染色证实肝细胞中的空泡为脂肪滴。天狼星红染色显示,HK和CK组存在肝纤维化。综上所述,本试验构建了一种新型非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型,与人类NASH在诸多方面特征相似,包括体重增长快、肝功异常、白色脂肪蓄积、血脂异常、糖耐量降低、以及NASH相关的肝脏病理特征。此外,该模型相对诱导周期短,且饮食结构与引起人类NASH的常见的膳食结构相似。这一新模型的建立将有助于NASH疾病机制以及治疗方面的研究。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝炎 小鼠模型 肝脏 Dicer1 基因敲除
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甲状腺母细胞瘤临床病理分析及文献复习
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作者 闫广宁 何文源 +4 位作者 叶丹丽 李静 赖续文 王卓才 王蔚 《诊断病理学杂志》 2024年第1期42-45,48,共5页
目的探讨甲状腺母细胞瘤的临床病理特征、免疫表型及基因改变。方法对我院收治的1例甲状腺母细胞瘤进行HE染色、免疫组化检查和二代测序并复习相关文献。结果患者男性,23岁,颈部肿物迅速增大2月。PET-CT考虑甲状腺癌伴广泛静脉内癌栓形... 目的探讨甲状腺母细胞瘤的临床病理特征、免疫表型及基因改变。方法对我院收治的1例甲状腺母细胞瘤进行HE染色、免疫组化检查和二代测序并复习相关文献。结果患者男性,23岁,颈部肿物迅速增大2月。PET-CT考虑甲状腺癌伴广泛静脉内癌栓形成。显微镜下肿瘤以圆形幼稚未分化细胞组成的胚芽成分为主,混杂原始甲状腺上皮及梭形间质等多胚层成分。甲状腺上皮大部分呈条索状分布,局灶见原始滤泡;胚芽由成片的胞质稀少、核大深染的幼稚细胞组成,呈明显的神经上皮分化;间质疏密不等,密集区细胞与原始胚芽成分移行,疏松区间质细胞呈长梭形或星芒状。免疫组化:甲状腺上皮表达SALL4、TTF-1和PAX-8;胚芽成分Syn、NSE、Nestin、CD56和SALL4阳性;Ki-67约60%。NGS提示患者存在DICER1基因体细胞及杂合性胚系突变。结论甲状腺母细胞瘤是第5版《WHO(2022)甲状腺肿瘤病理分类》最新命名的肿瘤实体,病理诊断需要综合组织学、免疫组化和DICER1基因突变。 展开更多
关键词 甲状腺母细胞瘤 恶性甲状腺畸胎瘤 DICER1 神经上皮胚芽
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