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基于CRISPR/Cas9技术创制优质香味粳稻品系
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作者 段敏 谢留杰 +1 位作者 岳雅妮 黄善军 《中国水稻科学》 北大核心 2026年第2期235-243,共9页
【目的】香味是水稻重要的食味品质性状。本研究选择优质粳稻品系台20-29为研究对象,利用CRISPR/Cas9技术对其香味基因Badh2进行编辑,以期获得具有香味的优质粳稻品系。【方法】选择香味基因Badh2第3、第4外显子上的2段序列作靶位点,构... 【目的】香味是水稻重要的食味品质性状。本研究选择优质粳稻品系台20-29为研究对象,利用CRISPR/Cas9技术对其香味基因Badh2进行编辑,以期获得具有香味的优质粳稻品系。【方法】选择香味基因Badh2第3、第4外显子上的2段序列作靶位点,构建双元表达载体pHUE411-Badh2-gRNA并转入台20-29获得转基因植株。【结果】20株T0植株经过加代、潮霉素标记检测、测序比对,共计获得22个T1代无载体纯合突变株,包括6种突变类型,每种突变体在第3、第4外显子上存在不同程度的碱基变化。6个香味突变体bh62、bh64、bh65、bh67、bh68、bh74在穗长、粒长、粒宽、千粒重等方面与野生型台20-29基本一致,结实率有所下降,每穗粒数稍有提升,稻米品质没有明显变化。利用气相色谱-质谱技术检测突变体bh62、bh64、bh65的糙米中香味物质2-AP含量,结果表明糙米中2-AP含量较台20-29极显著提高,分别达到24.27、33.89、38.96 mg/kg。【结论】对水稻香味基因Badh2进行编辑可以高效获得具有香味的水稻优质品系。 展开更多
关键词 水稻 潮霉素 crispr/Cas9 香味基因 2-乙酰-1-吡咯啉
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外泌体递送CRISPR/Cas系统在靶细胞内可实现基因编辑
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作者 王白燕 杨树 +5 位作者 王弋鸣 吴梦晴 肖瑀 郭梓璇 张博艺 冯书营 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第7期1839-1849,共11页
背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送... 背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送CRISPR/Cas系统的外泌体来源及工程化策略、外泌体对CRISPR/Cas系统的装载方法、CRISPR/Cas系统的生物形式及其在细胞内的作用途径等方面进行全方面综述,为该领域的研究者提供更直观、更系统的视角。方法:以“exosome,drug delivery systems,delivery,CRISPR/Cas,gene editing,engineered exosomes,targeting”为英文检索词,以“外泌体,药物递送,CRISPR/Cas,工程化”为中文检索词,分别检索Pub Med数据库及中国知网,检索时限为2014-2024年。通过仔细阅读文献的标题和摘要进行初步筛选,排除研究内容相关性差及内容重复的文献,最终纳入了78篇文献进行归纳和探讨。结果与结论:(1)外泌体是一种直径30-150 nm的脂质囊泡,具有循环半衰期长、靶向组织的内在能力、良好的生物相容性以及较小的固有毒性等优势,显现出强大的靶向递送能力;(2)CRISPR/Cas系统虽是一种强大的基因编辑工具,然而现有的CRISPR/Cas系统递送载体各有利弊,无法完全满足需求;(3)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要来源于高产外泌体的细胞或组织,但研究者们依然需要根据研究所需进行选择或进一步工程化;(4)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要通过基因工程修饰、化学修饰、外泌体-脂质体杂交等策略实现工程化;(5)外泌体装载CRISPR/Cas系统的方法包括电穿孔、孵育、转染和主动装载途径等,选择合适的装载方法取决于CRISPR/Cas系统的理化性质;(6)外泌体递送CRISPR/Cas系统的生物形式包括质粒和核糖核蛋白复合体,两种形式各具特点,成功递送的CRISPR/Cas系统在靶细胞内实现基因编辑。 展开更多
关键词 外泌体 crispr/Cas系统 基因编辑 药物负载 靶向递送 工程化
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CRISPR/Cas9基因编辑动物模型在转化医学研究中的应用
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作者 郝海生 《动物医学进展》 北大核心 2026年第3期121-126,共6页
动物模型是将治疗方法从实验室转化到临床应用的重要工具。随着基因编辑技术的不断发展,基于成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9,CRI... 动物模型是将治疗方法从实验室转化到临床应用的重要工具。随着基因编辑技术的不断发展,基于成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9,CRISPR/Cas9)构建的动物模型为研究发病机制、开发新的治疗方法以及评估药物疗效提供了新的可能。论文简述了CRISPR/Cas9相关技术及原理,总结了基因编辑动物模型在人类和动物转化医学研究中的应用,探讨了CRISPR/Cas9应用过程中面临的挑战和解决策略,以期促进基因编辑技术在动物模型构建中的应用。 展开更多
