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进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆中CP4-EPSPS基因的检测比较研究 被引量：35
1
作者 潘良文 陈家华 +3 位作者 沈禹飞 胡永强 陶军 韩伟 《生物技术通讯》 CAS 2001年第3期175-177,207,共4页
由于国际上对转基因产品的安全性存在较大争议 ,因此对没有加施标签予以声明的情况下大量进入中国市场的转基因产品进行检测就显得十分迫切且意义重大。本研究以进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆为材料 ,通过比较分析外源的CP4 EPSPS基... 由于国际上对转基因产品的安全性存在较大争议 ,因此对没有加施标签予以声明的情况下大量进入中国市场的转基因产品进行检测就显得十分迫切且意义重大。本研究以进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆为材料 ,通过比较分析外源的CP4 EPSPS基因的核苷酸序列和表达的氨基酸序列 ,设计出两对不同的引物 ,采用PCR方法分别对转基因油菜籽和大豆中外源的CP4 展开更多
关键词 抗草甘膦油菜籽 抗草甘膦大豆 cp4-EPSPS PCR cp4-EPSPS基因 检测 转基因作物
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LAMP在检测转基因抗草甘膦大豆cp4-epsps基因上的应用 被引量：21
2
作者 兰青阔 王永 +2 位作者 赵新 朱珠 程奕 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第24期10377-10378,10390,共3页
以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚... 以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚合酶(BstDNA polymerase),在65℃保温30 min,通过荧光显色即可完成对转基因的检测工作。结果显示,该LAMP方法能够特异性检测cp4-epsps基因,其检测灵敏度是常规定性PCR方法的10倍。建立了针对转基因大豆cp4-epsps基因的LAMP检测方法,其具有高度的特异性及稳定性,结果可靠,适合转基因抗草甘膦大豆的快速检测。 展开更多
关键词 转基因抗草甘膦大豆 cp4-epsps IAMP 检测
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抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定 被引量：7
3
作者 敬凌霞 蔡雪飞 +5 位作者 慕生枝 刘湘 张君 唐霓 郑建 黄爱龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期457-459,共3页
目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western b... 目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2)。其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上。ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位。结论成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。 展开更多
关键词 cp4-EPSPS 单克隆抗体 生物学特性 GMO
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棉花草甘膦抗性基因CP4-EPSPS的初步定位 被引量：9
4
作者 刘吉焘 马晓杰 +1 位作者 狄佳春 陈旭升 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期480-484,共5页
以抗草甘膦陆地棉品系G-6和不抗草甘膦海岛棉品系海7124为试验材料,对分离世代进行检测,分析抗性基因的遗传规律;利用覆盖棉花26条染色体的234对核心引物,通过群体分离分析法进行差异性标记筛选,利用F2分离群体对抗性基因进行染色体定... 以抗草甘膦陆地棉品系G-6和不抗草甘膦海岛棉品系海7124为试验材料,对分离世代进行检测,分析抗性基因的遗传规律;利用覆盖棉花26条染色体的234对核心引物,通过群体分离分析法进行差异性标记筛选,利用F2分离群体对抗性基因进行染色体定位。结果表明,抗草甘膦性状是受1对显性基因控制的质量性状。特异引物检测显示控制抗草甘膦性状的基因为人工合成基因CP4-EPSPS。利用筛选获得的27对多态性引物检测F2作图群体每个单株的基因型,发现分子标记NAU5417、NAU1339、BNL3992、BNL2448、NAU2140与目的基因CP4-EPSPS连锁。进一步筛选,共得到15个分子标记。参照现有的遗传图谱,推断目的基因CP4-EPSPS位于棉花第5染色体BNL2448与NAU2140之间,遗传距离分别为7.0 cM和16.2 cM。 展开更多
