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基于Smad3的抗瘢痕增生药物高通量筛选体系的构建及效果评价 被引量:1
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作者 唐辉 梁晚益 +2 位作者 刘旭盛 李金玺 黄跃生 《中国美容医学》 CAS 2006年第5期521-524,i0003,共5页
目的:构建Smad3反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统,作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。方法:分别以EGFP、d2EGFP为报告基因,neor为筛选基因,构建以4×成纤维细胞α2Ⅰ型前胶原(COL1A2)基序为增强子、SV40为启动子的... 目的:构建Smad3反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统,作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。方法:分别以EGFP、d2EGFP为报告基因,neor为筛选基因,构建以4×成纤维细胞α2Ⅰ型前胶原(COL1A2)基序为增强子、SV40为启动子的报告基因载体p4COL1A2-EGFP和p4COL1A2-d2EGFP,并分别稳定转染NIH3T3细胞,获得Smad3反应性报告细胞株NIH3T3-d2EGFP和NIH3T3-EGFP。分别向两种细胞株中加入TGF-β1,比较不同时相点d2EGFP和EGFP的表达。应用Smad3“圈套”寡核苷酸(TFD)转染NIH3T3-d2EGFP,加入TGF-β1,观察TFD对TGF-β1诱导d2EGFP表达的拮抗作用。结果:NIH3T3-d2EGFP是较理想的Smad3反应性报告细胞株,Smad3TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP的表达具有明显的拮抗作用。结论:Smad3反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测Smad3的活性变化。 展开更多
关键词 SMAD3 COL1A2基序 不稳定增强型绿色荧光蛋白 圈套
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The Transcription Factors GATA-1 and GATA-4 Have Opposite Effects on DNA Expression Driven by an Amh Promoter
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作者 David W. Dresser 《American Journal of Molecular Biology》 2014年第3期150-158,共9页
An Amh promoter driving expression of a reporter gene (d2EGFP) has been used to analyze the role of two specific promoter transcription factor binding elements. In addition a downstream (3’) enhancer (DE) was also in... An Amh promoter driving expression of a reporter gene (d2EGFP) has been used to analyze the role of two specific promoter transcription factor binding elements. In addition a downstream (3’) enhancer (DE) was also investigated. The transcription factors GATA-1 and GATA-4 had opposite effects, the former being incremental and the latter decremental. The quantitative balance between these two factors may provide a degree of control over the level of gene expression. 展开更多
关键词 SMAT-1 Mouse Pre-Pubertal SERTOLI In VITRO AMH PROMOTER d2egfp Transcription Factors GATA-1 GATA-4
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核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用 被引量:4
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作者 王付龙 梁华平 +2 位作者 刘昕 徐祥 王正国 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期78-83,共6页
建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本... 建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体 p4κB EGFP和 p4κB d2EGFP .两载体分别与p6 5载体瞬时共转染HEK2 93细胞 ,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达 ,证明 p4κB d2EGFP是较理想的NF κB反应性绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因载体 .将 p4κB d2EGFP稳定转染HEK2 93细胞 ,从而获得NF κB反应性报告细胞株HEK d2EGFP .应用NF κB“圈套”寡核苷酸 (TFD)与 p6 5载体瞬时共转染HEK d2EGFP ,1mg/L NF κB和 2mg/LNF κBTFD组对p6 5蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用 .结果表明 ,NF κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF κB的活性变化 . 展开更多
关键词 核因子-ΚB 不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统 基因表达调控 寡核苷酸
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