杉木不同无性系鲜枝叶精油得率及抑菌活性的季节差异

1

作者 高隆辉 伍观娣 +5 位作者 苏艳 黄荣 王润辉 韦如萍 晏姝 郑会全 《植物资源与环境学报》 北大核心 2026年第2期77-83,93,共8页

为揭示不同无性系杉木〔Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook.〕鲜枝叶精油得率及抑菌活性的变异特征并筛选出优良无性系,以广东杉木第3代育种园中88个核心无性系为研究对象,比较分析了不同杉木无性系鲜枝叶精油的得率及其对大肠杆菌(Es... 为揭示不同无性系杉木〔Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook.〕鲜枝叶精油得率及抑菌活性的变异特征并筛选出优良无性系,以广东杉木第3代育种园中88个核心无性系为研究对象,比较分析了不同杉木无性系鲜枝叶精油的得率及其对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑制率的季节差异,采用群体均值四分法进行优良无性系筛选,并对筛选结果进行主成分分析验证,对精油得率与抑菌率进行Pearson相关性分析。结果表明:各季节的精油得率及精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制率的变异系数分别为30.68%~41.20%、41.73%~102.64%、113.80%~299.96%,在不同无性系间差异极显著(P<0.01),重复力均高于0.7,且多在0.9以上。夏季精油得率最高,但与其他季节的差异并不显著;夏季精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制率均最高,并且,夏季精油对大肠杆菌的抑制率显著(P<0.05)高于春季和冬季,对金黄色葡萄球菌的抑制率显著高于秋季和冬季。基于精油得率及精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制率,在春、夏、秋、冬季分别筛选出15、9、11、8个优良无性系,其中,无性系cx79在4个季节均表现优异。相关性分析结果显示:精油得率与抑菌率的相关系数存在明显的季节差异,其中,春季精油得率与抑菌率的相关性最强。综合分析认为,供试杉木核心无性系的鲜枝叶精油得率及抑菌活性变异较大,总体上存在明显的季节性差异和无性系间差异;cx79为最优无性系,可作为杉木精油应用及专用型品种的优良候选材料。 展开更多

关键词 杉木 核心无性系 精油得率 抑菌率 群体均值四分法

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抗鸭乙肝病毒core蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

2

作者 王亚文 刘正稳 +5 位作者 张琳 冯艾 王威 王全颖 杨广笑 惠凌云 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期768-772,共5页

目的制备抗鸭乙肝病毒core蛋白的单克隆抗体并进行鉴定。方法 PCR扩增鸭乙肝病毒(DHBV)core基因片段,构建表达载体pET28a(+)/DHBV core。转化诱导表达融合蛋白,用Ni 2+亲和柱纯化目的蛋白。免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融... 目的制备抗鸭乙肝病毒core蛋白的单克隆抗体并进行鉴定。方法 PCR扩增鸭乙肝病毒(DHBV)core基因片段,构建表达载体pET28a(+)/DHBV core。转化诱导表达融合蛋白,用Ni 2+亲和柱纯化目的蛋白。免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选,采用有限稀释法筛选单克隆杂交瘤细胞并进行细胞克隆。体内诱生法大量制备单克隆抗体,进行抗体的特异性、效价和亚型的鉴定。结果成功构建表达载体pET28a(+)/DHBV core,并表达DHBV core蛋白。获得2株稳定分泌抗DHBV core抗体的杂交瘤细胞株,分别为2D7和5G10,细胞培养液抗体效价为1∶400和1∶800。选择5G10细胞株制备单克隆抗体,小鼠腹水抗体效价可达1∶320 000。鸭肝组织免疫组化结果显示,DHBV病毒载量>1010copies/mg的肝组织中DHBV core蛋白的表达明显高于病毒载量<105copies/mg的肝组织,而未感染DHBV的鸭肝细胞内不表达DHBV core蛋白。亚型鉴定结果为IgG2aκ链。结论制备并获得了抗DHBV core蛋白的单克隆抗体,为DHBV core蛋白的功能研究、诊断试剂的研制与抗病毒治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭乙肝病毒 核心蛋白 单克隆抗体 细胞克隆

