替加环素通过抑制cpxR延缓肺炎克雷伯菌对多黏菌素B耐药的作用及机制研究 被引量：1

1

作者 张欢欢 冯伟 +1 位作者 华尚军 钱妍 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第12期1401-1412,F0003,共13页

目的探究多黏菌素B(polymyxin B,PMB)联合替加环素(tigecycline,TGC)对延缓肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)PMB耐药性的影响,并分析诱导耐药和延缓耐药的可能机制。方法以陆军军医大学第一附属医院重症监护室临床分离的6株KP为... 目的探究多黏菌素B(polymyxin B,PMB)联合替加环素(tigecycline,TGC)对延缓肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)PMB耐药性的影响,并分析诱导耐药和延缓耐药的可能机制。方法以陆军军医大学第一附属医院重症监护室临床分离的6株KP为研究对象,采用微量肉汤稀释法测定PMB的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。通过1/2MIC浓度PMB单药及联合1/2和1/4MIC浓度TGC体外诱导6株KP,连续传代14 d监测MIC变化。选择延缓耐药效果最显著的686K菌株,通过转录组测序、qRT-PCR和蛋白组学分析686K野生株、PMB诱导耐药株(686K·R)以及PMB联合TGC延缓耐药株(686K·DR)的基因及蛋白表达差异,并通过文献和生物信息学分析延缓耐药过程中的靶基因,同时利用同源重组技术构建cpxR基因敲除株686K/ΔcpxR∷Apr及其回补株686K/ΔcpxR∷Apr/pRK415-cpxR,检测耐药相关基因表达水平及体外诱导后MIC变化。结果亚抑菌浓度(1/2MIC)PMB单药诱导下,6株KP在2 d内均发生耐药;而联合TGC显著延缓耐药。转录组与蛋白组分析表明,686K·R株中,PhoP/Q双组分系统、脂多糖修饰酶及外排泵系统表达显著上调[|Log2差异倍数(fold change,FC)|≥2,P<0.0001];而TGC可显著抑制相应的表达变化。成功构建cpxR缺失及回补株,在cpxR缺失株中,耐药相关基因phoP、pmrD、acrA表达量降低(P<0.001),且PMB单药诱导下耐药性延迟至第6天,回补株第2天恢复耐药表型;在cpxR缺失时,PMB联合TGC对延缓耐药性的效果与PMB单药诱导并无差异。结论PMB联合TGC可延缓KP对PMB的耐药。cpxR作为关键调控因子,可通过调节脂多糖修饰及外排泵AcrAB-TolC表达影响PMB耐药,在诱导耐药过程中具有重要调控功能。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 多黏菌素B 替加环素 联合用药 cpxr

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鼠伤寒沙门菌cpxR和acrB双基因缺失菌株的构建及其对抗菌药物敏感性分析 被引量：7

2

作者 黄慧 刘保光 +5 位作者 孙亚伟 马彩珲 陈丽鹏 苑丽 潘玉善 胡功政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期595-602,共8页

为了探索cpxR基因对鼠伤寒沙门菌多重耐药性的调控机制,同时避免外排泵acrB的存在掩盖cpxR对其他外排泵或外膜蛋白的调控作用,利用基于Red同源重组系统的一步法失活染色体基因,用含有同源臂的线性打靶DNA片段替换目的基因,构建鼠伤寒沙... 为了探索cpxR基因对鼠伤寒沙门菌多重耐药性的调控机制,同时避免外排泵acrB的存在掩盖cpxR对其他外排泵或外膜蛋白的调控作用,利用基于Red同源重组系统的一步法失活染色体基因,用含有同源臂的线性打靶DNA片段替换目的基因,构建鼠伤寒沙门菌JS株的acrB基因缺失株JSΔacrB。然后利用噬菌体转导技术,以前期构建的cpxR缺失株JSΔcpxR∷kan为供体菌,本研究新构建的JSΔacrB为受体菌,在P22噬菌体的作用下构建双基因缺失菌株JSΔacrBΔcpxR∷kan,同时制备cpxR基因回补菌株JSΔacrBΔcpxR∷kan/pcpxR。最后用微量稀释法测定10种临床常用代表性抗菌药物对JS和各缺失株的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,成功构建鼠伤寒沙门菌的双基因缺失菌株JSΔacrBΔcpxR∷kan以及其cpxR基因互补菌株JSΔacrBΔcpxR/pcpxR。MIC结果显示,acrB基因缺失后,多西环素、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢曲松和头孢噻呋的MIC值分别降低32、4、4、16、32、4、2和128倍;双基因缺失后,多西环素、庆大霉素、阿米卡星和头孢噻呋的MIC值进一步降低2、8、2和2倍;而将cpxR基因回补之后,这4种抗菌药物的MIC值会升高4、16、2和4倍。结果表明,cpxR能调控鼠伤寒沙门菌对多西环素、庆大霉素、阿米卡星和头孢噻呋的敏感性。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 cpxr ACRB 双基因缺失 MIC