关键词 成簇规则间隔短回文重复序列/crispr相关蛋白9 基因编辑 动物模型 疾病 转化医学
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CRISPR/Cas基因编辑技术在艾滋病治疗中的研究现状与挑战
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作者 杨灿 刘真 +5 位作者 张敏 张清燕 邓博文 李承乘 李杰 郭会军 《中国艾滋病性病》 北大核心 2026年第1期114-119,共6页
艾滋病基因治疗一直是研究者们关注的热点。成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统(CRISPR/Cas)设计简单、操作方便、靶向性强、灵敏度高,是新颖有效的第三代“基因组定点编辑技术”。本文综述了CRISPR/Cas系统的历史由来、作... 艾滋病基因治疗一直是研究者们关注的热点。成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白系统(CRISPR/Cas)设计简单、操作方便、靶向性强、灵敏度高,是新颖有效的第三代“基因组定点编辑技术”。本文综述了CRISPR/Cas系统的历史由来、作用机理及艾滋病治疗中的CRISPR/Cas类型,在此基础之上,聚焦于该系统在艾滋病治疗领域的研究进展和应用,从干扰病毒复制周期,清除潜伏前病毒以及调节宿主免疫三方面进行深入分析。同时提出目前存在的诸多挑战:HIV对CRISPR/Cas系统的逃逸、HIV感染细胞中CRISPR/Cas系统的高效递送、针对HIV的CRISPR/Cas独特且多靶点设计、AIDS患者Cas免疫炎症交错复杂。探讨其可能策略,以期为艾滋病基因治疗的开发和临床应用提供方向。 展开更多
关键词 艾滋病 基因治疗 crispr/Cas基因编辑
原文传递
基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析
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作者 杜鹏飞 彭听雨 +3 位作者 范双旗 郑海学 朱紫祥 陈金顶 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期161-167,共7页
利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRI... 利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRISPR v2)连接。随后将构建成功的慢病毒载体与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率,然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明,本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系,并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6表达的上调,为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。 展开更多
关键词 GRSF1 PK-15 crispr/Cas9 基因敲除
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利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻新种质
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作者 潘月云 黄雨青 +3 位作者 丁正权 施扬 黄海祥 李白 《浙江农业学报》 北大核心 2026年第1期17-23,共7页
稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger... 稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger测序验证,获得4个不同类型的双位点纯合突变体。4个双位点纯合T 2代突变体株系的稻米均呈蜡质状,其直链淀粉含量由野生型的16.9%降至0.83%~1.23%,达到糯稻水平。结果表明,利用CRISPR/Cas9技术可快速创制优质香糯型水稻种质资源。 展开更多
关键词 水稻 WX基因 crispr/Cas9 直链淀粉
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类食品乳杆菌LBM 12001基于CRISPR/Cas9技术多基因编辑平台的构建
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作者 黄宗潇 侯倩 +2 位作者 徐岩 黄卫宁 穆晓清 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第3期11-19,共9页
作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通... 作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通过优化质粒大小以及引入λ-Red重组酶辅助同源重组,构建了双质粒系统(pCRI01/pCRI02)。实验结果表明,该系统显著提升了转化效率[单基因敲除转化子达(63±11)个,阳性突变率75%],并实现了三基因同步敲除[转化子(57±8)个,突变率(46±7)%]。创新性整合BioBricks模块化组装、温度敏感型复制子及自靶向诱导型sgRNA技术,使多基因编辑周期缩短40%以上。该体系突破了传统方法的效率限制,成功实现多基因无痕编辑,为构建类食品乳杆菌高效细胞工厂提供了关键性技术支撑。 展开更多