关键词 棉花 抗草甘膦 cp4-EPSPS SSR标记 基因定位
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CP4-EPSPS转基因棉花植株鉴定方法比较分析 被引量：6
5
作者 郭文芳 王楠 +3 位作者 李刚强 许芳芳 杨彩峰 刘德虎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期114-118,共5页
CP4-EPSPS是从土壤农杆菌CP4菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因,是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因。但是在CP4-EPSPS转基因植物后期筛选过程中仅凭简单的草甘膦抗性筛选并不能得到完全准确的鉴定结果,常会出现假阳性或... CP4-EPSPS是从土壤农杆菌CP4菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因,是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因。但是在CP4-EPSPS转基因植物后期筛选过程中仅凭简单的草甘膦抗性筛选并不能得到完全准确的鉴定结果,常会出现假阳性或漏选的情况。本研究以抗草甘膦转CP4-EPSPS基因棉花为材料,对PCR扩增、ELISA、CP4-EPSPS蛋白检测试纸条及草甘膦抗性四种转基因阳性植株筛选方法进行比较,从筛选结果的准确性、时效性、易用性及实惠性等不同方面综合分析了各种筛选方法的优缺点,结果表明ELISA、试纸条检测方法的准确性显著高于PCR检测与0.3%浓度草甘膦抗性检测,而试纸条检测操作更加便捷,因此建议将草甘膦抗性与试纸条检测方法结合起来使用。本研究结果为以CP4-EPSPS基因为标记筛选的转基因植物的室内及大田筛选提供实验依据。 展开更多
关键词 转基因棉花 cp4-EPSPS 草甘膦抗性 转基因植株筛选
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转CP4-EPSPS基因大豆对大鼠的致突变研究 被引量：3
6
作者 史宗勇 路超 +4 位作者 唐中伟 赵成萍 陈卫国 马艳琴 袁建琴 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第10期286-288,共3页
以SD大鼠为试验动物模型,分别饲喂含转CP4-EPSPS基因大豆和常规大豆饲料,以转基因大豆饲料饲喂大鼠为试验组,常规大豆饲料饲喂大鼠为对照组,择期进行精子畸变试验、显性致死试验和致畸试验。结果表明:试验组和对照组相比精子畸变率无显... 以SD大鼠为试验动物模型,分别饲喂含转CP4-EPSPS基因大豆和常规大豆饲料,以转基因大豆饲料饲喂大鼠为试验组,常规大豆饲料饲喂大鼠为对照组,择期进行精子畸变试验、显性致死试验和致畸试验。结果表明:试验组和对照组相比精子畸变率无显著差异(P>0.05),二者与阳性对照组差异显著(P<0.05);显性致死试验中试验组与对照组胚胎死亡率无显著差异(P>0.05);致畸试验中2组活胎同性别间的体质量、体长、尾长、前肢长度均无显著差异,经活胎外表检查、骨骼检查、内脏检查无畸形。结果说明,喂食转CP4-EPSPS基因大豆饲料对大鼠精子畸变、胚胎致死、胎仔畸形无不良影响,不存在生殖毒性。 展开更多
关键词 转cp4-EPSPS基因大豆 精子畸变 显性致死 致畸试验
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转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的降解规律研究 被引量：1
7
作者 李允静 万丹凤 +9 位作者 刘标 肖芳 李晓飞 武玉花 李俊 高鸿飞 沈文静 李均 朱莉 吴刚 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期124-130,共7页
随着转基因技术发展和应用,转基因外源基因表达蛋白在环境中富集和降解情况成为公众关注的问题,外源蛋白在环境中的检测和监测成为转基因研究和监管的一个方向。本研究利用模拟自然降解和蛋白酶K两种方式,处理转基因大豆种子(5%GTS 40-3... 随着转基因技术发展和应用,转基因外源基因表达蛋白在环境中富集和降解情况成为公众关注的问题,外源蛋白在环境中的检测和监测成为转基因研究和监管的一个方向。本研究利用模拟自然降解和蛋白酶K两种方式,处理转基因大豆种子(5%GTS 40-3-2),采用Western blot、双抗夹心快速检测试纸条和酶联免疫吸附测定(ELISA)等手段检测CP4-EPSPS蛋白降解情况,结果发现在模拟自然降解条件下,CP4-EPSPS蛋白呈现逐渐被降解的趋势,且在17周被彻底降解;蛋白酶K处理大豆匀浆情况下,9小时CP4-EPSPS蛋白被快速降解。该研究探索了CP4-EPSPS蛋白在自然环境下的降解规律,为寻求一种快速、安全、有效降解转基因CP4-EPSPS蛋白研究提供参考。 展开更多
关键词 转基因大豆 cp4-EPSPS 蛋白质 降解