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鼠伤寒沙门菌cpxR基因缺失株的构建及其对抗菌药物敏感性分析 被引量：4

3

作者 黄慧 田亚凯 +5 位作者 孙亚伟 陈丽鹏 苑丽 刘建华 崔耀明 胡功政 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期756-760,共5页

为研究鼠伤寒沙门菌双组分信号系统的应答调节蛋白基因cpxR对菌株药物敏感性的影响,本研究以p KD4质粒为模板,利用PCR扩增两侧与cpxR基因上下游同源且含有卡那霉素抗性(kanr)基因的线性打靶DNA片段,在p KD46质粒的辅助下进行Red同源重组... 为研究鼠伤寒沙门菌双组分信号系统的应答调节蛋白基因cpxR对菌株药物敏感性的影响,本研究以p KD4质粒为模板,利用PCR扩增两侧与cpxR基因上下游同源且含有卡那霉素抗性(kanr)基因的线性打靶DNA片段,在p KD46质粒的辅助下进行Red同源重组,利用线性打靶DNA片段替换鼠伤寒沙门菌CVCC541(JS)株的cpxR基因,再利用p CP20质粒消除FRT位点间的kanr基因,构建基因缺失株JS△cpxR。并将重组表达质粒p BAD-cpxR转化于JS△cpxR中,制备回补菌株JS△cpxR/pcpxR。利用微量稀释法测定12种代表性抗菌药物对亲本株JS、JS△cpxR和回补菌株JS△cpxR/pcpxR的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、头孢噻呋(CEF)和头孢曲松(CRO)对亲本株JS的MIC值分别为JS△cpxR的4、4、4和2倍;而随诱导剂L-阿拉伯糖浓度的增高,这4种药物对回补菌株JS△cpxR/pcpxR的MIC值均逐渐恢复到亲本株JS的水平,呈剂量依赖性关系,而且高浓度诱导时4种药物对回补菌株的MIC分别为JS△cpxR的16、8、8和16倍,其他药物的MIC值未出现明显的变化。本研究结果表明:cpxR能够调控鼠伤寒沙门菌对GEN、AMK、CEF和CRO的敏感性。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 应答调节蛋白基因cpxr基因敲除 最小抑菌浓度

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白痢沙门菌CpxR的生物信息学分析和原核表达 被引量：3

4

作者 吴同垒 张志强 +6 位作者 贾青辉 张召兴 史秋梅 李蕴玉 张香斋 张艳英 李佩国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1891-1895,共5页

对白痢沙门菌二元调控系统响应蛋白CpxR进行生物信息学分析,提示CpxR可能发挥了重要的生理功能。同时,构建了重组表达载体pET32a-CpxR,转化表达菌株BL21后,对其进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot结果表明CpxR获得了正确表达。纯化蛋... 对白痢沙门菌二元调控系统响应蛋白CpxR进行生物信息学分析,提示CpxR可能发挥了重要的生理功能。同时,构建了重组表达载体pET32a-CpxR,转化表达菌株BL21后,对其进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot结果表明CpxR获得了正确表达。纯化蛋白免疫小鼠制备了多抗血清,Western blot验证其有一定的免疫原性。为深入研究其生理功能和调控机制奠定了理论基础。 展开更多

关键词 鸡白痢 沙门菌 cpxr

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狐源沙门菌cpxR基因缺失菌株的构建及部分表型研究 被引量：5

5

作者 吴同垒 苏硕青 +2 位作者 李巧玲 史秋梅 张志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期456-460,共5页

为研究狐源沙门菌双组份系统CpxR/A在细菌耐药和抗血清杀伤中的作用,本研究利用λ-Red重组技术构建了cpxR基因缺失株S-ΔcpxR,评价其在生物被膜形成、耐药、抗血清杀伤和细菌毒力中的重要作用。结果显示,与野生型相比,cpxR基因缺失株的... 为研究狐源沙门菌双组份系统CpxR/A在细菌耐药和抗血清杀伤中的作用,本研究利用λ-Red重组技术构建了cpxR基因缺失株S-ΔcpxR,评价其在生物被膜形成、耐药、抗血清杀伤和细菌毒力中的重要作用。结果显示,与野生型相比,cpxR基因缺失株的生长速度、生化特性没有改变,但是生物被膜形成能力显著降低,对阿莫西林、阿米卡星和恩诺沙星的敏感性增加,血清中存活率和对小鼠的毒力显著降低。结果表明,沙门菌CpxR与毒力相关,为狐源沙门菌基因缺失苗的研究奠定基础。 展开更多