关键词 类食品乳杆菌 crispr/Cas9 多基因编辑 λ-Red重组酶 BioBricks组装
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基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析
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作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页
【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 crispr/Cas9
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建番茄SlGATA1突变体
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作者 姜杏 刘永胜 +2 位作者 吴子睿 徐雨 苗敏 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第2期226-232,共7页
GATA作为一类广泛存在于真核生物中的转录因子,在植物各生长发育阶段和逆境胁迫响应过程中发挥着至关重要的作用。为探究转录因子SlGATA1在番茄植株生长发育和逆境胁迫响应中的具体生物学功能,文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polym... GATA作为一类广泛存在于真核生物中的转录因子,在植物各生长发育阶段和逆境胁迫响应过程中发挥着至关重要的作用。为探究转录因子SlGATA1在番茄植株生长发育和逆境胁迫响应中的具体生物学功能,文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对SlGATA1基因表达模式进行分析,并利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对SlGATA1基因进行编辑。结果表明:SlGATA1基因在各组织中均有表达,在种子中的表达量最高;SlGATA1基因的表达受高盐、干旱、高温及病原菌丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000,Pst DC3000)的影响;通过根癌农杆菌介导的遗传转化体系和CRISPR/Cas9基因编辑技术获得4株稳定遗传的SlGATA1基因敲除突变体,为番茄品种改良提供新的遗传材料。该研究为探究SlGATA1基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 SlGATA1基因 基因编辑 crispr/Cas9 逆境胁迫
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基于环介导等温扩增和CRISPR/Cas系统的转基因玉米和大豆快速准确现场检测
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作者 朱媛媛 杨天怡 +9 位作者 杜俊刚 马斯韩 陈艳菊 刘海荣 叶合肥 严忠军 黄之斌 虞子锋 杨群清 吴坚 《食品科学》 北大核心 2026年第2期21-29,共9页
为应对基于核酸扩增的分子生物学检测转基因粮食方法所面临操作复杂、检测时间长和设备昂贵等挑战,本研究以玉米和大豆为主要研究对象,研发了一种高效快速、无需纯化或稀释的核酸提取方法。同时筛选了高效、特异的转基因标签引物,建立... 为应对基于核酸扩增的分子生物学检测转基因粮食方法所面临操作复杂、检测时间长和设备昂贵等挑战,本研究以玉米和大豆为主要研究对象,研发了一种高效快速、无需纯化或稀释的核酸提取方法。同时筛选了高效、特异的转基因标签引物,建立了针对转基因玉米和大豆的转基因快速环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)体系和防污染体系。此外,建立了一种基于规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)系统的可视化快速检测方法。该检测方法可在45 min内完成转基因检测,对转基因大豆和玉米的代表性转基因成分检测限达0.1%。该方法可实现转基因粮食的快速精准检测,有助于提高粮食监管水平,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 转基因粮食 核酸提取 现场检测 环介导等温扩增 crispr/Cas系统
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CRISPR/Cas系统在分子诊断领域的应用研究进展
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作者 王珂 陈文慧 +1 位作者 雷春阳 聂舟 《合成生物学》 北大核心 2026年第1期3-31,共29页
