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CsgRNA减少APOBECs在Cas9-D10A介导的基因编辑过程中引入的突变
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作者 任蓉蓉 陈红全 《温州医科大学学报》 2021年第9期724-728,共5页
目的:通过csgRNA策略降低APOBECs蛋白对Cas9-D10A/sgRNA系统进行基因编辑时产生的突变。方法:针对Cas9-D10A/sgRNA4和Cas9-D10A/sgFANCF打靶位点的非切割链设计csgRNA并对csgRNA的碱基长度和空间结合位置进行精细优化,在293FT-APOBEC3B... 目的:通过csgRNA策略降低APOBECs蛋白对Cas9-D10A/sgRNA系统进行基因编辑时产生的突变。方法:针对Cas9-D10A/sgRNA4和Cas9-D10A/sgFANCF打靶位点的非切割链设计csgRNA并对csgRNA的碱基长度和空间结合位置进行精细优化,在293FT-APOBEC3B过表达细胞系检测基因突变效率。结果:与对照组比,在sgRNA4和sgFANCF打靶位点上,csgRNA明显降低Cas9-D10A进行基因编辑时产生的切割条带;通过对csgRNA条件优化,发现当csgRNA长度为16 bp且作用位置向PAM端延伸2个碱基或csgRNA长度为20 bp且作用位置向PAM端延伸4个碱基时,其降低APOBEC-3B对Cas9-D10A/sgRNA产生的突变效果较好。结论:CsgRNA策略成功降低了APOBEC-3B对Cas9-D10A/sgRNA系统进行基因编辑时产生的突变。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 APOBECs csgrna 基因突变
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