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表达HCV core-Ant的重组慢病毒的构建 被引量：1

3

作者 马列婷 李砚 王亚文 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期415-418,共4页

目的构建表达HCV核心区的重组慢病毒,以探讨HCV感染后该病毒核心蛋白对肝脏干细胞转分化的影响。方法利用PCR体系延伸互为模板的引物,通过T载体克隆法获得HCV core-Ant基因克隆,酶切后连入pLenti6/V5-D-TOPO质粒,得到pLenti6/V5-D-HCV c... 目的构建表达HCV核心区的重组慢病毒,以探讨HCV感染后该病毒核心蛋白对肝脏干细胞转分化的影响。方法利用PCR体系延伸互为模板的引物,通过T载体克隆法获得HCV core-Ant基因克隆,酶切后连入pLenti6/V5-D-TOPO质粒,得到pLenti6/V5-D-HCV core-Ant,连同pLP/VSVG、pLP1和pLP2四质粒共转染293ET细胞,获得了表达HCV core-Ant重组慢病毒。收集病毒上清,大量扩增,用免疫组化法检测目的基因在Hela细胞的表达。用类似的方法构建了表达EGFP的重组慢病毒并测定其滴度。结果克隆出HCV core-Ant基因,经酶切及测序证实结果正确;使用表达HCV core-Ant重组慢病毒感染Hela细胞,免疫组化实验证实胞浆有HCV core表达。使用表达EGFP的重组慢病毒感染3T3细胞见到绿色荧光,说明构建慢病毒载体有效。结论通过分子克隆体外重组技术成功制备了表达HCV core的重组慢病毒,为进一步研究丙肝病毒致癌机制奠定了基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒核心蛋白 重组慢病毒 分子克隆

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基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析

4

作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页

【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多

关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 CRISPR/Cas9

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HCV core 1b亚型和HA共表达重组腺病毒载体的构建与鉴定

5

作者 蒋丽娜 李航 +2 位作者 谷雨 叶菁 李青 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第1期8-11,共4页

目的:构建HCV core 1b亚型和HA共表达的腺病毒载体并予以鉴定。方法:合成HCV核心蛋白1b亚型的核苷酸,连接入pcmv5-HA质粒中。用XhoⅠ单酶切,后用Klenow酶补平,再用HindⅢ单酶切下HA-HCV core 1b片段,连入pShuttle-cmv穿梭质粒中,构建穿... 目的:构建HCV core 1b亚型和HA共表达的腺病毒载体并予以鉴定。方法:合成HCV核心蛋白1b亚型的核苷酸,连接入pcmv5-HA质粒中。用XhoⅠ单酶切,后用Klenow酶补平,再用HindⅢ单酶切下HA-HCV core 1b片段,连入pShuttle-cmv穿梭质粒中,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-HA core 1b.将pShuttle-CMV-HA core 1b转化至含有AdEasy-1的BJ5183感受态细菌中进行同源重组。PacⅠ酶切线性化重组质粒pAd-HA-HCV core 1b并转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。用RT-PCR检测HA-HCVcore 1b的mRNA的表达水平,并用Western blot检测融合表达蛋白HA-HCV core 1b的表达水平。结果:穿梭质粒pShuttle-CMV-HA-HCV core 1b经PCR和测序证实构建成功。重组腺病毒载体经AD293细胞包装后,可观察到CPE现象。用获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞,经RT-PCR检测,在mRNA水平上有表达;经Western blot检测,HCV core 1b亚型腺病毒载体(Ad-HA-HCV core 1b)感染组与未感染腺病毒载体组及空白对照组相比,只有Ad-HA-HCV core 1b感染组有融合蛋白HA-HCVcore 1b的表达。结论:通过分子克隆体外重组技术,成功构建了HCV core 1b亚型和HA共表达的重组腺病毒载体Ad-HA-HCVcore 1b。为进一步研究丙型肝炎病毒1b亚型引起丙肝感染中胰岛素抵抗的作用机制提供了方法。 展开更多