CRISPR/Cas系统因其高特异性、可编程性和便捷性,已成为分子诊断领域的重要工具。本文综述了CRISPR/Cas系统的技术原理、诊断平台优化及其在精准医学中的应用进展。概述了CRISPR/Cas系统的作用机制与分类,重点讨论了CRISPR诊断技术的创... CRISPR/Cas系统因其高特异性、可编程性和便捷性,已成为分子诊断领域的重要工具。本文综述了CRISPR/Cas系统的技术原理、诊断平台优化及其在精准医学中的应用进展。概述了CRISPR/Cas系统的作用机制与分类,重点讨论了CRISPR诊断技术的创新优化策略,包括基于核酸预扩增[如SHERLOCK(specific highsensitivity enzymatic reporter unlocking)、DETECTR(DNA endonuclease targeted CRISPR trans reporter)]和免扩增的检测方法。探讨了CRISPR/Cas技术在感染性疾病(病原体筛查、耐药性检测)、肿瘤分子分型(癌症早筛、遗传变异分析)及非核酸标志物检测中的临床应用。最后展望了该技术的未来发展方向,包括微型化设备开发、高通量智能化诊断体系构等,并分析了其在临床转化中面临的关键挑战(如灵敏度标准化、成本控制等)。通过总结目前研究,为CRISPR/Cas技术在分子诊断领域的进一步优化和医学应用提供理论参考。 展开更多
关键词 crispr/Cas系统 即时检测 临床转化应用 微型化设备 人工智能辅助分子诊断
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基于重组酶聚合酶扩增和CRISPR/Cas12a系统的2种快速检测奇异变形杆菌的方法
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作者 江艺浩 唐田 +6 位作者 余婕 甘善萍 谢轶 何秋蓉 杨罗 田绿波 汪川 《微生物学通报》 北大核心 2026年第1期519-535,共17页
【背景】奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种重要的致病菌,能够引起人类和动物感染。目前针对该菌的快速检测技术研究较为匮乏,这为临床早期诊断和精准防治工作带来挑战。【目的】基于不同原间隔序列临近基序(protospacer adjacent ... 【背景】奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种重要的致病菌,能够引起人类和动物感染。目前针对该菌的快速检测技术研究较为匮乏,这为临床早期诊断和精准防治工作带来挑战。【目的】基于不同原间隔序列临近基序(protospacer adjacent motif,PAM)序列策略,构建基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和CRISPR/Cas12a系统的2种检测平台,实现对奇异变形杆菌的快速检测。【方法】针对奇异变形杆菌保守基因建立基于RPA和CRISPR/Cas12a系统的一步法和两步法检测平台。一步法平台在39℃条件下同时进行RPA与CRISPR/Cas12a反应,实时收集荧光信号;两步法平台则首先在39℃条件下进行RPA扩增,扩增完成后通过瞬时离心将CRISPR/Cas12a体系移至管底,继续在39℃条件下进行反应以产生荧光信号。优化反应条件后,评估2种方法对奇异变形杆菌临床分离株及其他常见细菌样本的检测灵敏度和特异性。【结果】成功建立了基于RPA和CRISPR/Cas12a的2种检测平台,均可在30 min内检测到最低2.8 copies/μL的标准质粒。在使用热裂解法对样本进行预处理时,一步法灵敏度为10~6 CFU/mL,而两步法灵敏度为10~3 CFU/mL;在对模拟样本进行基因组DNA提取后,一步法和两步法灵敏度分别为10~2 CFU/mL和10~1 CFU/mL。两种方法在30例临床分离株样本中均表现出良好的检出能力,与其他常见致病菌无交叉反应,具有良好的特异性。【结论】本研究基于不同的PAM序列设计策略,构建了针对奇异变形杆菌的RPA-CRISPR/Cas12a一步法和两步法检测平台,具有快速、灵敏、特异的优点,有望在奇异变形杆菌现场检测中应用。 展开更多
关键词 奇异变形杆菌 重组酶聚合酶扩增 crispr/Cas12a 次优PAM序列
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基于CRISPR/Cas9技术提高番茄果实中番茄红素含量
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作者 张光智 史寒琪 +2 位作者 吴保唐 刘涛 祝建波 《江苏农业科学》 北大核心 2026年第1期27-34,共8页
旨在采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对番茄中番茄红素代谢相关的关键基因进行定向编辑,从而提高番茄果实中番茄红素的含量。以石番43亲本为试验材料,基于CRISPR/Cas9系统,构建Sl LCY-E、Sl LCY-B基因的双元表达载体,用农杆菌介导的遗传转... 旨在采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对番茄中番茄红素代谢相关的关键基因进行定向编辑,从而提高番茄果实中番茄红素的含量。以石番43亲本为试验材料,基于CRISPR/Cas9系统,构建Sl LCY-E、Sl LCY-B基因的双元表达载体,用农杆菌介导的遗传转化法获得15株番茄再生苗。经PCR检测发现,有9株番茄植株呈阳性,阳性转化率为60%;对阳性植株的靶序列进行测序发现,有7株番茄发生了基因编辑,编辑效率约为77.8%,其中有4株番茄在2个靶位点均发生了基因突变。此外,Sl LCY-E、Sl LCY-B基因之间的编辑效率也存在差异,分别为55.6%、66.7%。基因编辑类型包括碱基缺失、插入。对成熟期番茄进行检测发现,在突变株果实中,番茄红素的含量均高于野生型果实,且不影响其他农艺性状,其中,12号植株果实中的番茄红素含量最高,为野生型的3.2倍。qRT-PCR结果表明,突变株中Sl LCY-E、Sl LCY-B基因的相对表达量多较野生型显著降低。综上,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制了番茄红素环化酶基因的表达,成功提高了果实中番茄红素的含量,同时证明Sl LCY-E、Sl LCY-B基因表达量与番茄红素积累量呈负相关。 展开更多
