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酿酒酵母耐铜基因CUP1的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 何勇强 陶勤南 +2 位作者 唐纪良 臧宁 小畑仁 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2000年第4期233-238,共6页
酿酒酵母铜金属硫蛋白 ( copper metallothionein,Cu MT) ,属于第 II型金属硫蛋白 ,Cu MT由酿酒酵母耐铜基因 CUP1编码 ,由 61个氨基酸残基组成 ,其中半胱氨酸残基 1 3个 ,占 Cu MT总氨基酸数的 2 1 .3%。 Cu MT与铜离子有较强的结合力 ... 酿酒酵母铜金属硫蛋白 ( copper metallothionein,Cu MT) ,属于第 II型金属硫蛋白 ,Cu MT由酿酒酵母耐铜基因 CUP1编码 ,由 61个氨基酸残基组成 ,其中半胱氨酸残基 1 3个 ,占 Cu MT总氨基酸数的 2 1 .3%。 Cu MT与铜离子有较强的结合力 ,在酵母细胞中主要参与过量铜的解毒作用。本研究通过PCR方法 ,从酵母基因组 DNA中扩增出了 CUP1基因 ,克隆于 p UC1 9的多克隆位点。扩增片段长 4 86bp,包括 ORF及其部分下游序列。所得克隆与发表序列的 ORF一致 ,推导出的氨基酸序列与发表序列完全一样。用于植物转 CUP1基因用的表达载体已构建完毕 ,分别命名为 p BI CUP1和 p CM CUP1。对植物 (如苎麻、水稻、水生植物等 ) 展开更多
关键词 植物表达载体 cup1基因 克隆 土壤 重金属污染
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酵母耐铜基因CUP1改良荧光假单胞菌耐铜性研究初报 被引量:3
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作者 姜伯乐 吴圣进 何勇强 《中国农学通报》 CSCD 2007年第9期96-99,共4页
利用根际促生菌(PGPR)荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)等微生物的生物修复作用可治理土壤重金属污染。酿酒酵母耐铜基因CUP1编码铜金属硫蛋白(Cu-MT),对铜有很高的亲和性,可拮抗重金属铜毒性。为提高荧光假单胞菌的生物修复能力... 利用根际促生菌(PGPR)荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)等微生物的生物修复作用可治理土壤重金属污染。酿酒酵母耐铜基因CUP1编码铜金属硫蛋白(Cu-MT),对铜有很高的亲和性,可拮抗重金属铜毒性。为提高荧光假单胞菌的生物修复能力,将酿酒酵母耐铜基因CUP1克隆至荧光假单胞菌。通过引物设计,将SD序列添加至酵母耐铜基因CUP1编码序列前端,PCR扩增得到约200bp的CUP1片段,克隆至测序载体pUC19,经测序证明正确后,胶回收CUP1片段连接到具有广泛宿主范围的柯斯质粒pLAFR3上,经三亲接合转移至荧光假单胞菌AS1.1381,得到重组菌株AS1.1381/pL3CUP1。铜实验表明,重组菌株AS1.1381/pL3CUP1的抗铜能力(6mM Cu2+)显著高于AS1.1381/pLAFR3(4.5mMCu2+),重组菌株抗铜性得到提高。 展开更多
关键词 生物修复 重金属污染 荧光假单胞菌 金属硫蛋白 cup1基因
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CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体的构建
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作者 阳辛凤 徐林 +3 位作者 弓淑芳 郭安平 孔华 贺立卡 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期139-144,共6页
为了赋予工业酿酒酵母对淀粉和纤维素的降解活性,提高酿酒酵母对粗木薯粉进行酒精发酵时的酒精产率;另一方面,为了解决工业酿酒酵母不适于使用营养缺陷型筛选标记对转化子进行筛选的问题,以及避免引入抗药性标记基因带来的安全性问题,... 为了赋予工业酿酒酵母对淀粉和纤维素的降解活性,提高酿酒酵母对粗木薯粉进行酒精发酵时的酒精产率;另一方面,为了解决工业酿酒酵母不适于使用营养缺陷型筛选标记对转化子进行筛选的问题,以及避免引入抗药性标记基因带来的安全性问题,构建了以抗铜蛋白基因CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体。以载体pYES2-PMF-rDNA为基础,以新的筛选标记基因CUP1替换原有的尿嘧啶Ura-基因,得到载体pYES2M。再顺序插入葡聚糖内切酶基因eg3、葡萄糖淀粉酶基因ga1和β-葡萄糖苷酶基因bgl1,构建得到以CUP1为筛选标记的酵母整合型三价表达载体pYES2M-eg3-ga1-bgl1,其中每个基因都具有独立而完整的表达盒,包括启动子、信号肽和终止子,从而实现多基因单表达载体一次转化。 展开更多
关键词 酿酒酵母 载体 cup1 多基因转化
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酵母CUP1基因的结构及其蛋白质鳌合金属离子功能的研究进展