关键词 沙门菌 基因缺失 cpxr/A

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亚MIC庆大霉素下CpxR对鼠伤寒沙门菌生长特性和acrD基因转录的影响 被引量：2

6

作者 黄慧 陈丽鹏 +5 位作者 孙亚伟 高延玲 苑丽 潘玉善 刘建华 胡功政 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期995-1000,共6页

前期研究发现双组分应答调控子CpxR可调控鼠伤寒沙门菌对氨基糖苷类药物的耐药性。为进一步探索其调控机制,本研究测定了无抗生素和亚MIC庆大霉素下,鼠伤寒沙门菌标准株(JS)、过表达株(JS/pcpxR)、磷酸化位点突变过表达株(JS/pcpxR*)分... 前期研究发现双组分应答调控子CpxR可调控鼠伤寒沙门菌对氨基糖苷类药物的耐药性。为进一步探索其调控机制,本研究测定了无抗生素和亚MIC庆大霉素下,鼠伤寒沙门菌标准株(JS)、过表达株(JS/pcpxR)、磷酸化位点突变过表达株(JS/pcpxR*)分别在不同能量水平的2种基本培养基中的生长曲线;同时采用LacZ报告基因融合试验方法构建3株acrD启动子融合报告菌株(JS/PacrD、JS△cpxR/PacrD、JS△cpxR/pcpxR/PacrD),通过测定其β-半乳糖苷酶活性,分析无抗生素诱导和亚MIC庆大霉素诱导下CpxR对acrD启动子转录活性的影响。结果显示,JS、JS/pcpxR和JS/pcpxR*在M9-0.2%甘油(+亚MIC庆大霉素)培养基中的对数生长期生长速率均低于各自在M9-0.2%甘油培养基中的对数生长期生长速率,JS和JS/pcpxR*在M9-0.2%葡萄糖(+亚MIC庆大霉素)培养基中的对数生长期生长速率也低于各自在M9-0.2%葡萄糖培养基中的对数生长期生长速率,但JS/pcpxR在M9-0.2%葡萄糖(+亚MIC庆大霉素)培养基与在M9-0.2%葡萄糖培养基中的生长速率基本一致;另外,亚MIC庆大霉素诱导下JS△cpxR/pcpxR/PacrD的β-半乳糖苷酶活性高于JS△cpxR/PacrD,差异极显著(P<0.01),与JS/PacrD的β-半乳糖苷酶活性水平相当。结果表明,在葡萄糖存在的环境中,CpxR的过表达可提高鼠伤寒沙门菌对庆大霉素的抗性,且CpxR对外排泵acrD转录的促进是其发挥对庆大霉素耐药性调控作用的重要机制。 展开更多

关键词 应答调控子cpxr 鼠伤寒沙门菌 生长特性 acrD基因

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双组分系统CpxR影响禽致病性大肠杆菌的耐药性、抗血清杀菌能力及毒力 被引量：5

7

作者 易正飞 张耀东 +9 位作者 王瑶 朱红 陶程琳 AFAYIBO Dossêh Jean Ap tre 李涛 祁晶晶 田明星 丁铲 于圣青 王少辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1053-1060,共8页

CpxR是细菌中Cpx双组分系统(two component system, TCS)的反应调控蛋白,通过调控靶基因的转录表达,在细菌细胞膜稳定及毒力方面发挥作用。本研究旨在探究TCS CpxR对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC)基本生... CpxR是细菌中Cpx双组分系统(two component system, TCS)的反应调控蛋白,通过调控靶基因的转录表达,在细菌细胞膜稳定及毒力方面发挥作用。本研究旨在探究TCS CpxR对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC)基本生物学特性、抗血清杀菌能力及致病性的影响。利用Red同源重组系统及互补质粒构建cpxR基因缺失株、互补株,然后比较分析野生株、基因缺失株与互补株的生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、药物敏感性、抗血清杀菌能力、动物致病性的差异。结果显示:cpxR基因缺失株与野生株、互补株的生长速度和运动性能无明显差异,且缺失cpxR基因不影响APEC的生物被膜形成能力。然而,缺失CpxR导致APEC对阿米卡星和卡那霉素耐药性降低。血清杀菌试验结果显示,CpxR有助于APEC的抗血清杀菌能力。动物感染试验结果显示,野生株、cpxR基因缺失株和互补株对雏鸭的半数致死量(LD_(50))分别为7.50×10^(5)、7.50×10^(6)、1.33×10^(6) CFU,表明CpxR缺失显著降低APEC的毒力。综上表明,TCS CpxR在APEC耐药性、抗血清杀菌能力及毒力方面发挥作用,为阐明APEC的环境适应性、生存能力及致病机制提供参考。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 cpxr 耐药性 抗血清杀菌 毒力

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cpxR基因对大肠杆菌E41株生物学特性及生物被膜形成的影响研究 被引量：6

