期刊文献+
共找到53篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
基于SVM的高通量dPCR基因芯片荧光图像分类研究 被引量:6
1
作者 刘丽 孙刘杰 王文举 《包装工程》 CAS 北大核心 2020年第19期223-229,共7页
目的为了实现高通量dPCR基因芯片荧光图像的亮点分类与计数,提出一种基于支持向量机(SVM)的荧光图像分类与计数方法。方法首先对荧光图像进行去噪、对比度增强等图像预处理,对预处理后荧光图像进行亮点区域提取标注,去除背景与暗点的冗... 目的为了实现高通量dPCR基因芯片荧光图像的亮点分类与计数,提出一种基于支持向量机(SVM)的荧光图像分类与计数方法。方法首先对荧光图像进行去噪、对比度增强等图像预处理,对预处理后荧光图像进行亮点区域提取标注,去除背景与暗点的冗余信息,利用方向梯度直方图(Histogram of Oriented Gradient,HOG)提取鉴别特征,计算合并所有样本的亮点特征得到HOG特征向量,根据已得到的HOG特征向量创建一个线性SVM分类器,利用训练好的SVM分类器对荧光图像亮点进行分类与计数。结果对比传统算法,文中算法具有较高的分类识别精度,平均准确率高达98%以上,可以很好地实现荧光图像亮点分类与计数。结论在有限的小样本标注数据下,文中算法具有良好的分类性能,能够有效识别荧光图像中的亮点,对其他荧光图像分类研究也具有一定参考价值。 展开更多
关键词 dpcr 支持向量机 方向梯度直方图 荧光图像 亮点分类
在线阅读 下载PDF
多特征融合高通量dPCR荧光图像识别 被引量:2
2
作者 孙刘杰 刘丽 王文举 《光学精密工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第8期928-937,共10页
传统高通量dPCR荧光图像分析结果易因假阳性点与非特异性扩增而导致阳性点识别率较低,因而本文提出一种多特征融合高通量dPCR荧光图像识别方法(HDFINet),以提高阳性点识别准确性。首先,在特征融合部分引入自上而下结构,使得下层特征在... 传统高通量dPCR荧光图像分析结果易因假阳性点与非特异性扩增而导致阳性点识别率较低,因而本文提出一种多特征融合高通量dPCR荧光图像识别方法(HDFINet),以提高阳性点识别准确性。首先,在特征融合部分引入自上而下结构,使得下层特征在顶层被更有效地利用。在自上而下结构中,使用通道注意力来分配荧光图像通道权重,并使用空间注意力来分配特征图中荧光图像像素相应权重,使得特征映射能够更好地响应荧光图像特征。然后,在RPN中使用自适应交并比IOU计算阳性点包围框置信度,减少阳性点信息丢失可能性。最后,ROI Align将荧光图像候选区域中阳性点特征重新固定尺寸后,输入至全连接层和全卷积层,进行类别与回归框回归,输出阳性点识别结果。本文提出的HDFINet网络具有较高识别率,可以有效地实现荧光图像阳性点识别,与YOLOv4、VF-Net、GROIE相比,本文方法综合指标F1最高,相比于经典的深度学习网络Mask R-CNN网络,本方法对阳性点识别真阳性率提高了1.13%,阳性预测值提高了0.36%,综合指标F1的值提高了0.75%。本文提出的HDFINet网络具有良好的识别性能,能够有效识别荧光图像阳性点,对其他荧光图像分析研究具有参考价值。 展开更多
关键词 dpcr 深度学习 荧光图像 阳性点
在线阅读 下载PDF
改进的K-Means高通量dPCR荧光图像分类算法 被引量:2
3
作者 孙刘杰 庞茂然 《包装工程》 CAS 北大核心 2022年第7期244-253,共10页