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作者 颉孝贤 王起山 +2 位作者 陈振亮 马育芳 潘玉春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期62-67,共6页
酵母CUP1编码的蛋白质属于金属硫蛋白,该蛋白质富含半胱氨酸,大小为61个氨基酸,分子质量约为6165u。CUP1蛋白能够鳌合金属铜离子,使得酵母对铜离子产生耐受力。在铜等金属离子的诱导下,酵母CUP1基因的启动子与转录因子ACE1等结合力增强... 酵母CUP1编码的蛋白质属于金属硫蛋白,该蛋白质富含半胱氨酸,大小为61个氨基酸,分子质量约为6165u。CUP1蛋白能够鳌合金属铜离子,使得酵母对铜离子产生耐受力。在铜等金属离子的诱导下,酵母CUP1基因的启动子与转录因子ACE1等结合力增强,从而在转录水平上的表达量大大提高。作者对酵母CUP1基因的研究进行了综述,主要包括CUP1基因的结构、其蛋白质鳌合金属离子的作用、启动子相关的分析及CUP1基因特别是其启动子在转基因中的应用,为深入研究CUP1基因的生理机制奠定基础,同时也为其在转基因中的应用,特别是在转CUP1基因动、植物生产中的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 酵母 cup1基因 鳌合 启动子 转基因
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高灵敏度铜抗性酿酒酵母表达系统的构建与应用 被引量:2
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作者 盛冠一 诸葛斌 +4 位作者 宗红 陆信曜 方慧英 宋健 诸葛健 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期357-362,共6页
利用PCR-mediated Technique对酿酒酵母W303-1A金属硫蛋白基因(cup1)进行敲除,获得一株铜离子敏感型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae W303-1A cup1△),其对Cu2+抑制浓度由1.2 mmol/L降为0.08 mmol/L;以pYX212载体为基本构架,以S.cere... 利用PCR-mediated Technique对酿酒酵母W303-1A金属硫蛋白基因(cup1)进行敲除,获得一株铜离子敏感型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae W303-1A cup1△),其对Cu2+抑制浓度由1.2 mmol/L降为0.08 mmol/L;以pYX212载体为基本构架,以S.cerevisiae W303-1A cup1△为宿主菌,构建了以cup1作为筛选标记的pYX212M表达系统,并成功表达了绿色荧光蛋白基因(gfp),从而实现了高灵敏度铜抗性酿酒酵母表达系统的构建与应用.本研究构建的高灵敏度铜抗性酿酒酵母表达系统不仅廉价、安全,而且丰富了酵母的表达系统,同时对微生物的铜抗性机理及生物修复功能的研究具有指导意义. 展开更多
关键词 酿酒酵母 PCR-mediated Technique cup1 铜抗性 绿色荧光蛋白
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柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1的分离纯化 被引量:2
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作者 陈晴 岳诗雨 +1 位作者 张晓楠 何韶衡 《中华临床免疫和变态反应杂志》 CAS 2021年第1期3-6,共4页
目的提取和分离纯化柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1。方法使用40 mmol/L NH 4HCO 3缓冲液作为提取液对柏树花粉致敏蛋白进行粗提取,利用离子交换层析初步纯化其主要致敏蛋白Cup a 1,收集400 mmol/L NH 4HCO 3组分的洗脱液,通过十二烷基硫... 目的提取和分离纯化柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1。方法使用40 mmol/L NH 4HCO 3缓冲液作为提取液对柏树花粉致敏蛋白进行粗提取,利用离子交换层析初步纯化其主要致敏蛋白Cup a 1,收集400 mmol/L NH 4HCO 3组分的洗脱液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对收集的组分进行鉴定。结果柏树花粉有20余条蛋白区带,通过离子交换层析纯化出相对分子质量43000的蛋白组,主要集中在Ⅲ峰。结论初步分离纯化及鉴定了柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1,为临床过敏原致病机制的诊断和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 柏树花粉 Cup a 1 离子交换层析
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