关键词 HCV core 1b亚型 重组腺病毒载体 分子克隆

原文传递

丙型肝炎病毒核心区蛋白在HepG2细胞中的表达 被引量：10

6

作者 全俊 胡国龄 +2 位作者 范学工 刘双虎 谭德明 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第20期34-35,41,共3页

目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中 ,用脂质体包裹后转染... 目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中 ,用脂质体包裹后转染肝癌细胞系HepG2 ,通过G4 18筛选获得稳定转染细胞系 ,并通过间接免疫荧光法检测HepG2中丙型肝炎病毒核心区蛋白的表达。结果 :克隆的基因全长 5 94bp ,并经测序和重组质粒双酶切证实为所需目的基因 ;经间接免疫荧光验证实转染了目的基因的HepG2细胞中有丙型肝炎核心区蛋白的表达。结论 :丙型肝炎病毒核心区蛋白能在HepG2细胞中稳定表达。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 核心区蛋白 HEPG2细胞 基因表达 基因克隆

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柞蚕核型多角体病毒sod基因核心序列的克隆与分析 被引量：1

7

作者 徐家萍 王文兵 +1 位作者 陈克平 赵远 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期190-193,共4页

根据多种鳞翅目昆虫NPVsod基因的保守区序列设计引物,克隆了柞蚕NPV的sod基因中300个核苷酸的核心区序列。通过同源性比较发现,柞蚕NPV的sod基因与云杉卷叶蛾(Choristioneurefumiferana)和黄杉毒蛾(Orgyiapseudotsugata)NPV的sod基因的... 根据多种鳞翅目昆虫NPVsod基因的保守区序列设计引物,克隆了柞蚕NPV的sod基因中300个核苷酸的核心区序列。通过同源性比较发现,柞蚕NPV的sod基因与云杉卷叶蛾(Choristioneurefumiferana)和黄杉毒蛾(Orgyiapseudotsugata)NPV的sod基因的同源性较高,分别为80 1%和76 6%,而与家蚕NPV和苜蓿尺蠖NPV的同源性相对较远。 展开更多

关键词 柞蚕核型多角体病毒 SOD基因 核心序列 克隆

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嗜人类T淋巴细胞病毒Ⅰ型核心蛋白P24基因的克隆与表达 被引量：1

8

作者 张春涛 尹红章 +4 位作者 李秀华 宋爱京 李德富 夏宁邵 张军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期260-262,共3页

目的 从感染HTLV-1的中国患者外周血单核细胞（PBMCs）中扩增编码HTLV-1核心蛋白P24的cDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取感染者PBMCs基因组DNA,应用巢式PCR方法扩增出HTLV-1核心蛋白P24的cDNA并测序,与pGEX-20T载体构建重组质粒,... 目的 从感染HTLV-1的中国患者外周血单核细胞（PBMCs）中扩增编码HTLV-1核心蛋白P24的cDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取感染者PBMCs基因组DNA,应用巢式PCR方法扩增出HTLV-1核心蛋白P24的cDNA并测序,与pGEX-20T载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21中表达,采用ELISA和Westernblot分析重组蛋白活性。结果HTLV-1核心蛋白P24基因序列高度保守,构建重组载体后,在大肠杆菌中表达的重组蛋白,经检测具有较强的抗原活性。结论 成功地表达了HTLV-1型病毒的核心蛋白P24基因,为国产诊断试剂和疫苗的研发打下了基础。 展开更多

关键词 嗜人类T淋巴细胞病毒I型 核心蛋白P24 基因表达 基因克隆 白血病 ATL

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鸭乙型肝炎病毒核心抗原DNA疫苗的构建及其诱导的体液免疫应答 被引量：1