目的 为实现高通量dPCR荧光图像阳性点高精确度分类,提出一种改进的K-means高通量dPCR荧光图像分类算法。方法 首先,将预处理后的荧光图像进行像素灰度值统计,依据图像亮度自适应选择波峰波谷作为聚类中心,通过马氏距离度量确定像素簇类... 目的 为实现高通量dPCR荧光图像阳性点高精确度分类,提出一种改进的K-means高通量dPCR荧光图像分类算法。方法 首先,将预处理后的荧光图像进行像素灰度值统计,依据图像亮度自适应选择波峰波谷作为聚类中心,通过马氏距离度量确定像素簇类;然后,将粗分类结果进行开、闭运算及删除小面积对象等形态学处理;最后,利用3次连通域统计方法完成细分类、位置标识和计数。结果 选取4种通道825幅荧光图像进行检验,平均精确率达到99.06%,召回率达到98.97%,分类效果良好。结论 文中提出的改进K-means分类算法可以实现对高通量dPCR荧光图像的高精度分类和计数,对其他荧光图像分类识别具有一定借鉴意义。 展开更多
关键词 dpcr 荧光图像 K均值 阳性点计数
在线阅读 下载PDF
应用于dPCR基因芯片的荧光精缩无限远物镜设计 被引量:7
4
作者 陈诚 郑继红 +1 位作者 万新军 孙刘杰 《光学技术》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期518-525,共8页
数字聚合酶链式反应(dPCR)技术在生物医疗领域具有非常重要的应用价值,为了进一步投入临床诊断和病原体检测中需要在光学检测系统的检测效率和准确性方面取得进展。针对dPCR检测需求,使用ZEMAX软件设计了无限远消色差荧光精缩物镜。镜... 数字聚合酶链式反应(dPCR)技术在生物医疗领域具有非常重要的应用价值,为了进一步投入临床诊断和病原体检测中需要在光学检测系统的检测效率和准确性方面取得进展。针对dPCR检测需求,使用ZEMAX软件设计了无限远消色差荧光精缩物镜。镜头物方数值孔径为0.1,整体放大倍率为-0.65倍,可对Φ为34.9mm的物体进行成像,物方工作距离105.3mm,像方传递函数在70lp/mm处高于0.73,相对畸变小于0.4%;镜头设计可以同时满足大视场高分辨率的荧光多通道探测要求;基于无限远荧光显微成像技术,镜头可一次性检测位于28mm×18mm基因芯片上2万个反应通道,克服现有设备拼接成像的弊端并提高检测效率。 展开更多
关键词 应用光学 光学设计 荧光成像系统 高通量dpcr基因芯片
原文传递
一种高通量dPCR荧光图像自适应增强算法 被引量:4
5
作者 唐艳 孙刘杰 王文举 《包装工程》 CAS 北大核心 2019年第11期218-224,共7页
目的为了改善荧光图像背景光照不均匀和对比度低的问题,提出一种荧光图像自适应亮度校正和低对比度增强算法。方法根据光照成像原理,利用引导滤波提取出荧光图像的光照分量,通过改进的二维Gamma函数动态校正背景光照,利用Top-hat变换分... 目的为了改善荧光图像背景光照不均匀和对比度低的问题,提出一种荧光图像自适应亮度校正和低对比度增强算法。方法根据光照成像原理,利用引导滤波提取出荧光图像的光照分量,通过改进的二维Gamma函数动态校正背景光照,利用Top-hat变换分离出校正后的前景和背景,对前景进行自适应直方图均衡化,以实现荧光图像自适应增强的目的。结果对比传统算法,文中算法处理后的图像背景光照均匀,对比度增强效果明显,其中标准差平均提高了9.4倍,平均梯度平均提高了1.2倍,信息熵平均提高了0.2倍。结论文中算法可以改善高通量dPCR荧光图像背景光照不均匀性,提高图像对比度,突出图像中隐藏的细节,对其他荧光图像处理也具有参考价值。 展开更多
关键词 dpcr 荧光图像 亮度校正 对比度增强
在线阅读 下载PDF
转基因大豆MON87701品系qPCR和3D-dPCR检测方法的建立 被引量:5
6
作者 温洪涛 杨洋 +4 位作者 丁一佳 张晓磊 关海涛 李亮 张瑞英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期212-219,共8页