关键词 番茄 crispr/Cas9 SlLCY-E SlLCY-B 番茄红素
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基于CRISPR/Cas9技术的水稻OsASL1.1基因突变体创制及干旱胁迫下的表型分析
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作者 胡鑫 陈聪 +3 位作者 端木凡青 李颖 董全师 杜长青 《华北农学报》 北大核心 2026年第1期22-29,共8页
为研究OsASL1.1基因的表达特性及在干旱胁迫响应中的作用,分析OsASL1.1蛋白的亚细胞定位和OsASL1.1基因启动子区顺式作用元件,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析OsASL1.1基因在脱落酸(ABA)、甘露醇、聚乙二醇6000(PEG6000)下的表达模... 为研究OsASL1.1基因的表达特性及在干旱胁迫响应中的作用,分析OsASL1.1蛋白的亚细胞定位和OsASL1.1基因启动子区顺式作用元件,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析OsASL1.1基因在脱落酸(ABA)、甘露醇、聚乙二醇6000(PEG6000)下的表达模式,同时以Kitaake为背景采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Cas9-OsASL1.1突变体,分析突变体的突变类型,并对突变体进行ABA敏感性和抗旱性分析。结果表明,OsASL1.1蛋白主要在质体中表达。OsASL1.1基因启动子区含有低温响应、植物激素(ABA、生长素)响应等顺式作用元件,其中,ABA响应顺式作用元件(ABRE)有5个。OsASL1.1基因受ABA、甘露醇、PEG6000诱导表达。获得了Cas9-6和Cas9-12两个纯合的突变类型,Cas9-6有17 bp的插入,导致翻译提前终止;Cas9-12有12 bp的缺失,导致缺失4个氨基酸。ABA处理下,Cas9-OsASL1.1突变体和野生型的主根伸长都受到了抑制,但Cas9-OsASL1.1突变体受到的抑制程度低于野生型。150 mmol/L甘露醇处理下,Cas9-6和Cas9-12突变体的存活率均显著低于野生型,以Cas9-6的存活率最低。综上,Cas9-OsASL1.1突变体对ABA的敏感性降低,对干旱的抗性降低,即OsASL1.1基因功能丧失降低了水稻对ABA的敏感性和抗旱性。 展开更多
关键词 水稻 OsASL1.1 crispr/Cas9 突变体 干旱胁迫
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基于CRISPR/Cas9技术靶向突变番茄WRKY3基因
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作者 宋茜茜 刘周圆 唐晓凤 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第1期73-79,共7页
WRKY转录因子在植物生长发育、次生代谢产物合成以及对生物和非生物胁迫的响应等方面发挥重要作用。为探究WRKY3在植株逆境应答中的功能及作用机制,文章通过生物信息法对不同物种WRKY3的结构域及进化树进行分析,发现WRKY3具有较高的保守... WRKY转录因子在植物生长发育、次生代谢产物合成以及对生物和非生物胁迫的响应等方面发挥重要作用。为探究WRKY3在植株逆境应答中的功能及作用机制,文章通过生物信息法对不同物种WRKY3的结构域及进化树进行分析,发现WRKY3具有较高的保守性;TomExpress数据库显示WRKY3在各种组织中均有表达,且在红果期果实中表达量最高;并构建WRKY3基因的CRISPR敲除载体,利用农杆菌介导法转化番茄获得WRKY3基因的转基因番茄材料,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及测序鉴定发现,已成功获得敲除WRKY3基因的转基因番茄植株。该研究获得了番茄WRKY3基因敲除突变体稳定遗传株系,为探究WRKY3在逆境胁迫下植物的生长发育及果实成熟中所发挥的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 WRKY3基因 基因编辑 crispr/Cas9技术 载体构建
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CRISPR电化学生物传感器在生物分子检测中的研究进展
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作者 鲍鑫阳 张琪 +5 位作者 宋烨莎 王炳尧 胡耀辉 林雨轩 金大智 邰玉蕾 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2026年第1期85-94,共10页
分子诊断技术是精准医学、食品安全监测和环境保护等领域的核心基础,能够提供快速、准确的检测方法。培养法、酶免疫法等传统技术存在灵敏度低、特异性弱、操作繁琐及周期长的局限;聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)虽具... 分子诊断技术是精准医学、食品安全监测和环境保护等领域的核心基础,能够提供快速、准确的检测方法。培养法、酶免疫法等传统技术存在灵敏度低、特异性弱、操作繁琐及周期长的局限;聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)虽具备高灵敏度和高特异性优势,仍面临操作复杂、易污染和耗时较长的挑战。规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated,CRISPR/Cas)结合电化学传感器因其高特异性、高灵敏度、快速响应和简便操作特点,成为生物分子检测领域的重要工具。本文介绍了CRISPR电化学生物传感器的原理和特点,总结常用的检测信号策略,描述其信号增强方法和在生物分子检测中的应用,并分析了CRISPR电化学生物传感器的优势、局限性及未来发展方向,旨在为在生物分子检测中的开发提供参考。 展开更多