9

作者 蒋定锋 闫梁 +3 位作者 贲海静 赵艳丰 秦智强 瞿涤 《微生物与感染》 2009年第3期140-145,151,共7页

为研究鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)真核表达质粒的免疫原性,分析DHBcAgDNA疫苗诱导的体液免疫应答,首先借助生物信息学方法对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)Core基因编码的氨基酸序列进行亲疏水性分析,分别构建DHBcAg全基因(E-DHBc263)及去... 为研究鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)真核表达质粒的免疫原性,分析DHBcAgDNA疫苗诱导的体液免疫应答,首先借助生物信息学方法对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)Core基因编码的氨基酸序列进行亲疏水性分析,分别构建DHBcAg全基因(E-DHBc263)及去除疏水性序列的DHBcAg片段(E-DHBc180)的真核表达质粒,间接免疫荧光检测结果显示可在COS7细胞内表达。进一步构建原核表达质粒p-DHBc263和p-DHBc180,仅p-DHBc180可表达蛋白,纯化后作为酶联免疫吸附试验(ELISA)包被抗原,用于DHBcAb的检测。分别用E-DHBc263和E-DHBc180免疫小鼠,采用间接ELISA检测DHBcAb。结果显示,E-DHBc180可诱导免疫小鼠产生DHBcAb免疫应答,加强免疫后效价可达1∶100～1∶400。结果提示,E-DHBc180可作为DHBcAgDNA疫苗,在DHBV感染鸭模型中评价其效果。 展开更多

关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心抗原 克隆 DNA疫苗

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牛丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6同源基因的克隆化研究 被引量：7

10

作者 成军 李克 +4 位作者 王琳 陆荫英 刘妍 王刚 张玲霞 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期73-76,共4页

目的　利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用生物信息学技术和方法 ,克隆牛丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6 (HCBP6 )的同源基因。方法　首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体为诱饵 ,对于百万... 目的　利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用生物信息学技术和方法 ,克隆牛丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6 (HCBP6 )的同源基因。方法　首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体为诱饵 ,对于百万级的肝细胞cDNA文库酵母进行配合、筛选 ,首先获得人HCBP6的全长编码基因 ,然后应用美国国立生物信息学中心 (NCBI)建立的核苷酸序列数据库 (GenBank)的同源基因的检索 ,搜索与之同源的来源于牛的表达序列标签 (EST)。然后根据基因同源性的原则 ,确定牛HCBP6的同源基因。结果　获得了与HCV核心蛋白结合蛋白的 36个基因片段 ,其中之一命名为HCBP6。根据基因同源性搜索 ,获得了来源于牛的EST基因序列片段 ,最终确立了牛HCBP6的同源基因。结论　利用不同物种之间基因同源性的原理 ,NCBI数据库GenBank同源基因的搜索 ,获得了牛HCBP6同源基因。生物信息学技术在后基因组时代具有重要地位和作用。 展开更多

关键词 牛丙型肝炎病毒 核心蛋白 结合蛋白6 同源基因 基因克隆 基因序列

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猪丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6同源基因的克隆化研究 被引量：5

11

作者 成军 李克 +4 位作者 王琳 陆荫英 刘妍 王刚 张玲霞 《生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期10-13,33,共5页

利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用分子生物学与生物信息学技术和方法 ,克隆猪丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6(HCBP6)的同源基因。首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体作为诱饵 ,对于百万... 利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用分子生物学与生物信息学技术和方法 ,克隆猪丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6(HCBP6)的同源基因。首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体作为诱饵 ,对于百万级的肝细胞cDNA文库酵母进行配合、筛选 ,首先获得人HCBP6的全长编码基因 ,然后应用美国国立生物工程中心 (NCBI)建立的核苷酸序列数据库 (GenBank)的同源基因的检索 ,搜索与之同源的来源于猪的表达序列标签 (EST)。然后根据基因同源性的原则 ,确定猪HCBP6的同源基因。获得了与HCV核心蛋白结合蛋白的 3 6个基因片段 ,其中之一命名为HCBP6。根据基因同源性搜索 ,获得了来源于猪的EST基因序列片段 ,最终确立了猪HCBP6的同源基因。利用不同物种之间基因同源性的原理、NCBI数据库GenBank同源基因的搜索 ,获得了猪HCBP6同源基因。 展开更多