转基因大豆MON87701是由孟山都公司研发的商业化抗虫大豆品系,目前已在17个国家广泛应用。为建立适用于MON87701大豆的高效检测方法,本研究基于实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR, qPCR)和芯片式数字PCR(3D digita... 转基因大豆MON87701是由孟山都公司研发的商业化抗虫大豆品系,目前已在17个国家广泛应用。为建立适用于MON87701大豆的高效检测方法,本研究基于实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR, qPCR)和芯片式数字PCR(3D digital PCR, 3D-dPCR)平台,对44种不同转基因材料进行测试,建立双重定量检测方法。研究结果显示:只在转基因大豆MON87701样品中获得了阳性结果,证实该方法中引物和探针组合具有较高的特异性。进一步对2%、0.9%、0.09%和0.02%不同含量的MON87701转基因大豆进行定量测试,建立的qPCR和3D-dPCR两种方法的定量限均达到0.09%,检出限均达到0.02%,两者并无明显差别,但由于3D-dPCR和qPCR相比不需要标准物质制作标准曲线,并且对DNA提取质量要求更低,因此使用起来更加便捷高效,为转基因检测提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 转基因大豆 MON87701 定量检测 qPCR 3D-dpcr
原文传递
高通量dPCR基因芯片荧光激发测控系统的研制
7
作者 李龙成 孙刘杰 陆春生 《光学仪器》 2019年第6期71-78,共8页
为了解决高通量数字聚合酶链式反应(dPCR)基因芯片荧光激发问题,设计了一套荧光激发测控系统。系统根据荧光染料的激发光谱特性,选择大功率窄带LED作为荧光激发光源,并通过STM32微处理器系统进行控制。该荧光激发系统有FAM、HEX和ROX三... 为了解决高通量数字聚合酶链式反应(dPCR)基因芯片荧光激发问题,设计了一套荧光激发测控系统。系统根据荧光染料的激发光谱特性,选择大功率窄带LED作为荧光激发光源,并通过STM32微处理器系统进行控制。该荧光激发系统有FAM、HEX和ROX三个荧光激发通道,各通道LED激发功率能够分别调节。系统最大输出电流为8 A,单通道最大输出功率为3 W,调节精确度<1.0%,系统一次可完成dPCR基因芯片9 600个微液滴的荧光激发和采集。测试实验结果表明,系统达到了设计指标和应用需求。 展开更多
关键词 数字聚合酶链式反应(dpcr) LED光源 荧光激发 测控系统
在线阅读 下载PDF
禽流感病毒H7和N2亚型nano-dPCR检测方法的建立和应用 被引量:2
8
作者 李丹 谢芝勋 +7 位作者 李孟 罗思思 张民秀 谢丽基 华俊 粟永春 翟国胜 黄娇玲 《山西农业科学》 2023年第6期709-715,共7页
为建立一种同时检测H7亚型和N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法,从GenBank中分别下载H7亚型AIV的HA基因序列和N2亚型AIV的NA基因序列,采用Primer 7.0和Oligo 6.0软件设计了2对特异性引物,通过对nano-dPCR反应条件进行... 为建立一种同时检测H7亚型和N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法,从GenBank中分别下载H7亚型AIV的HA基因序列和N2亚型AIV的NA基因序列,采用Primer 7.0和Oligo 6.0软件设计了2对特异性引物,通过对nano-dPCR反应条件进行优化确定最佳反应体系;利用优化好的反应体系开展nano-dPCR方法的特异性和敏感性试验;采集活禽市场家禽咽喉及泄殖腔拭子样品进行临床样品检测并进行验证。结果表明,成功建立了一种同时检测H7亚型(723 bp)和N2亚型(314 bp)AIV的nano-dPCR方法,该方法特异性良好,其他亚型禽流感病毒及常见禽类呼吸道病毒均未出现特异性的条带,H7亚型AIV和N2亚型AIV的最低核酸检测量分别达到了5×103、5×103拷贝/μL,其敏感性是普通双重PCR检测方法的10倍,其对临床样品检测结果准确率达到100%,可以用于禽流感临床样品鉴别诊断和日常防控监测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 双重纳米PCR H7亚型 N2亚型
在线阅读 下载PDF
数字PCR技术在动物疫病检测中的应用 被引量:2
9
作者 孟晓琴 赵淑娟 张晓霞 《中兽医医药杂志》 2025年第2期54-59,共6页