关键词 crispr/Cas系统 电化学生物传感器 生物分子检测 信号增强技术
暂未订购
利用CRISPR/Cas12f1系统清除黏菌素耐药基因mcr-10.1
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作者 陈家辉 刘鸿博 +2 位作者 黄路遥 姜雅轩 宋宏彬 《中华医院感染学杂志》 北大核心 2026年第2期183-188,共6页
目的利用CRISPR/Cas12f1系统靶向清除mcr-10.1耐药质粒,恢复细菌对黏菌素敏感性,为防控mcr-10.1耐药基因提供新手段。方法构建含mcr-10.1的高拷贝耐药质粒pSEVA551-EGFP-mcr-10.1及模式耐药菌;遵循前间隔序列邻近基序(PAM)原则设计79条m... 目的利用CRISPR/Cas12f1系统靶向清除mcr-10.1耐药质粒,恢复细菌对黏菌素敏感性,为防控mcr-10.1耐药基因提供新手段。方法构建含mcr-10.1的高拷贝耐药质粒pSEVA551-EGFP-mcr-10.1及模式耐药菌;遵循前间隔序列邻近基序(PAM)原则设计79条mcr-10.1靶点spacer,并选取3条最优靶点构建重组CRISPR质粒;以三个重组CRISPR质粒热激转化至模式耐药菌pmcr-10.1中为实验组;以空载体质粒pCas12f1转化至模式耐药菌pmcr-10.1中为对照组,开展琼脂电泳凝胶、荧光定量PCR(qPCR)、药敏试验(Etest);将耐药质粒pSEVA551-EGFP-mcr-10.1转化至含有空载体pCas12f1质粒为对照组,转化至三组含有靶点的重组CRISPR质粒为实验组,开展质粒水平转移阻断实验。使用Graphpad Prism 10.1.2对数据和图形进行处理。结果菌落PCR显示,三组CRISPR质粒实验组mcr-10.1清除率100.00%;qPCR表明,12h内靶点清除效率最高可达到92.00%,24h内靶点清除率均超90.00%,最高清除率可达99.22%,筛选出最优靶点;药敏试验显示,实验组黏菌素最小抑菌浓度(MIC)从对照组5.33μg/ml降至0.67~0.92μg/ml,恢复敏感性;耐药质粒转移实验中,实验组质粒转移量较对照组降低607~1679倍。结论CRISPR/Cas12f1系统可高效清除mcr-10.1耐药基因、逆转细菌耐药表型并阻断耐药质粒转移,且因体积小易递送,为黏菌素耐药性防控提供高效、可行的新策略。 展开更多
关键词 细菌耐药 crispr/Cas12f1系统 耐药性清除 黏菌素耐药基因
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CRISPR/Cas9-mediated dysfunction of pectate lyase MaPL11 enhances postharvest shelf-life in banana
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作者 Tongxin Dou Chunhua Hu +9 位作者 Qiufeng Zhong Fei Qin Ou Sheng Qiaosong Yang Guiming Deng Weidi He Huijun Gao Tao Dong Ganjun Yi Fangcheng Bi 《Horticultural Plant Journal》 2026年第2期481-484,共4页
Banana(Musa spp.)is one of the most important fruit crop worldwide,and plays a critical role in human diet and agricultural economies across tropical and subtropical regions,including China(Jiang et al.,2025;Wu et al.... Banana(Musa spp.)is one of the most important fruit crop worldwide,and plays a critical role in human diet and agricultural economies across tropical and subtropical regions,including China(Jiang et al.,2025;Wu et al.,2025).However,its rapid softening severely limits shelf life,causing substantial economic losses during transport and storage.Recently,the enhanced shelf-life can be generated by compromising the key ripening regulators,such as RIN,but other fruit quality traits including flavor and color also can be impaired concurrently(Kitagawa et al.,2005). 展开更多
关键词 fruit crop BANANA Postharvest Shelf Life MAPL crispr Cas Pectate Lyase Ripening Regulators Musa spp
