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Bt cry1Ia8抗虫基因对结球甘蓝的转化及其表达 被引量：14
1
作者 崔磊 杨丽梅 +7 位作者 刘楠 郎志宏 刘玉梅 庄木 张扬勇 张友军 黄大昉 方智远 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1161-1168,共8页
以结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)的下胚轴和具柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ia8导入结球甘蓝中,共获得38株卡那霉... 以结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)的下胚轴和具柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ia8导入结球甘蓝中,共获得38株卡那霉素抗性植株。PCR和Southern blot检测证实cry1Ia8基因已经成功导入并整合到甘蓝的基因组中;RT-PCR和Western blot检测表明,cry1Ia8基因在转录和翻译水平有一定的表达;转化植株叶片离体饲喂敏感小菜蛾(Plutella xylostella)和对Cry1Ac蛋白表现抗性的小菜蛾的试验表明,该基因不仅对敏感小菜蛾有很强的抗性,对抗性小菜蛾也具有较强的抗性。 展开更多
关键词 结球甘蓝 小菜蛾 BT基因 cry1ia8 转基因 抗虫性
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Cry1Ba3、Cry1Ia8蛋白对Cry1Ac抗性小菜蛾的杀虫活性研究 被引量：10
2
作者 刘楠 王少丽 +3 位作者 宋福平 束长龙 高继国 张杰 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期66-70,共5页
利用2种苏云金芽胞杆菌原毒素Cry1Ba3、Cry1Ia8及其组合,分别对Cry1Ac抗性种群小菜蛾幼虫进行生物活性测定。结果表明Cry1Ba3、Cry1Ia8对2种目标试虫均有高毒力,LC50分别为0.2175、0.6706μg/mL;Cry1Ba3毒力3倍于Cry1Ia8。2种蛋白混配... 利用2种苏云金芽胞杆菌原毒素Cry1Ba3、Cry1Ia8及其组合,分别对Cry1Ac抗性种群小菜蛾幼虫进行生物活性测定。结果表明Cry1Ba3、Cry1Ia8对2种目标试虫均有高毒力,LC50分别为0.2175、0.6706μg/mL;Cry1Ba3毒力3倍于Cry1Ia8。2种蛋白混配的结果也表现出高毒力,LC50为0.4375μg/mL,没有显著的协同增效作用,也不存在拮抗。敏感与抗性小菜蛾种群生测结果统计分析比较,结果表明这2种蛋白及其组合与Cry1Ac并无交互抗性。 展开更多
关键词 小菜蛾 苏云金芽胞杆菌 Cry1Ba3 cry1ia8 Cry1Ac抗性
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转Cry1Ia基因抗虫大豆对鳞翅目靶标害虫的抗性分析 被引量：5
3
作者 单大鹏 王晓云 +3 位作者 洪志鹏 王子叶 冯广慧 孟凡立 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1-9,共9页
以转Cry1Ia基因抗虫大豆株系KE1为试验材料,分析其遗传稳定性及鳞翅目靶标害虫抗性,计算实验室内和田间环境下,甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、黏虫和大豆食心虫叶面积损失率、幼虫平均校正死亡率、平均体重抑制百分率和虫食率。结果表明,KE1株系... 以转Cry1Ia基因抗虫大豆株系KE1为试验材料,分析其遗传稳定性及鳞翅目靶标害虫抗性,计算实验室内和田间环境下,甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、黏虫和大豆食心虫叶面积损失率、幼虫平均校正死亡率、平均体重抑制百分率和虫食率。结果表明,KE1株系中目的基因Cry1Ia和标记基因Bar在T3~T5代中连续三代稳定遗传。KE1对靶标害虫斜纹夜蛾(S.litura)、甜菜夜蛾(S.exigua)、粘虫(M.separata)和大豆食心虫(Leguminivora glycinivorella Matsumura)等鳞翅目表现抗虫,对照植株垦农18表现感虫,说明在垦农18中Cry1Ia基因表达可提高受体垦农18对鳞翅目害虫抗虫水平。 展开更多
关键词 转cry1ia基因大豆 鳞翅目害虫 抗性鉴定
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利用荧光指示分子IeGFP比较vip3A和cry1Ia基因启动子活性 被引量：1
4
作者 高建华 欧阳春平 +7 位作者 钱红梅 刘小琼 郭俊佩 赵雄伟 王兴春 韩渊怀 李旭凯 侯思宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期617-626,共10页