关键词 猪 丙型肝炎病毒 核心蛋白 结合蛋白 基因 克隆化

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细粒棘球绦虫H3蛋白的克隆表达及囊型包虫病检测效果评价 被引量：2

12

作者 朱慧慧 高春花 +2 位作者 汪俊云 杨玥涛 石锋 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期541-544,593,共5页

目的克隆、表达细粒棘球绦虫基底膜特异性硫酸乙酰肝素聚糖核心蛋白(H3),并评价其检测囊型包虫病的效果。方法将从细粒棘球绦虫原头节cDNA文库中免疫筛选的H3基因,克隆入pGEX-4T表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,用异丙基硫代... 目的克隆、表达细粒棘球绦虫基底膜特异性硫酸乙酰肝素聚糖核心蛋白(H3),并评价其检测囊型包虫病的效果。方法将从细粒棘球绦虫原头节cDNA文库中免疫筛选的H3基因,克隆入pGEX-4T表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,用ELISA方法检测囊型包虫病患者血清、其他寄生虫病患者血清及健康人血清,评价其检测效能,并与本课题组制备的细粒棘球蚴包囊液粗抗原(Hydatid cyst fluid,HCF)和重组Ag B8/2进行比较。结果成功构建细粒棘球蚴pGEX-4T-H3重组质粒,并在原核细胞中成功表达。重组H3抗原、纯化HCF和rAgB8/2检测囊型包虫病患者血清的敏感度分别为84.0%(68/81)、90.1%(73/81)、77.8%(63/81),3者差异无统计学意义(χ2=4.58,P〉0.05)。重组H3抗原与泡型包虫病患者、囊虫病患者及血吸虫病患者血清分别存在63.3%(19/30)、16.7%(5/30)和5.0%(1/20)的交叉反应,与50份健康者血清无交叉反应;H3检测总特异度为80.8%(105/130),H3、纯化HCF[71.5%(93/130)]和rAgB8/2[82.3%(107/130)]特异度间差异无统计学意义(χ2=5.71,P〉0.05)。结论重组H3抗原在囊型包虫病诊断上具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 基底膜特异性硫酸乙酰肝素聚糖核心蛋白(H3) 基因克隆 表达 诊断抗原 酶联免疫吸附试验 敏感度 特异度 交叉反应

原文传递

人TSLC1基因核心启动子的克隆和鉴定

13

作者 高静 申林 明树红 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第4期406-410,共5页

目的克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区,用于开展其转录调控机制的研究。方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段,连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细... 目的克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区,用于开展其转录调控机制的研究。方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段,连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细胞,检测细胞裂解液中的双荧光素酶活性,确定TSLC1基因的核心启动子区。结果在人TSLC1基因启动子区的分段克隆中,ATG上游-68～-329 bp片段在A549及NCI-H446细胞中均具有很强的启动活性,对TSLC1的转录起重要作用。结论人TSLC1基因翻译起始位点ATG上游-68～-329 bp区域可能为基因的核心启动子区。 展开更多

关键词 TSLC1 核心启动子 克隆 鉴定

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杂合启动子HREAF的构建及其肝癌特异性分析 被引量：2