近年来,随着纳米技术和微流体技术的进步,数字PCR(dPCR)技术逐渐突破瓶颈,展现出快速发展的趋势。dPCR通过将反应体系分割为数万个微小独立反应单元,实现核酸模板的绝对定量分析,具有无需标准曲线、对抑制剂耐受性高、灵敏度高、特异性... 近年来,随着纳米技术和微流体技术的进步,数字PCR(dPCR)技术逐渐突破瓶颈,展现出快速发展的趋势。dPCR通过将反应体系分割为数万个微小独立反应单元,实现核酸模板的绝对定量分析,具有无需标准曲线、对抑制剂耐受性高、灵敏度高、特异性强、重复性好等显著优势。目前,dPCR在猪、牛、羊、禽等动物疫病检测中展现出应用潜力,能够检测早期感染或混合感染,支持流行病学研究,监测治疗效果,并实现病原体核酸浓度的绝对定量分析。然而,与qPCR相比,dPCR在寄生虫病检测中的灵敏度和准确性有待进一步提高。另外,高成本也在一定程度上限制了dPCR技术的大规模推广应用。随着技术的进一步发展和检测成本的降低,dPCR有望在临床诊断、流行病学研究和无症状携带病原动物的识别等领域发挥更重要的作用。 展开更多
关键词 数字PCR技术 动物疫病诊断 定量检测
原文传递
数字丹草分子定量检测技术的理论及应用探讨
10
作者 谭朝阳 孟蕾 刘塔斯 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第2期195-200,共6页
目前,中药的质量控制方法如性状鉴别、显微鉴别、理化分析、生物活性检测等,并不能完全满足中药质量控制的要求。基于数字PCR技术的特点,本文建立以特异序列拷贝数和内参序列拷贝数比值(R值)为质控指标的分子定量检测技术,命名为数字丹... 目前,中药的质量控制方法如性状鉴别、显微鉴别、理化分析、生物活性检测等,并不能完全满足中药质量控制的要求。基于数字PCR技术的特点,本文建立以特异序列拷贝数和内参序列拷贝数比值(R值)为质控指标的分子定量检测技术,命名为数字丹草分子检测技术。该技术可对药材掺杂进行定量分析,并可对复方制剂的投料量和生产工艺进行定量监测,符合中药以药味剂量用药的临床特点,能用于从药材到制剂中药全产业链产品的定量检测,为中药质量监控难题提供全新的解决方案。 展开更多
关键词 数字丹草 分子定量检测 中药质量控制 数字PCR
原文传递
数字PCR在动物疫病诊断领域的研究进展
11
作者 鄢青松 康东 +1 位作者 崔旭成 于钦磊 《吉林畜牧兽医》 2025年第11期163-165,共3页
动物疫病的有效监测与精准诊断是保障养殖业健康发展、维护公共卫生安全及食品安全的关键环节。数字PCR(dPCR)作为第三代PCR检测技术,是在传统聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)技术基础上发展起来的新型核酸定量检测方法。dPC... 动物疫病的有效监测与精准诊断是保障养殖业健康发展、维护公共卫生安全及食品安全的关键环节。数字PCR(dPCR)作为第三代PCR检测技术,是在传统聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)技术基础上发展起来的新型核酸定量检测方法。dPCR技术能够实现高灵敏度水平的核酸检测,甚至可达到单分子分析级别。近年来,dPCR技术飞速发展,凭借其绝对定量、高灵敏度和高特异性等优势,在动物疫病诊断领域展现出巨大潜力,为动物疫病的精准防控提供了新的技术手段。本文详细介绍了dPCR技术的原理、分类及其在病毒性、细菌性、寄生虫性等动物疫病诊断中的研究进展,并分析了dPCR技术的优势及不足,以期为未来dPCR技术的应用提供重要的理论指导。 展开更多
关键词 dpcr 动物疫病诊断 病毒性疫病 细菌性疫病 寄生虫性疫病
在线阅读 下载PDF
数字PCR技术的发展和应用 被引量:46
12
作者 詹成 燕丽 +4 位作者 王琳 金玉麟 陈力 时雨 王群 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期786-789,共4页