8

作者 宋雪艳 张鲁星 +6 位作者 谢翠萍 李苗苗 谷正全 高古睿 胡功政 潘玉善 刘建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期466-472,共7页

为研究双组份系统cpxR基因缺失对大肠杆菌临床分离野生株E41生物学特性的影响、培养条件与其生物被膜(BF)形成能力的关系及黄芩苷对BF的清除作用,本研究以野生株E41、缺失株E41ΔcpxR、回补株E41ΔcpxR/pcpxR为对象进行试验。比较3株菌... 为研究双组份系统cpxR基因缺失对大肠杆菌临床分离野生株E41生物学特性的影响、培养条件与其生物被膜(BF)形成能力的关系及黄芩苷对BF的清除作用,本研究以野生株E41、缺失株E41ΔcpxR、回补株E41ΔcpxR/pcpxR为对象进行试验。比较3株菌的生长特性,结果显示三者生长曲线无显著性差异。比较3株菌的运动性,结果显示E41ΔcpxR的游泳运动和群集运动能力弱于野生株及回补株。采用平板计数检测3株菌的抗鸡血清杀菌能力,结果显示E41ΔcpxR株抗鸡血清杀菌能力弱于野生株及回补株。采用微量肉汤稀释法检测菌株的药物敏感性,结果显示与野生株和回补株相比,卡那霉素、阿米卡星和环丙沙星对缺失株的MIC降低1/2,但氟苯尼考对其MIC升高了2倍。采用结晶紫染色法检测不同成膜载体和培养温度对BF形成的影响,结果显示3株菌均在硅胶载体上的BF形成能力最强,但25℃条件下适于E41和E41ΔcpxR/pcpxR株BF的形成,37℃条件下则更适于E41ΔcpxR株BF的形成。采用平板计数法检测黄芩苷对BF的清除作用,结果显示,不加黄芩苷的空白对照组,E41和E41ΔcpxR/pcpxR株在试验起始时就有菌株开始从BF中游离,而E41ΔcpxR在24 h才有菌株从BF中游离;加入1 MIC和1/2 MIC黄芩苷分别与3株菌共培养条件下,3株菌均在试验起始时即从BF中开始游离。但加入1/4 MIC黄芩苷时,E41和E41ΔcpxR/pcpxR株在试验起始时有菌株从BF中游离,E41ΔcpxR株在12 h开始从BF中游离。本研究结果表明,当cpxR基因缺失后,其运动性和抗血清杀菌能力降低,对氨基糖苷类、喹诺酮类和酰胺醇类药物的敏感性改变,硅胶载体更有利于菌株附着形成BF,黄芩苷对其BF有清除作用。本研究为探究大肠杆菌cpxR基因功能奠定了基础,同时也为BF抑制剂的研发提供了参考依据。 展开更多

关键词 大肠杆菌 抗血清杀菌能力 生物被膜 cpxr 培养温度 成膜载体 黄芩苷

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CpxR对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因pmrB和phoQ调控作用的研究 被引量：3

9

作者 翟亚军 梁军 +5 位作者 魏单单 孙华润 潘玉善 吴华 刘建华 胡功政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1284-1291,共8页

为了探索 cpxR 对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因 pmrB 和 phoQ 的调控作用,用overlapping PCR扩增得到 cpxR 、 pmrB 和 cpxR 、 phoQ 共表达基因 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ ,用2倍微量肉汤稀释法对构建的 pmrB 、 phoQ 单基因过... 为了探索 cpxR 对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因 pmrB 和 phoQ 的调控作用,用overlapping PCR扩增得到 cpxR 、 pmrB 和 cpxR 、 phoQ 共表达基因 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ ,用2倍微量肉汤稀释法对构建的 pmrB 、 phoQ 单基因过表达菌株JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p pmrB (JSΔΔ/p B )、JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p phoQ (JSΔΔ/p Q )和 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ 共表达菌株JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p cpxR - pmrB (JSΔΔ/p RB )、JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p cpxR - phoQ (JSΔΔ/p RQ )进行黏菌素最小抑菌浓度(MICs)的测定,同时以各菌株在LB中的OD 600 nm 值绘制生长曲线,以各菌株在不同浓度的黏菌素中的存活率绘制杀菌曲线。结果:成功构建的鼠伤寒沙门菌 pmrB 、 phoQ 的单基因过表达菌株JSΔΔ/p B 、JSΔΔ/p Q 和 cpxR - pmrB 、 cpxR - phoQ 共表达菌株JSΔΔ/p RB 、JSΔΔ/p RQ 的MIC结果显示,JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /p cpxR (JSΔΔ/p R )的MIC值较JS下降93.75%,与本实验室前期研究结果一致。JSΔΔ/p B 、JSΔΔ/p Q 的MIC值较JS均上升3倍,而JSΔΔ/p RB 、JSΔΔ/p RQ 的MIC值较JS分别降低50%和75%。生长曲线结果显示JSΔΔ/p R 的生长活性最低,JSΔΔ/p B 、JSΔΔ/p Q 、JSΔΔ/p RB 和JSΔΔ/p RQ 的生长活性均低于JSΔ acrB Δ cpxR :: kan /pHisA(JSΔΔ/pHisA)。黏菌素的杀菌曲线结果显示JSΔΔ/p B 和JSΔΔ/p Q 在不同浓度的黏菌素中的存活率显著高于黏菌素较敏感的JSΔΔ/p RB 和JSΔΔ/p RQ 。上述结果表明:CpxR能够通过PmrB和PhoQ调控鼠伤寒沙门菌对黏菌素的敏感性。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 黏菌素 cpxr pmrB phoQ 调控作用

