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版纳微型猪近交系CPN10克隆、亚细胞定位、组织表达和生物信息学分析 被引量:1
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作者 宋雪 秦彩艳 +5 位作者 霍金龙 王配 李罗刚 张霞 王淑燕 王雪飞 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2019年第2期255-262,共8页
【目的】以版纳微型猪近交系(BMI)为材料克隆CPN10基因,从亚细胞、m RNA水平及生物信息学方面初步探索其结构及功能特性,为该基因在猪—人异种器官移植免疫排斥中的作用研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法获得CPN10基因c DNA序列,应... 【目的】以版纳微型猪近交系(BMI)为材料克隆CPN10基因,从亚细胞、m RNA水平及生物信息学方面初步探索其结构及功能特性,为该基因在猪—人异种器官移植免疫排斥中的作用研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法获得CPN10基因c DNA序列,应用分子克隆技术构建目的基因和报告基因EGFP的重组真核表达载体pEGFP-C1-CPN10,将其转染猪肾细胞PK15进行瞬时表达,通过EGFP示踪CPN10在PK15细胞中的表达和定位。进一步应用荧光定量技术明确其mRNA的多组织表达特征。最后利用生物信息学分析CPN10蛋白质的结构特征。【结果】得到BMI CPN10 CDS 309 bp序列(GenBank登录号:KM098149),成功构建了BMI CPN10基因的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1-CPN10,转染PK15细胞且主要在细胞质中检测到绿色荧光蛋白表达。多组织荧光定量表达分析表明:BMI CPN10 mRNA在皮肤中具有最高表达量,在肝和肾上腺中的表达量较高,在其余各组织中呈中低度表达或几乎不表达。生物信息学分析表明:CPN10编码102个氨基酸,其蛋白分子量为10.93 ku,等电点为8.89,含1个CPN10保守结构域和5个磷酸化位点,二级结构以延伸链结构为主,无跨膜螺旋结构和信号肽。【结论】CPN10基因定位在细胞质中,在皮肤中高表达,该研究结果为进一步研究该基因在免疫排斥方面的功能奠定了理论基础。 展开更多
关键词 伴侣蛋白10 (cpn10) 异种移植 亚细胞定位 组织表达 生物信息学
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高等植物Rubisco的组装及其中间产物的鉴定 被引量:5
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作者 陈根云 肖元珍 李立人 《植物生理学报(0257-4829)》 CSCD 2000年第1期16-22,共7页
将新鲜制备的不含Rubisco的水稻叶片低分子量蛋白组分在离体条件下于室温保温48h,NDPAGE分析发现在ATP5mmol/L和Mg2+5mmol/L的作用条件下,在分子量为560kD位置上有一蛋白带生成。高浓度... 将新鲜制备的不含Rubisco的水稻叶片低分子量蛋白组分在离体条件下于室温保温48h,NDPAGE分析发现在ATP5mmol/L和Mg2+5mmol/L的作用条件下,在分子量为560kD位置上有一蛋白带生成。高浓度的K+在一定程度上抑制它的形成,在保温介质中没有ATP存在时,不能产生560kD分子量的条带,但有一更高分子量(约600kD)蛋白条带的产生,这一条带能在ATP和Mg2+作用下发生解离。Westernblot和SDSPAGE分析证实在ATP和Mg2+存在的情况下,组装成的蛋白确实是Rubisco全酶;而600kD的蛋白是由Rubisco大小亚基和cpn60的α、β亚基组成的一个复合物,用35SMet同位素标记的水稻Rubisco小亚基前体通过跨膜运输与豌豆叶绿体中的大亚基进行异源重组后,发现除了组装成的异源Rubisco杂合酶外,还发现存在有多种组装中间体。根据这些中间体分子量的测定,推测了高等植物Rubisco在cpn60和cpn10作用下完成组装的可能途径。 展开更多
关键词 RUBISCO 组装 中间体 cpn60 cpn10 光合作用
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