数字PCR(digital PCR,dPCR)技术作为一种全新的核酸检测方法,通过把反应体系均分到大量反应单元中独立地进行PCR,并根据泊松分布和阳性比例来计算核酸数量。目前dPCR主要分为微滴式和芯片式两种。与传统PCR技术相比,dPCR具有高灵敏度、... 数字PCR(digital PCR,dPCR)技术作为一种全新的核酸检测方法,通过把反应体系均分到大量反应单元中独立地进行PCR,并根据泊松分布和阳性比例来计算核酸数量。目前dPCR主要分为微滴式和芯片式两种。与传统PCR技术相比,dPCR具有高灵敏度、高精确度、高耐受性和绝对定量的优点。因此,dPCR技术在近年来得到了迅速的发展,广泛地应用于稀有突变检测、拷贝数变异分析和复杂样本基因表达检测等方面。 展开更多
关键词 数字PCR 微滴式dpcr 芯片式dpcr 突变检测 拷贝数变异 基因表达
在线阅读 下载PDF
犬巴贝斯虫和犬埃立克体双重纳米PCR方法的建立及初步应用
13
作者 梁谦学 朱正 +4 位作者 王博永 李连燕 吴文德 李恭贺 郑喜邦 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期90-95,共6页
旨在建立一种同时检测犬巴贝斯虫(Babesia canis)和犬埃立克体(Ehrlichia canis)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法。以疑似犬巴贝斯虫病和埃立克体病血样DNA为模板,用常规双重PCR和双重纳米PCR检测犬巴贝斯虫18S rRNA和犬埃立克体16S rRNA... 旨在建立一种同时检测犬巴贝斯虫(Babesia canis)和犬埃立克体(Ehrlichia canis)的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法。以疑似犬巴贝斯虫病和埃立克体病血样DNA为模板,用常规双重PCR和双重纳米PCR检测犬巴贝斯虫18S rRNA和犬埃立克体16S rRNA,并对PCR的退火温度和引物浓度等参数进行了优化。结果显示,双重纳米PCR方法具有良好特异性和灵敏性,与其他4种犬常见病原体无交叉反应,对犬巴贝斯虫和犬埃立克体的最低核酸检测量分别为2.07×10^(3)和1.92×10^(3)copies/μL,其灵敏性比常规PCR高100倍。为了解南宁地区犬巴贝斯虫和犬埃立克体的流行情况,采用该方法对来自南宁市5家宠物医院的152份血清样品进行了检测。结果显示,犬巴贝斯虫和犬埃立克体感染率分别为2.63%和9.87%,混合感染率为1.32%。该双重纳米PCR方法为犬巴贝斯虫和埃立克体病早期快速诊断提供了新方法。 展开更多
关键词 双重纳米PCR 犬巴贝斯虫 犬埃立克体 病原检测
在线阅读 下载PDF
基于慢病毒载体系统的新型HIV-1基因型耐药检测质控品的制备与评价
14
作者 韩頔 张鑫 +4 位作者 姚均 刘浩东 赵志艳 韩博学 金聪 《中国艾滋病性病》 北大核心 2025年第3期242-248,共7页
目的基于HIV-1慢病毒载体(LV)系统制备一种新型HIV-1基因型耐药检测质控品,并对其均一性和稳定性进行评价。方法采用改良的四质粒LV系统包装含有耐药突变K103 N的HIV-1假病毒(PsV)。通过RTPCR和测序方法鉴定携带耐药突变K103 N的HIV-1 ... 目的基于HIV-1慢病毒载体(LV)系统制备一种新型HIV-1基因型耐药检测质控品,并对其均一性和稳定性进行评价。方法采用改良的四质粒LV系统包装含有耐药突变K103 N的HIV-1假病毒(PsV)。通过RTPCR和测序方法鉴定携带耐药突变K103 N的HIV-1 PsV包装成功。使用HIV-1阴性血浆作为基质稀释HIV-1 PsV上清液制备HIV-1 PsV耐药检测质控品,并使用反转录数字PCR(RT-dPCR)和耐药位点检测方法对质控品的均一性和稳定性进行评价。结果RT-PCR可扩增出PsV颗粒中插入的含有耐药突变K103 N的pol区基因序列(2648 bp),对扩增产物的测序结果与预期结果一致。从PsV制备的质控品中随机抽取10份使用RT-dPCR检测VL,结果差异无统计学意义(P>0.05);并且使用耐药检测方法均可检出耐药突变K103 N,表明质控品具有良好的均一性。质控品分别在25℃、4℃、-20℃下保存28 d或反复冻融5次,RT-dPCR检测的VL无显著性下降,并且耐药检测均可检出耐药突变K103 N,表明质控品具有良好稳定性。结论基于改良的四质粒LV系统制备的新型HIV-1 PsV耐药质控品具有良好的均一性和稳定性,可以实现对HIV-1基因型耐药检测全过程的质量控制。 展开更多