苏云金芽孢杆菌(Bt)的Vip3A和Cry1Ia蛋白质序列无同源性,但具有其他相似的特征,例如在孢子形成早期合成,然后跨膜转运至胞外。本研究以新型融合荧光蛋白IeGFP为报告分子,比较vip3A(Pv)和cry1Ia基因(Pi)启动子的调控模式和活性。结果表明... 苏云金芽孢杆菌(Bt)的Vip3A和Cry1Ia蛋白质序列无同源性,但具有其他相似的特征,例如在孢子形成早期合成,然后跨膜转运至胞外。本研究以新型融合荧光蛋白IeGFP为报告分子,比较vip3A(Pv)和cry1Ia基因(Pi)启动子的调控模式和活性。结果表明,在大肠杆菌中,两者均为组成型启动子。通过荧光信号强度的比较发现,在大肠杆菌中,Pi活性显著强于乳糖操纵子调节基因启动子(PlacI,P<0.01),但比PlacI增强型突变体(PlacIq,P<0.01)和cry1Ac基因启动子(Pac,P<0.01)弱。在3个Bt启动子中,Pv活性最弱,接菌12 h后,与PlacI接近(P>0.05)。在Bt菌株中,Pv对IeGFP的表达调控与之前报道的Pi相似。启动子的Shine-Dalgarno(SD)序列与目的基因起始密码子(AUG)之间的间隔区域在调节细菌的蛋白质翻译效率方面发挥重要作用。本研究中构建的大部分Pv与Iegfp基因的间隔区域突变,均导致相应大肠杆菌和Bt细胞的荧光强度显著降低(P<0.05),说明融合荧光蛋白IeGFP具有较好的灵敏度。该研究不仅确定了2种启动子在Bt和大肠杆菌中的活性,而且验证了IeGFP指示弱启动子活性的可行性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 vip3A cry1ia 启动子活性 荧光强度
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Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达 被引量：2
5
作者 郭小琴 钱红梅 +3 位作者 郭俊佩 史宗勇 高建华 王兴春 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第3期101-105,共5页
[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼... [目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry1Ia-cry2Ab融合基因和cry2Ab-cry1Ia融合基因。另外,将Cry1Ia蛋白N端第一个α-螺旋(73个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry2Ab基因5'端,获得第三个融合基因cry1IaD73-cry2Ab。将3个基因分别插入pHT304载体,并由cry1Ac基因的启动子和终止子调控其在Bt细胞中表达。[结果]SDS-PAGE结果显示,Cry1Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在Bt细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152kDa、152kDa和144kDa。蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解。另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响。[结论]本研究构建了3种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1ia CRY2AB 融合蛋白 蛋白表达
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苏云金芽胞杆菌cry1Ia17基因克隆、表达的研究 被引量：1
6
作者 张庆丽 李海涛 +1 位作者 赵勇 高继国 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期93-97,共5页
根据cry1I类基因的全长序列设计引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BtMX2的总DNA为模板扩增出片段长为2.1kb的cry1I的全长基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pEB,转化大肠杆菌Rosetta菌株,诱导表达出81ku... 根据cry1I类基因的全长序列设计引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BtMX2的总DNA为模板扩增出片段长为2.1kb的cry1I的全长基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pEB,转化大肠杆菌Rosetta菌株,诱导表达出81ku的蛋白,编码的蛋白由720个氨基酸组成,该蛋白等电点为6.09,为弱酸性蛋白。与已知cry1Ia9基因的氨基酸一致性为99%,相差2个氨基酸。该基因的登录号为GU989199,已被国际基因命名委员会正式命名为cry1Ia17。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry1ia基因 克隆 表达
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Cry1Ia蛋白的表达与纯化 被引量：2
7
作者 郭小琴 钱红梅 +4 位作者 郭星 高佳丽 张义茹 高建华 王兴春 《山西农业科学》 2019年第5期748-750,769,共4页
苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌... 苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌株。在大肠杆菌中诱导Cry1Ia蛋白的表达,并与Bt中的表达产物进行比较。最后,利用Cry1Ia蛋白C端包含的组氨酸标签,对大肠杆菌表达的Cry1Ia蛋白进行纯化。结果显示,大肠杆菌中Cry1Ia蛋白随着表达时间的延长,产物积累显著,并且其表达量高于Bt菌株,因此,其更适宜生产完整的Cry1Ia蛋白。对大肠杆菌表达的Cry1Ia进行纯化,获得了理想的结果。研究构建了Cry1Ia蛋白的大肠杆菌表达体系,并成功对其进行纯化,可为进一步研究此类蛋白的杀虫活性和机制奠定基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 大肠杆菌 cry1ia 蛋白表达 蛋白纯化
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Cry1Ia蛋白N端信号肽对其蛋白表达量的影响 被引量：1
8
作者 郭俊佩 刘璇 +2 位作者 韩阜志 高建华 史宗勇 《山西农业科学》 2021年第6期694-698,共5页
Cry1Ia是苏云金芽孢杆菌表达的分泌型Cry杀虫蛋白。为了研究Cry1Ia蛋白N端信号肽(Iasp)区域对其蛋白表达量的影响,梯度删除了N端氨基酸序列,将这些缺失突变体基因接入p ET28a Del表达载体,并转化大肠杆菌BL21 Star(DE3)感受态细胞,得到... Cry1Ia是苏云金芽孢杆菌表达的分泌型Cry杀虫蛋白。为了研究Cry1Ia蛋白N端信号肽(Iasp)区域对其蛋白表达量的影响,梯度删除了N端氨基酸序列,将这些缺失突变体基因接入p ET28a Del表达载体,并转化大肠杆菌BL21 Star(DE3)感受态细胞,得到一系列缺失突变体,即Cry1Ia D5、Cry1Ia D10、Cry1Ia D13、Cry1Ia D16、Cry1Ia D24、Cry1Ia D32、Cry1Ia D44和Cry1Ia D73,分析其蛋白表达和m RNA热稳定性。结果显示,8种Cry1Ia蛋白突变体均成功表达,其中,Cry1Ia D32和Cry1Ia D44的表达量高于Cry1Ia,分别为Cry1Ia的1.43、1.12倍,Cry1Ia D13和Cry1Ia D16表达量与Cry1Ia基本持平,其余4种蛋白的表达量低于Cry1Ia;对m RNA起始密码子附近的核苷酸序列的二级结构进行预测发现,不同突变体该区域能够形成不同的茎环结构,且其热稳定性能具有一定的差异;进一步对蛋白相对表达量和m RNA结构热稳定性进行相关性分析表明,2个变量间无显著相关关系。研究结果可为揭示Iasp的功能奠定一定理论基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 大肠杆菌 cry1ia蛋白 N端信号肽 原核表达
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大肠杆菌Cry1Ia蛋白对BRL-3A细胞凋亡的影响
9
作者 杨健睿 张军 +1 位作者 邢雪梅 兰俊 《热带医学杂志》 2024年第11期1517-1521,共5页
目的 构建大肠杆菌晶体毒素(Cry)1Ia蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察Cry1Ia蛋白对BRL-3A细胞凋亡的影响。方法 将大肠杆菌Cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,将表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)star菌株,诱导Cry1Ia蛋白的... 目的 构建大肠杆菌晶体毒素(Cry)1Ia蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察Cry1Ia蛋白对BRL-3A细胞凋亡的影响。方法 将大肠杆菌Cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,将表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)star菌株,诱导Cry1Ia蛋白的表达并进行纯化。氯化钴处理大鼠BRL-3A细胞建立缺氧模型,分为空白组(未经任何处理)、对照组(仅接受氯化钴处理)、不同浓度干预组(氯化钴处理后分别加入0.3、1、3、10μg/mL浓度的Cry1Ia蛋白)。采用流式细胞术检测BRL-3A细胞凋亡情况,利用Western blot法检测核因子-κB(NF-κB)凋亡信号通路相关蛋白(NF-κB和Caspase3)表达水平。结果 大肠杆菌Cry1Ia蛋白表达载体构建成功,转入BL21(DE3)star菌株后经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达蛋白分子量约81 000 Mr。空白组细胞凋亡率明显低于对照组和不同浓度干预组,各组比较差异有统计学意义(F=18.642,P<0.001),且随着干预浓度的增加,凋亡率呈下降趋势。空白组细胞NF-κB信号通路NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组和不同浓度干预组,各组比较差异有统计学意义(F=20.518,P<0.001)。空白组细胞NF-κB信号通路Caspase3蛋白表达水平明显低于对照组和不同浓度干预组,各组比较差异有统计学意义(F=29.734,P<0.001),且随着干预浓度的增加,表达水平呈下降趋势。结论 大肠杆菌Cry1Ia蛋白可降低缺氧BRL-3A细胞凋亡,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路相关。 展开更多
关键词 大肠杆菌 晶体毒素1Ia蛋白 BRL-3A细胞 缺氧 凋亡
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