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CP4-EPSPS夹心ELISA配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析 被引量：1
8
作者 李忠鹏 于寒松 +6 位作者 胡耀辉 时圣凤 刘蕴慧 段永杰 李小宇 王永志 李启云 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期206-209,共4页
为获得能够用于夹心ELISA检测的配对抗CP4-EPSPS蛋白单克隆抗体,构建CP4-EPSPS原核表达载体并转化大肠杆菌Rossetta,获得高效表达。通过对可溶性蛋白纯化,获得了高纯度目的蛋白。以纯化后的CP4-EPSPS蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细... 为获得能够用于夹心ELISA检测的配对抗CP4-EPSPS蛋白单克隆抗体,构建CP4-EPSPS原核表达载体并转化大肠杆菌Rossetta,获得高效表达。通过对可溶性蛋白纯化,获得了高纯度目的蛋白。以纯化后的CP4-EPSPS蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和筛选获得2株抗CP4-EPSPS蛋白单克隆抗体(1A5和8A3)。经鉴定,这2株抗体可以有效地识别高温变性和天然CP4-EPSPS蛋白;叠加ELISA分析表明两株抗体识别的抗原表位不同,说明两株抗体能够用于夹心ELISA检测CP4-EPSPS蛋白。 展开更多
关键词 cp4-EPSPS 蛋白表达 单克隆抗体 夹心ELISA
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膨化对转基因豆粕CP4-EPSPS蛋白的影响 被引量：1
9
作者 田芳 王秀敏 +3 位作者 滕达 杨雅麟 敖长金 王建华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期222-226,共5页
旨在研究转基因豆粕经挤压膨化后外源蛋白的变化规律。以CP4-EPSPS多克隆抗体和转基因含量为2%的大豆标准品作为材料,建立ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的方法。结果表明,膨化豆粕中外源蛋白含量随着温度和含水率的... 旨在研究转基因豆粕经挤压膨化后外源蛋白的变化规律。以CP4-EPSPS多克隆抗体和转基因含量为2%的大豆标准品作为材料,建立ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的方法。结果表明,膨化豆粕中外源蛋白含量随着温度和含水率的升高逐渐降低,ELISA法检测低限达到0.25%,可以定量检测经过加工的转基因豆粕。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附法 挤压膨化 转基因豆粕 cp4-EPSPS蛋白
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激光诱导荧光结合磁分离检测CP4-EPSPS基因 被引量：1
10
作者 庞月红 王逸盈 +2 位作者 孙梦梦 沈晓芳 张毅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第16期218-223,共6页
建立一种激光诱导荧光结合磁分离的检测技术,用于在线检测CP4-5-烯醇丙酮酸酯-3-磷酸合酶基因(CP4-5-enol acetate-3-phosphate synthase gene,CP4-EPSPS)。以氨基磁纳米粒子(magnetic nanoparticles,MNPs)为载体修饰cDNA,构建捕获基因... 建立一种激光诱导荧光结合磁分离的检测技术,用于在线检测CP4-5-烯醇丙酮酸酯-3-磷酸合酶基因(CP4-5-enol acetate-3-phosphate synthase gene,CP4-EPSPS)。以氨基磁纳米粒子(magnetic nanoparticles,MNPs)为载体修饰cDNA,构建捕获基因探针,并设计FAM荧光标记的信号基因探针(sDNA)。在目的基因CP4-EPSPS(tDNA)存在的情况下,cDNA和sDNA通过碱基互补配对原则与tDNA结合形成双链结构。该结构通过毛细管时被磁场富集分离,然后在激光诱导荧光检测器的作用下在线检测其荧光信号。通过对MNPs质量浓度、捕获探针浓度、牛血清白蛋白质量浓度进行考察,在优化的实验条件下,在1.0×10^(-11)~2.0×10^(-7)mol/L范围内,CP4-EPSPS基因浓度与荧光峰面积呈良好线性关系,检出限为4.0×10^(-12)mol/L(RSN=3),该方法成功应用于转基因大豆的聚合酶链式反应扩增产物的检测。 展开更多
关键词 激光诱导荧光 cp4-EPSPS基因 转基因大豆
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CP4-EPSPS转基因蛋白的适体筛选与亲和性分析
11
作者 江树勋 郎春燕 +3 位作者 邵碧英 陈洪俊 陈文炳 潘大仁 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期53-57,共5页