关键词 艾滋病病毒 慢病毒载体 假病毒 耐药检测质控品 反转录数字聚合酶链式反应
原文传递
基于数字PCR和二代测序技术对脓毒血症诊断的研究进展
15
作者 史健 雷静 +2 位作者 刘泽世 熊朝亮 耿燕 《分子诊断与治疗杂志》 2025年第2期197-200,共4页
脓毒血症迄今仍是全球关注的重点难题,早期明确病原学诊断是正确诊治脓毒血症的关键。血培养作为血流感染诊断的“金标准”,因其耗时长且不能常规培养苛养菌和病毒,难以满足临床快速诊断需求。数字PCR作为高灵敏度、高耐受性、无需标准... 脓毒血症迄今仍是全球关注的重点难题,早期明确病原学诊断是正确诊治脓毒血症的关键。血培养作为血流感染诊断的“金标准”,因其耗时长且不能常规培养苛养菌和病毒,难以满足临床快速诊断需求。数字PCR作为高灵敏度、高耐受性、无需标准曲线即可对病原体核酸绝对定量分析的新兴检测技术,可实现对病原体及部分耐药基因的快速检测。同时,二代测序技术无需培养,可以直接对患者标本核酸进行无偏倚检测、具有广泛的病原体检测范围、且检测结果受患者使用抗菌药物影响较小。近年来,数字PCR和二代测序在脓毒血症诊断方面得到广泛研究,因此,本文就数字PCR和二代测序技术的特点及在脓毒血症诊断中的应用进展进行综述,以期为临床提供新思路。 展开更多
关键词 脓毒血症 二代测序 数字PCR 感染 病原体
暂未订购
脱氧核糖核酸定量的潜在基准方法研究进展 被引量:4
16
作者 李亮 张秀杰 +2 位作者 宛煜嵩 楚燕春 金芜军 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期158-163,共6页
脱氧核糖核酸定量分析是食品安全检验、医疗诊断、转基因检测与病原微生物鉴定等相关领域的基础。常见的定量方法种类繁多,如紫外分光光度法、荧光染料法和实时荧光定量PCR法等等,各有所长,但测量结果缺乏可靠性、可比性和一致性。随着... 脱氧核糖核酸定量分析是食品安全检验、医疗诊断、转基因检测与病原微生物鉴定等相关领域的基础。常见的定量方法种类繁多,如紫外分光光度法、荧光染料法和实时荧光定量PCR法等等,各有所长,但测量结果缺乏可靠性、可比性和一致性。随着研究的深入与应用要求的提高,基准方法成为了核酸分析以及核酸测量能力评估的关键。本文综述了近年来三种成为潜在脱氧核糖核酸定量基准方法的研究发展,评述了各种方法的技术优势、不足与应用潜力,以期为其相关研究和利用提供参考。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸定量 基准方法 IDMS ICP—OES MS dpcr
在线阅读 下载PDF
交叉活性探针确定单核苷酸多态性相关的拷贝数目变异
17
作者 胡笑梅 周晨 +5 位作者 张品正 陈阳 李佳文 马雨凯 王佳琪 郭志义 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第6期895-902,共8页
单核苷酸多态性相关的拷贝数变异(copy number variant, CNV)在体外诊断和精准治疗中占据着重要地位,而其常用的荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)无法区分具有单核苷酸差异的CNV。本研究利用交叉活性探针定... 单核苷酸多态性相关的拷贝数变异(copy number variant, CNV)在体外诊断和精准治疗中占据着重要地位,而其常用的荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)无法区分具有单核苷酸差异的CNV。