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Versatile bioluminescence CRISPR/Cas platform for point-of-care detection of biomarkers in whole blood
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作者 Xuhua Zhao Hanxiao Zhang +6 位作者 Yunhua Wang Minzhi Liao Siyu Liu Baofeng Yu Xinyao Yi Mengyi Xiong Xiao-Bing Zhang 《Science China Chemistry》 2026年第2期994-1001,共8页
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)systems have achieved significant advancements in precise molecular diagnosis.However,their applications in whole blood detection remain challenging due... Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)systems have achieved significant advancements in precise molecular diagnosis.However,their applications in whole blood detection remain challenging due to signal interference from blood autofluorescence.Here,we proposed a universal and accessible bioluminescent CRISPR/Cas(bioLUCas)platform for direct detection of disease biomarkers in whole blood.By employing a specially designed cpHNLucMB reporter,the bioLUCas system converts CRISPR/Cas12a trans-cleavage activity into a ratiometric bioluminescent signal,producing a distinct emission color change.Compared to conventional CRISPR/Cas12a-based sensors,this platform eliminates the need for external light excitation,effectively bypassing blood autofluorescence and offering high sensitivity.Additionally,the visual signal of bioLUCas system allows user-friendly readout methods,such as smartphone.The platform successfully facilitated point-of-care test(POCT)for myeloperoxidase(MPO)in clinical acute myelogenous leukemia(AML)blood samples and hepatitis C virus(HCV)RNA in synthetic blood samples.This work may advance CRISPR/Cas technology for accessible whole-blood disease diagnostics. 展开更多
关键词 nucleic acid sensor BIOLUMINESCENCE crispr/Cas blood analysis point-of-care test
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CRISPR/Cas基因编辑和表达调控工具箱在放线菌中的应用 被引量:2
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作者 丁金艳 亓慧 +1 位作者 王猛 张玥 《生物工程学报》 北大核心 2025年第5期1736-1750,共15页
放线菌是一类具有强大次级代谢能力的微生物,对放线菌菌株进行理性改造,对提升其天然产物的生产能力具有重要意义。CRISPR/Cas系统因具有高效性、易操作性和良好的靶向精确性,已成为放线菌基因改造和功能研究的重要工具。本文从工作原... 放线菌是一类具有强大次级代谢能力的微生物,对放线菌菌株进行理性改造,对提升其天然产物的生产能力具有重要意义。CRISPR/Cas系统因具有高效性、易操作性和良好的靶向精确性,已成为放线菌基因改造和功能研究的重要工具。本文从工作原理、系统构建、适用场景等角度对放线菌中的各类CRISPR/Cas基因编辑及表达调控工具进行了汇总和比较,包括基于DNA双链断裂的CRISPR/Cas系统、CRISPR干扰系统、CRISPR激活系统,以及CRISPR碱基编辑系统。同时,本文还总结了这些工具在放线菌天然产物生物合成方面的应用情况。CRISPR/Cas工具箱在放线菌中的开发和应用,极大地推动了放线菌微生物学和天然产物相关的研究。 展开更多
关键词 crispr/Cas系统 放线菌 crispr干扰 crispr激活 碱基编辑
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