14

作者 陈泽建 杜芝燕 +3 位作者 徐元基 张金强 陈惠华 陆应麟 《生物技术通讯》 CAS 2003年第6期474-479,共6页

本研究将在几乎所有肝癌细胞中均有高特异性的杂合启动子HREAF用于构建肝癌特异性溶瘤腺病毒。根据文献报道的缺氧应答元件(HRE)和人甲胎蛋白(AFP)核心启动子(AF0.3)基因序列,设计并合成2对引物,采用PCR方法从肝癌细胞基因组DNA中扩增... 本研究将在几乎所有肝癌细胞中均有高特异性的杂合启动子HREAF用于构建肝癌特异性溶瘤腺病毒。根据文献报道的缺氧应答元件(HRE)和人甲胎蛋白(AFP)核心启动子(AF0.3)基因序列,设计并合成2对引物,采用PCR方法从肝癌细胞基因组DNA中扩增获得大小分别约为.560 bp的HRE DNA片段和310 bp的AF0.3 DNA片段,连接到pGEM-T Easy载体进行测序,证明获得了HRE和AF0.3的基因片段。将HRE和AF0.3的PCR产物分别进行PstI和SspI酶切并末端补平后直接连接,将此约700 bp的连接产物克隆到pGEM-T Easy载体进行测序,证明杂合启动子HREAF构建成功。将HREAF亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle并在其后克隆入受其调控的腺病毒早期基因E1,构建成肝癌特异性溶瘤腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1,经PCR及酶切鉴定。将pShuttle-HREAF-E1转染肺癌细胞株及AFP产量不等的不同人肝癌细胞株,经Ela的RT-PCR检测证实杂合启动子HREAF可调控目的基因在AFP产量不等的不同人肝癌细胞系中特异性高表达。杂合启动子HREAF及腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1的构建为进一步研制肝癌特异性重组溶瘤腺病毒及其体内外肝癌特异杀伤作用的研究打下了基础。 展开更多

关键词 肝癌 缺氧应答元件 甲胎蛋白核心启动子 溶瘤腺病毒 基因克隆

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FPV 4b核心蛋白基因的克隆及其探针制备

15

作者 郭建顺 金宁一 +3 位作者 张学东 冯立文 沈晓峰 李文红 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期440-443,共4页

利用PCR方法成功克隆了FPV 4b核心蛋白基因1 361 bp片段。序列分析表明:该序列与模板DNA(AF198100)的碱基序列同源性为99.5%,只有7个碱基差异(第215位C→A,第386位T→A,第388位G→A,第1 014位T→G,第1 034位T→G,第1 137位C→T,第1 143... 利用PCR方法成功克隆了FPV 4b核心蛋白基因1 361 bp片段。序列分析表明:该序列与模板DNA(AF198100)的碱基序列同源性为99.5%,只有7个碱基差异(第215位C→A,第386位T→A,第388位G→A,第1 014位T→G,第1 034位T→G,第1 137位C→T,第1 143位A→G)。回收FPV 4b核心蛋白基因1 361 bp片段与pMD18-T载体相连构建重组质粒pMD18-T-4b,用EcoRⅠ酶切pMD18-T-4b后得到1个约360 bp大小的DNA片段,以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针。对新标记的探针进行标记效率检测,结果显示其标记效率为100 mg/L。敏感性检测表明,该探针对同源DNA的检出限量为10 pg。特异性检测结果表明,用本试验所标记的探针对提取的FPV 282E4和FPV JL株DNA、重组质粒pMD 18-T-4b进行检测结果均呈阳性,而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均呈阴性,说明该探针具有较强的特异性。 展开更多

关键词 鸡痘病毒 4b核心蛋白基因 克隆 基因探针

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丙型肝炎病毒核心蛋白基因在毕赤酵母中克隆与分析

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作者 邵金辉 胡洁 +3 位作者 朱有名 吴围屏 吴坚美 王志宇 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第2期1-3,共3页

目的:克隆丙型肝炎病毒核心蛋白基因及其上游DNA序列,为此基因的表达研究作准备。方法:用反转录和PCR方法从HCV的总RNA中扩增得到核心蛋白基因及其上游DNA序列,连接到pMD18-T载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表... 目的:克隆丙型肝炎病毒核心蛋白基因及其上游DNA序列,为此基因的表达研究作准备。方法:用反转录和PCR方法从HCV的总RNA中扩增得到核心蛋白基因及其上游DNA序列,连接到pMD18-T载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒,测序证明正确后,再将目的基因在毕赤酵母中进行克隆,鉴定。结果:重组质粒转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论:应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HCV核心蛋白基因。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 聚合酶链反应 克隆 巴斯德毕赤酵母