本研究利用交叉活性探针定性与定量检测具有单核苷酸差异的拷贝数变异(copy number variant, CNV)。rs76711854所在以及下游9 514 bp长度片段通过PCR方法扩增获得,其基因型通过一代测序确认。此SNP的定性与定量分别通过探针法的定量PCR和数字PCR方法检测。rs76711854所在的CNV在针对G基因型探针出现分层,并在针对GA不同基因型的探针中均表现出A/G比例2:1。检测长度超过其下游9 kb以及更长的92 kb和203 kb的DNA片段,发现此CNV存在于前列腺癌细胞系DU145中,而子宫内膜癌细胞系中此203 kb范围拷贝数一致。本研究开发出以rs76711854位点的G/A片段为例,通过不同通道交叉定量检测的CNV方法,并推断DU145细胞的此处为多拷贝。 展开更多
关键词 数字聚合酶链式反应 拷贝数变异 单核苷酸多态性 交叉扩增活性
原文传递
马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立 被引量:10
18
作者 雷程红 陈凯云 +6 位作者 徐新峰 胡都斯·艾尔肯 徐军 白梅花 史茜 肖媛媛 王科珂 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1299-1306,共8页
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探... 试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(EHV-1) 3D数字PCR(3D-dpcr) 绝对定量
在线阅读 下载PDF
iPSC衍生细胞治疗产品中的iPSC残留控制策略的实践与思考
19
作者 李锐 李伟 +7 位作者 丁晓辉 高洁丽 杨华 赵世坤 方淑平 沈玉红 王立群 王越 《中国食品药品监管》 2025年第9期162-171,共10页
诱导多能干细胞(iPSC)衍生的细胞治疗产品是一类新型的细胞药物,其利用iPSC高度自我更新、多向分化潜能等优势,具备通用化、量产化的开发潜力,并可通过基因编辑进一步强化细胞功能,具有较好的成药和应用前景。由于iPSC具有多能干性,如... 诱导多能干细胞(iPSC)衍生的细胞治疗产品是一类新型的细胞药物,其利用iPSC高度自我更新、多向分化潜能等优势,具备通用化、量产化的开发潜力,并可通过基因编辑进一步强化细胞功能,具有较好的成药和应用前景。由于iPSC具有多能干性,如在其衍生细胞产品中残留有未分化或未完全分化的iPSC,可能有形成畸胎瘤的风险,这是该类新型产品的监管关注重点之一,但就相关的分析方法及控制策略目前尚未形成行业共识。本研究针对iPSC衍生细胞治疗产品中的iPSC残留控制的监管需求,进行了基于新型数字聚合酶链式反应(PCR)技术的分析方法的开发、验证、应用及评估,并基于课题实践经验形成了对iPSC残留控制策略的建议,以期帮助研发企业建立适宜的分析方法用于产品质量控制和风险评估,加速iPSC衍生细胞治疗产品的开发、申报及其监管体系的完善,促进产业高质量发展。 展开更多
关键词 诱导多能干细胞 细胞治疗产品 诱导多能干细胞残留 数字聚合酶链式反应 控制策略
暂未订购
数字PCR技术在病原生物学研究中的应用 被引量:2
20
作者 陈爱平 《海峡预防医学杂志》 CAS 2017年第3期16-19,共4页
数字聚合酶链式反应(dPCR)作为一种新的核酸检测技术,在近几年生物医学研究中逐渐得到广泛应用。本文简单介绍dPCR原理及应用概况,重点阐述该技术目前在病原生物学研究领域的应用,让更多专业人员了解dPCR,促进该技术更多地用于病原生物... 数字聚合酶链式反应(dPCR)作为一种新的核酸检测技术,在近几年生物医学研究中逐渐得到广泛应用。本文简单介绍dPCR原理及应用概况,重点阐述该技术目前在病原生物学研究领域的应用,让更多专业人员了解dPCR,促进该技术更多地用于病原生物学研究。 展开更多
关键词 病原微生物学 数字聚合酶链式反应(dpcr) 核酸检测 病原生物学
原文传递
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部