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鼠伤寒沙门菌ST1920株cpxR基因缺失株的构建及其对小鼠LD_(50)的影响 被引量：6

10

作者 马彩珲 黄慧 +4 位作者 陈丽鹏 高延玲 潘玉善 苑丽 胡功政 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期437-442,共6页

为了探索鼠伤寒沙门菌双组分信号系统CpxAR的应答调节蛋白基因cpxR对小鼠半数致死量(LD_(50))的影响,为下一步研究CpxAR系统对鼠伤寒沙门菌致病性的调控机制提供基础。本研究通过ERIC-PCR、MLST分型技术筛选流行克隆株JS_分,应用噬菌体... 为了探索鼠伤寒沙门菌双组分信号系统CpxAR的应答调节蛋白基因cpxR对小鼠半数致死量(LD_(50))的影响,为下一步研究CpxAR系统对鼠伤寒沙门菌致病性的调控机制提供基础。本研究通过ERIC-PCR、MLST分型技术筛选流行克隆株JS_分,应用噬菌体转导技术构建基因缺失突变株JS_分△cpxR,并分别测定了小鼠腹腔注射JS_标、JS_标△cpxR、JS_分、JS_分△cpxR后的LD_(50)。结果显示:89株鼠伤寒沙门菌分为11个ERIC型、4个ST型,流行性克隆株为ST1920型(新的ST型)。LD_(50)结果显示,JS_标、JS_标△cpxR、JS_分、JS_分△cpxR对小鼠的LD_(50)分别为5.79×108、7.85×108、1.91×107、3.35×108 CFU。其中ST1920型代表株(JS_分)的LD_(50)较JS_标低约30.31倍,JS_标△cpxR突变株的LD_(50)比其亲本株JS_标升高了1.36倍,JS_分△cpxR突变株LD_(50)比其亲本株JS_分升高了17.54倍。结果表明cpxR基因缺失株毒力均明显下降,cpxR基因与鼠伤寒沙门菌毒力密切相关,对致病性有重要影响。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 应答调节蛋白基因cpxr 半数致死量

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鸡源大肠杆菌ΔcpxR的构建及生物学特性研究 被引量：1

11

作者 刘志欢 宋雪艳 +4 位作者 谢翠萍 陶梦珂 张鲁星 李苗苗 刘建华 《江西农业学报》 CAS 2022年第6期98-103,共6页

在鸡源大肠杆菌临床菌株E41中,构建双组分系统cpxR基因缺失株及回补株,并研究其对相关生物学特性的影响。采用Red同源重组的方法构建cpxR基因缺失株,并通过pBAD/HisA质粒构建回补株。比较临床野生株、缺失株和回补株生长曲线、运动能力... 在鸡源大肠杆菌临床菌株E41中,构建双组分系统cpxR基因缺失株及回补株,并研究其对相关生物学特性的影响。采用Red同源重组的方法构建cpxR基因缺失株,并通过pBAD/HisA质粒构建回补株。比较临床野生株、缺失株和回补株生长曲线、运动能力、生物被膜形成能力、稳定性、药物敏感性等差异。成功构建缺失株ΔcpxR和回补株CΔcpxR。与野生株E41相比,ΔcpxR缺失株在生长曲线、运动能力及生物被膜形成方面影响不显著。在缺失株稳定性测定中,缺失株在传代15 d后,仍具有良好的稳定性。在药物敏感性测定中,cpxR的缺失导致菌株对链霉素和多西环素的MIC升高2倍,对氟苯尼考的MIC降低至原来的1/2。综上,双组分系统cpxR基因缺失对细菌药物敏感性有明显影响,对其他方面的作用影响不显著,其功能可能被另外的因素代偿性补偿。 展开更多

关键词 大肠杆菌 双组分系统 cpxr基因 基因缺失

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cpxR基因缺失对鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力的影响 被引量：1