目的:通过筛选获得CP4-EPSPS转基因蛋白的最优适体,为应用于检测作准备。方法:体外合成长度为78个碱基的随机ssDNA文库,应用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以CP4-EPSPS转基因蛋白为靶目标进行15轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、... 目的:通过筛选获得CP4-EPSPS转基因蛋白的最优适体,为应用于检测作准备。方法:体外合成长度为78个碱基的随机ssDNA文库,应用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以CP4-EPSPS转基因蛋白为靶目标进行15轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,用DNAMAN软件对每个适体的保守序列和二级结构进行分析并应用生物素-抗地高辛碱性磷酸酶显色系统进行亲和性分析。结果:成功获得靶目标的最优适体,即D04号适体,结合率最高(2.2745)为最低的5.9倍。结论:筛选流程合理、可行,实验结果较理想。 展开更多
关键词 cp4-EPSPS转基因蛋白 SELEX 适体 诱变PCR 亲和性
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石英晶体微天平对CP4-EPSPs草甘膦抗性蛋白检测研究
12
作者 蔡淼 岳喜庆 黄新 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期351-354,共4页
为建立5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合酶(CP4-EPSPs)蛋白的石英晶体微天平(QCM)传感检测方法,采用在金片表面修饰抗原所对应的单克隆抗体的方法,利用QCM技术,对CP4-EPSPs蛋白进行检测研究。结果表明:该方法灵敏度达到500ng·mL-1,特异性好... 为建立5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合酶(CP4-EPSPs)蛋白的石英晶体微天平(QCM)传感检测方法,采用在金片表面修饰抗原所对应的单克隆抗体的方法,利用QCM技术,对CP4-EPSPs蛋白进行检测研究。结果表明:该方法灵敏度达到500ng·mL-1,特异性好,重复性高,检测转基因玉米含量检出限为0.1%。该方法不足之处在于检测仪器不方便携带,在未来研究中考虑研发便携式QCM检测装置。 展开更多
关键词 石英晶体微天平 cp4-EPSPs 转基因作物检测 灵敏度 特异性
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Bar+CP4EPSPS基因转化紫花苜蓿的研究及抗性鉴定
13
作者 王英哲 王一楠 +3 位作者 任伟 徐安凯 刘艳芝 郝东云 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第18期32-39,共8页
为了提高苜蓿抗除草剂的能力,以'公农1号'紫花苜蓿为试验材料,采用农杆菌介导的方法将Bar基因和CP4EPSPS基因转入紫花苜蓿中,研究了优化影响转化的5个主要因子(分别为外植体、农杆菌种类、侵染浓度、共培养时间、筛选浓度),建... 为了提高苜蓿抗除草剂的能力,以'公农1号'紫花苜蓿为试验材料,采用农杆菌介导的方法将Bar基因和CP4EPSPS基因转入紫花苜蓿中,研究了优化影响转化的5个主要因子(分别为外植体、农杆菌种类、侵染浓度、共培养时间、筛选浓度),建立了农杆菌介导的'公农1号'紫花苜蓿高效转化体系,获得转基因植株。结果表明:选择再生苗叶片作为外植体、EHA105农杆菌侵染、菌液浓度OD600值为0.8、共培养3 d、转化过程中草铵膦筛选浓度选择2 mg·L-1为宜,是最佳转化方案。试验结合分子检测和试纸条检测初步证明目的基因已经整合到紫花苜蓿中,最终喷施草甘膦确定12株为转基因植株。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 转化 农杆菌 BAR基因 cp4EPSPS基因
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Roundup Ready大豆中Lectin、CaMV 35S、NOS和CP4 EPSPS基因的提取与RT-PCR定性范围研究
14
作者 王飞 陈伟莉 +3 位作者 付宝莲 王硕 徐艳辉 许传彬 《检验检疫科学》 2009年第1期14-17,共4页
[目的]研究Roundup Ready大豆的Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的RT-PCR定性范围。[方法]用CTAB法提取DNA,对Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的检测条件进行了优化,确定了被检测基因在相同RT-PCR条件下的定性... [目的]研究Roundup Ready大豆的Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的RT-PCR定性范围。[方法]用CTAB法提取DNA,对Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的检测条件进行了优化,确定了被检测基因在相同RT-PCR条件下的定性范围。[结果]研究发现,不同被检测基因在相同RT-PCR条件下的浓度检出范围不同。Lectin为0.05～792mg/L,CaMV35S为0.25～792mg/L,NOS为0.25～396mg/L,CP4EPSPS为0.05～1980mg/L;共同的方法检出限LOD为5ng,体系浓度范围为0.25～396mg/L。[结论]确定了Roundup Ready大豆被检测基因的定性范围和检出限,可应用于大豆中相关基因的检测。 展开更多