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乙肝病毒突变核心蛋白基因的克隆及序列分析

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作者 张洪勤 李佩珍 应俊 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期573-574,共2页

目的克隆发生长片段缺失的乙肝病毒核心蛋白基因（HBV-C），并对其进行DNA序列和蛋白质结构分析。方法通过PCR从1株乙型肝炎病毒中扩增得到发生长片段缺失的HBV-C基因，利用TA克隆将PCR产物克隆人pUCm—T载体并进行测序、同源性比较和... 目的克隆发生长片段缺失的乙肝病毒核心蛋白基因（HBV-C），并对其进行DNA序列和蛋白质结构分析。方法通过PCR从1株乙型肝炎病毒中扩增得到发生长片段缺失的HBV-C基因，利用TA克隆将PCR产物克隆人pUCm—T载体并进行测序、同源性比较和蛋白质结构分析。结果PCR扩增出的HBV-C基因经序列分析表明长度为454bp，其核苷酸序列缺失了220—317bp之间的98个碱基，造成从74个氨基酸起发生移码突变。结论成功克隆发生长片段缺失的HBV-C基因，为表达及功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 乙肝病毒 核心蛋白基因 缺失 基因克隆

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血小板源生长因子受体结合域基因与乙型肝炎核心抗原基因融合克隆的构建

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作者 武湘兵 李进 王彩平 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 1997年第3期205-207,共3页

血小板源生长因子在动脉粥样硬化发生中起着重要的作用。为了阻断血小板源生长因子致动脉粥样硬化的作用，我们利用基因工程技术试图制各血小板源生长因子受体结合城与乙型肝炎核心抗原的融合蛋白，并以此蛋白作为疫苗，探讨其防治动脉... 血小板源生长因子在动脉粥样硬化发生中起着重要的作用。为了阻断血小板源生长因子致动脉粥样硬化的作用，我们利用基因工程技术试图制各血小板源生长因子受体结合城与乙型肝炎核心抗原的融合蛋白，并以此蛋白作为疫苗，探讨其防治动脉粥样硬化发生发展的可能性．本文报道血小板源生长因子受体结合城基因的化学合成以及与乙型肝炎核心抗原基因的融合克隆的构建，经双酶切、序列分析证实，这两种基因融合成功。 展开更多

关键词 血小板源 生长因子 乙型肝炎 核心抗原 基因克隆

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丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆与表达

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作者 李越希 唐家琪 《生物技术通讯》 CAS 1994年第3期106-109,共4页

以含有丙型肝炎病毒核心蛋白基因的质粒pJLA502-C为模板,用PCR方法重新扩增克隆了核心蛋白基因,在扩增基因的上下端分别增加了NCOⅠ及SalⅠ酶切位点。将克隆的基因酶切后插入表达载体pBV221内,转化大肠肝菌DH_(5α),获得表达非融合核心... 以含有丙型肝炎病毒核心蛋白基因的质粒pJLA502-C为模板,用PCR方法重新扩增克隆了核心蛋白基因,在扩增基因的上下端分别增加了NCOⅠ及SalⅠ酶切位点。将克隆的基因酶切后插入表达载体pBV221内,转化大肠肝菌DH_(5α),获得表达非融合核心蛋白的工程菌,42℃热诱导5hr,表达蛋白占菌体蛋白总量的15％。经包涵体纯化及分子筛纯化等,获得核心蛋白,经ELISA及Western Blotting分析表明有较好的抗原性和特异性。 展开更多

关键词 HCV 核心蛋白 基因克隆与表达 PCR 抗原性

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核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达 被引量：2

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作者 彭佳 王国华 +4 位作者 陈坤 宋晓国 张贺秋 周见远 何竞 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第4期1-3,共3页

目的克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因。方法人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠... 目的克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因。方法人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性。结果人工合成的354 bpDNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因。将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物。SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符。在非变性条件下纯化目的蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当。结论成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因。 展开更多

关键词 核心链霉亲和素 克隆 表达

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