12

作者 黄慧 樊国燕 +4 位作者 彭志锋 娄飞 王晓琳 裴亚玲 胡功政 《现代牧业》 2021年第1期17-21,共5页

为研究双组分信号转导系统CpxAR对鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力的调控作用,以鼠伤寒沙门菌的标准菌株JS和构建的cpxR缺失株JSΔcpxR、以及前期研究临床分离的6株鼠伤寒沙门菌和构建的6株cpxR基因缺失株为研究对象,首先采用PCR的方法对... 为研究双组分信号转导系统CpxAR对鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力的调控作用,以鼠伤寒沙门菌的标准菌株JS和构建的cpxR缺失株JSΔcpxR、以及前期研究临床分离的6株鼠伤寒沙门菌和构建的6株cpxR基因缺失株为研究对象,首先采用PCR的方法对菌株的cpxR基因进行扩增鉴定,然后采用结晶紫染色法测定各菌株的生物被膜形成能力,最后分析cpxR基因缺失前后鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力的变化。结果发现,所有亲本株和cpxR基因缺失株的cpxR基因PCR扩增条带大小与预期一致。生物被膜测定结果显示,鼠伤寒沙门菌标准菌株(JS)为中等成膜能力菌株,其cpxR基因缺失株(JSΔcpxR)为弱成膜能力菌株,cpxR缺失后生物被膜形成量明显降低,差异显著(p<0.05);临床分离的鼠伤寒沙门菌中,cpxR基因缺失株SH2ΔcpxR和SH4ΔcpxR与其亲本株(SH2和SH4)相比,生物被膜形成量明显降低,差异显著(p<0.05);cpxR基因缺失株(SH3ΔcpxR和SH7ΔcpxR)与其亲本株SH3和SH7相比,生物被膜形成量显著降低,差异极显著(p<0.01)。结果表明,cpxR基因缺失可使鼠伤寒沙门菌的成膜能力明显降低,该基因在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 cpxr基因 鼠伤寒沙门菌 生物被膜 结晶紫染色

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嗜线虫致病杆菌YL001 cpxR基因敲除突变株的构建及其抑菌活性研究

13

作者 汤倩 张淑静 +2 位作者 郭蔷薇 王永宏 张兴 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第6期125-131,140,共8页

【目的】通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)YL001中cpxR基因,为进一步研究CpxR调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】通过融合PCR技术,将cpxR基因的上、下游同源片段及质粒pJCV53上的卡那抗性基因... 【目的】通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)YL001中cpxR基因,为进一步研究CpxR调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】通过融合PCR技术,将cpxR基因的上、下游同源片段及质粒pJCV53上的卡那抗性基因Kmr 3个片段连接,克隆到自杀载体pDM4中,将重组质粒转化到大肠杆菌S17-1λpir中,经接合转移导入嗜线虫致病杆菌内,通过同源重组敲除cpxR基因;采用琼脂扩散法和抑制菌丝生长速率法分别测定突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用。【结果】从X.nematophila YL001基因组中成功敲除cpxR基因,得到了ΔcpxR突变菌株;ΔcpxR突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用较野生菌株分别提高了1.4和1.7倍。【结论】CpxR负向调控嗜线虫致病杆菌YL001抗菌物质的产生。 展开更多

关键词 嗜线虫致病杆菌YL001 cpxr基因 基因敲除 抗菌活性

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CpxR对鼠伤寒沙门菌连接蛋白基因pmrD的调控作用

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作者 翟亚军 魏单单 +5 位作者 梁军 刘营营 贺丹丹 吴华 苑丽 胡功政 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2330-2335,共6页

前期发现黏菌素对鼠伤寒沙门菌acrB和cpxR双缺失后的cpxR回补株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较标准株JS显著下降了16倍,且JS△△/pR中PhoPQ和PmrAB之间的连接蛋白基因pmrD的表达量显著降低。为探索cpxR对pmrD的调控作用... 前期发现黏菌素对鼠伤寒沙门菌acrB和cpxR双缺失后的cpxR回补株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较标准株JS显著下降了16倍,且JS△△/pR中PhoPQ和PmrAB之间的连接蛋白基因pmrD的表达量显著降低。为探索cpxR对pmrD的调控作用,本研究构建了pmrD的单基因过表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/ppmrD(JS△△/pD),并用overlapping PCR扩增得到cpxR和pmrD的共表达基因cpxR-pmrD,构建了cpxR、pmrD共表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-pmrD(JS△△/pRD)。用微量肉汤稀释法测定了黏菌素对各菌株的最小抑菌浓度(MICs),同时测定了各菌株在LB肉汤中的生长曲线和黏菌素的杀菌曲线。结果表明,成功构建了鼠伤寒沙门菌pmrD的单基因过表达菌株JS△△/pD和cpxR、pmrD共表达菌株JS△△/pRD。MIC结果显示,黏菌素对JS△△/pR的MIC值较JS显著下降(16倍),JS△△/pD的MIC值没有变化,而JS△△/pRD的MIC值显著上升(16倍)。生长曲线显示,JS△△/pR的生长活性最低,JS△△/pD、JS△△/pRD的生长活性均高于JS△△/pR。黏菌素的杀菌曲线显示,JS△△/pRD在不同浓度黏菌素中的存活率显著高于JS△△/pD。这些结果表明:在JS△△背景下,pmrD对菌株黏菌素敏感性的影响依赖于cpxR,cpxR对pmrD的调控具有双向性,即对生理表达的pmrD具有负调控作用,而对过表达的pmrD具有正调控作用。本试验为全面系统阐明cpxR或cpxR与acrB相互作用调控沙门菌敏感性的分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 cpxr pmrD 黏菌素