关键词 大豆 LECTIN CaMV 35S NOS cp4 EPSPS RT-PCR
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转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的检测及其表达特征研究 被引量：7
15
作者 柴帅杰 武鹏程 +9 位作者 荣瑞娟 郝育杰 史佳楠 郭亚璐 丁国涛 韩宇宁 赵志静 魏健 尹长城 刘国振 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期44-50,共7页
为了建立转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的免疫学检测方法,并了解其在水稻生长过程中的表达特征,本研究在大肠杆菌中表达了CP4-EPSPS蛋白质,纯化后以其为免疫原免疫小鼠,经筛选获得了可识别CP4-EPSPS的单克隆抗体。建立了用免疫印记技术... 为了建立转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的免疫学检测方法,并了解其在水稻生长过程中的表达特征,本研究在大肠杆菌中表达了CP4-EPSPS蛋白质,纯化后以其为免疫原免疫小鼠,经筛选获得了可识别CP4-EPSPS的单克隆抗体。建立了用免疫印记技术检测转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的方法,该方法可以从单粒稻米的0.63%材料中检测到CP4-EPSPS信号。对水稻不同发育时期代表性组织的检测结果表明,CP4-EPSPS蛋白质呈组成型表达,在花药、穗轴、颖壳及不同时期的叶片中的表达量较高,但在分蘖期基部茎节、叶鞘及成熟期种子胚中的表达量稍低。本研究建立的免疫学方法在转基因水稻检测中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 水稻 转基因 cp4-EPSPS 除草剂 免疫印迹
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CP4-EPSPS蛋白在大肠杆菌中的表达与制备 被引量：3
16
作者 刘树鹏 李刚强 +1 位作者 王楠 刘德虎 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期91-97,共7页
构建了一个含有CP4-EPSPS外源基因的细菌表达载体并在大肠杆菌Transtta菌株中的高效表达,通过SDS-PAGE检测发现,目标蛋白完全以可溶性方式存在于细胞破碎上清液中,且约占到细菌可溶性蛋白的40%左右。收集该上清液并进而通过连续2次镍柱... 构建了一个含有CP4-EPSPS外源基因的细菌表达载体并在大肠杆菌Transtta菌株中的高效表达,通过SDS-PAGE检测发现,目标蛋白完全以可溶性方式存在于细胞破碎上清液中,且约占到细菌可溶性蛋白的40%左右。收集该上清液并进而通过连续2次镍柱亲和层析,CP4-EPSPS重组蛋白纯度可达99.9%以上,对其进行N端序列分析,与预期的结果完全一致。以其作为标准品,通过ELISA,成功检测出三株CP4-EPSPS转基因烟草中目标蛋白含量分别为0.292μg/g、0.477μg/g和0.703μg/g。该蛋白表达和纯化体系可为CP4-EPSPS转基因植物蛋白量值溯源传递的标准物质研制提供稳定物质基础。 展开更多
关键词 cp4-EPSPS 蛋白表达 蛋白纯化 酶联检测
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基于RPA技术对转CP4-EPSPS基因产品的快速检测 被引量：2
17
作者 胡秀文 邓波 +6 位作者 王金斌 刘华 唐雪明 王宇 曾海娟 蒋玮 李红 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期227-233,共7页
核酸检测在农产品安全检测中的应用十分广泛,随着转基因作物的商业化种植,迫切需要一种快速、特异、灵敏的转基因作物检测方法。利用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术对含有转基因产品及其制品中CP4-EP... 核酸检测在农产品安全检测中的应用十分广泛,随着转基因作物的商业化种植,迫切需要一种快速、特异、灵敏的转基因作物检测方法。利用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术对含有转基因产品及其制品中CP4-EPSPS基因进行检测,共设计5对引物来筛取最佳引物,并对反应体系和反应温度进行优化。结果表明,该方法采用20μL体系在37℃恒温反应15 min即可对CP4-EPSPS基因进行快速检测。该方法检测转基因的灵敏度阈值为45拷贝,灵敏度高、特异性强,为大规模筛查CP4-EPSPS基因提供了一种新的途径。 展开更多
关键词 重组聚合酶扩增 cp4-EPSPS 转基因作物 核酸检测
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转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立 被引量：1
18
作者 候吉超 李忠鹏 +3 位作者 梁雨欣 张春雨 李小宇 王永志 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期128-133,173,共7页
为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹... 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.3125~80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释;板内变异系数为1.64%~5.42%,板间变异系数为3.05%~9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 cp4-EPSPS 双抗夹心ELISA 大豆 检测
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转基因大豆GTS 40-3-2产品加工过程中lectin和cp4 epsps成分降解规律研究进展 被引量：1
19
作者 杜艳 陈复生 +3 位作者 夏义苗 刘昆仑 张丽芬 刘伯业 《河南工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第6期107-115,共9页
自转基因作物诞生以来,对其质疑之声从未间断。GTS 40-3-2是最早获批、应用最广泛的转基因大豆,为了更好地保护消费者知情权,国内外学者研究了不同大豆产品的加工工艺,探讨了转基因成分的变化规律,其关注点主要在转基因大豆种子检测方... 自转基因作物诞生以来,对其质疑之声从未间断。GTS 40-3-2是最早获批、应用最广泛的转基因大豆,为了更好地保护消费者知情权,国内外学者研究了不同大豆产品的加工工艺,探讨了转基因成分的变化规律,其关注点主要在转基因大豆种子检测方法的开发应用和食品(如豆浆、豆腐等)加工过程中外源成分分子量、含量的变化等方面,而关于食品加工过程中转基因成分的降解机理及本质的影响因素涉及较少。从物理、化学、生物作用3个方面对前人的研究进行梳理,分析转基因大豆GTS 40-3-2中 lectin 和 cp 4 epsps 基因降解的影响因素、降解规律,旨在找到减少甚至去除转基因成分的有效方式,为转基因大豆制品的检测和生产调控提供科学依据。 展开更多
关键词 转基因大豆 GTS 40 3 2 LECTIN 基因 cp4 EPSPS 基因 降解
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CP4-EPSPS蛋白的模拟胃肠液消化稳定性分析 被引量：2
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作者 赵浩含 王建华 刘允军 《生物技术》 北大核心 2017年第2期180-185,204,共7页
CP4-EPSPS蛋白与草甘膦亲和力低,使草甘膦不能阻断生物体内的莽草酸合成途径,成功用于培育抗草甘膦转基因作物。[目的]为评价CP4-EPSPS蛋白的食用安全性,分析了CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液消化中的稳定性研究。[方法]根据NCBI公布的基因... CP4-EPSPS蛋白与草甘膦亲和力低,使草甘膦不能阻断生物体内的莽草酸合成途径,成功用于培育抗草甘膦转基因作物。[目的]为评价CP4-EPSPS蛋白的食用安全性,分析了CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液消化中的稳定性研究。[方法]根据NCBI公布的基因序列信息,人工合成CP4-EPSPS基因并构建原核表达载体p ET-CP4,转化大肠杆菌菌株Transetta(DE3)并表达CP4-EPSPS蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白。根据国家标准建立体外模拟胃肠液消化体系,对照和样品蛋白均以5 g/L的浓度进行模拟胃液消化,以2 g/L的浓度进行模拟肠液消化。在消化0 s、15 s、2 min、30 min和60 min后分别进行取样,然后将其进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳,并进行Western Blot杂交分析。[结果]模拟胃肠液消化实验结果表明,CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液中均在15 s内即被消化,SDS-PAGE与Western Blot杂交未检测到蛋白残留。[结论]说明CP4-EPSPS蛋白在胃肠液体系中极易被消化。 展开更多
关键词 cp4-EPSPS蛋白 消化稳定性 草甘膦 模拟胃液 模拟肠液
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