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鼠伤寒沙门菌cpxR和tolC双基因缺失株的构建及其对抗菌药物敏感性分析

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作者 张梦珂 崔小蝶 +7 位作者 吴华 罗行炜 刘建华 翟亚军 贺丹丹 潘玉善 苑丽 胡功政 《江西农业学报》 CAS 2021年第7期93-98,103,共7页

为了探索CpxAR和AcrAB-tolC的协同作用对鼠伤寒沙门菌多重耐药性的调控机制,利用噬菌体转导技术,以前期构建的鼠伤寒沙门菌(JS)的tolC缺失株JSΔtolC::kan为供体菌,以cpxR缺失株JSΔcpxR为受体菌,在P22噬菌体的作用下成功构建了JS的双... 为了探索CpxAR和AcrAB-tolC的协同作用对鼠伤寒沙门菌多重耐药性的调控机制,利用噬菌体转导技术,以前期构建的鼠伤寒沙门菌(JS)的tolC缺失株JSΔtolC::kan为供体菌,以cpxR缺失株JSΔcpxR为受体菌,在P22噬菌体的作用下成功构建了JS的双基因缺失株JSΔcpxRΔtolC::kan;再利用pCP20质粒消除卡那抗性基因kan,获得了JSΔcpxRΔtolC,并构建了cpxR回补株JSΔcpxRΔtolC/p cpxR。采用微量肉汤稀释法测定了12种常用抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示:tolC缺失株对环丙沙星、头孢噻肟、头孢喹肟、多西环素、痢菌净、喹乙醇、头孢噻呋、氟苯尼考、土霉素、恩诺沙星、阿米卡星的MIC值分别降低至JS的1/8、1/2、1/4、1/8、1/8、1/2、1/16、1/4、1/4、1/8、1/2;cpxR和tolC双基因缺失株对头孢噻肟、头孢喹肟、多西环素、痢菌净、喹乙醇、恩诺沙星的MIC均又进一步降低至tolC缺失株的1/2;而将cpxR基因回补到双基因缺失株JSΔcpxRΔtolC中后,对环丙沙星、头孢噻肟、头孢噻呋的MIC值均升高了2倍,对恩诺沙星的MIC升高至4倍,对头孢喹肟的MIC升高了8倍。说明cpxR缺失与tolC缺失的协同作用能增强鼠伤寒沙门菌对头孢噻肟、头孢喹肟、多西环素、痢菌净、喹乙醇、恩诺沙星的敏感性。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 cpxr TOLC 双基因缺失 MIC

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鸡白痢沙门菌cpxR基因缺失株的构建及体外应激试验

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作者 吴同垒 于秀剑 +3 位作者 黄翠琴 张志强 李佩国 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期981-985,共5页

为研究鸡白痢沙门菌双组份系统CpxR/A的作用,本研究利用λ-Red重组技术构建了鸡白痢沙门菌cpxR基因缺失突变株ATCC19945ΔcpxR,通过应激试验和细胞感染试验,揭示cpxR基因在鸡白痢沙门菌致病机制中的重要作用。实验结果表明,cpxR基因缺... 为研究鸡白痢沙门菌双组份系统CpxR/A的作用,本研究利用λ-Red重组技术构建了鸡白痢沙门菌cpxR基因缺失突变株ATCC19945ΔcpxR,通过应激试验和细胞感染试验,揭示cpxR基因在鸡白痢沙门菌致病机制中的重要作用。实验结果表明,cpxR基因缺失并未影响细菌的生长速度、生化特性和在鼠源巨噬细胞Raw264.7中的存活能力,但使得细菌对热、酸、碱和氧化应激的敏感性增加,同时在蛋清中的生存能力下降。本研究为进一步阐释CpxR/A系统的重要功能奠定基础。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌 基因缺失 cpxr/A

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Molecular Significance of <i>lon</i>and <i>cpxR</i>Genes in the Pathogenicity of <i>Salmonella</i>

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作者 Rahul M. Nandre Preeti Mahajan 《Open Journal of Animal Sciences》 2015年第4期429-434,共6页

The important foodborne zoonotic pathogen Salmonella causes gastroenteritis. The dynamics of host-pathogen Salmonella interaction and infection might enhance the development of novel tar-geted preventative measures an... The important foodborne zoonotic pathogen Salmonella causes gastroenteritis. The dynamics of host-pathogen Salmonella interaction and infection might enhance the development of novel tar-geted preventative measures and drug regimens. The lon and cpxR are virulence associated genes, which have an important role in the Salmonella pathogenesis. However, the deletions of lon and cpxRlead to the construction of genetically engineered live Salmonella vaccine candidate. In this review, lon and cpxR genes are focused for their involvement in Salmonella pathogenesis. Furthermore, the importance of these genes was briefly emphasized during the construction of Salmonella vaccine candidate. 展开更多

关键词 SALMONELLA LON and cpxr PATHOGENESIS

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副猪嗜血杆菌反应调节因子CpxR自杀性质粒的构建

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作者 付书林 陈夏冰 +8 位作者 何斌 邵志勇 杨文海 刘武 金尔光 童伟文 陶弼菲 张四化 陈洁 《湖北农业科学》 2015年第19期4787-4789,共3页

以副猪嗜血杆菌双组分信号转导系统CpxA/R中反应调节因子CpxR为研究对象,成功构建自杀性质粒ΔpEM-CpxR,这就为构建副猪嗜血杆菌CpxR突变株以及探究CpxA/CpxR双组分信号转导系统调控副猪嗜血杆菌分子致病机制提供了基础。

关键词 副猪嗜血杆菌 反应调节因子 cpxr 自杀性质粒

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杀鱼爱德华氏菌质膜蛋白酶HtpX致病作用与受调控研究

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作者 吴清娟 许嘉芮 +2 位作者 方清建 黄惠琴 胡永华 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2024年第10期2003-2014,共12页

杀鱼爱德华氏菌是一种典型的胞内病原菌,能够感染鱼类等多种水产养殖动物,对全球水产养殖业构成巨大威胁.当前对该菌致病机制的认识仍不清晰.质膜蛋白酶HtpX被认为与蛋白酶FtsH一起参与膜蛋白的质量控制,受包膜应激感应调控因子CpxR调控... 杀鱼爱德华氏菌是一种典型的胞内病原菌,能够感染鱼类等多种水产养殖动物,对全球水产养殖业构成巨大威胁.当前对该菌致病机制的认识仍不清晰.质膜蛋白酶HtpX被认为与蛋白酶FtsH一起参与膜蛋白的质量控制,受包膜应激感应调控因子CpxR调控.FtsH和CpxR在杀鱼爱德华氏菌致病过程中发挥重要作用,但HtpX的作用未知.本研究通过构建htpX敲除株发现,杀鱼爱德华氏菌HtpX与细菌耐高温和妥布霉素等环境压力密切相关,发现HtpX参与了细菌运动性和抗宿主血清作用;致病性实验表明,HtpX在细菌对上皮细胞黏附、巨噬细胞内的存活与增殖以及对宿主全局性毒力等方面发挥着重要作用.此外,发现htpX启动子的活性受CpxR的正调控,并可能依赖于CpxR磷酸化水平.本研究为杀鱼爱德华氏菌的生物学特性及致病机制提供了新的见解. 展开更多

关键词 杀鱼爱德华氏菌 质膜蛋白酶HtpX 致病性 调控机制 cpxr

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革兰氏阴性菌的Cpx双组分调控系统 被引量：13

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作者 徐乐 周晓辉 何晓亮 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期269-275,共7页

细菌主要通过单组分、双组分、三组分调控系统来适应外界环境变化以保证自身的正常生长和繁殖。Cpx系统是革兰氏阴性菌中普遍存在的双组分调控系统之一,作为双组分调控系统的重要一元,它由细胞膜组氨酸蛋白激酶CpxA、细胞质响应调节蛋白... 细菌主要通过单组分、双组分、三组分调控系统来适应外界环境变化以保证自身的正常生长和繁殖。Cpx系统是革兰氏阴性菌中普遍存在的双组分调控系统之一,作为双组分调控系统的重要一元,它由细胞膜组氨酸蛋白激酶CpxA、细胞质响应调节蛋白CpxR以及细胞周质空间辅助调节蛋白CpxP构成。本文着重介绍了Cpx系统各组分的结构特征,并结合前人的文献和我们近期的研究成果,综述了Cpx系统信号整合的最新研究进展,提出了尚待解决的问题及进一步的研究方向,为科研人员对Cpx双组分调控系统的研究提供一定的帮助。 展开更多

关键词 革兰氏阴性菌 Cpx双组分调控系统 细胞膜组氨酸蛋白激酶CpxA 细胞质响应调节蛋白cpxr 细胞周质空间辅助调节蛋白CpxP

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