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基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析
1
作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页
【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 CRISPR/Cas9
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103例核心结合因子融合基因阳性急性髓系白血病单中心回顾性临床分析
2
作者 向晓芸 王思宇 +4 位作者 石泽延 姚奕斌 唐中源 许玉玲 刘振芳 《临床血液学杂志》 2026年第1期45-52,共8页
目的:探讨核心结合因子相关急性髓系白血病(core binding factor acute myeloid leukemia,CBF-AML)患者的临床与分子特征及预后相关因素。方法:收集2016年4月—2024年8月广西医科大学第一附属医院收治的103例CBF-AML患者临床资料,比较CB... 目的:探讨核心结合因子相关急性髓系白血病(core binding factor acute myeloid leukemia,CBF-AML)患者的临床与分子特征及预后相关因素。方法:收集2016年4月—2024年8月广西医科大学第一附属医院收治的103例CBF-AML患者临床资料,比较CBFβ-MYH11、RUNX1-RUNX1T1两种亚型患者的临床特征;分析附加染色体异常、基因突变、微小残留病(MRD)状态及异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)对预后的影响。结果:(1)与RUNX1-RUNX1T1阳性患者相比,携带CBFβ-MYH11融合基因的患者初诊时白细胞计数明显升高(32.12×10^(9)/L vs 11.16×10^(9)/L),骨髓原始细胞比例亦较高(59.50%vs 48.25%);而RUNX1-RUNX1T1阳性患者髓外浸润发生更常见(18.33%vs 2.33%)(P<0.05)。(2)附加染色体异常以性染色体缺失(-X/-Y)为主(25例,27.17%),其在RUNX1-RUNX1T1 AML患者发生率显著高于CBFβ-MYH11患者(68.52%vs 31.58%,P<0.001)。(3)共检出16种基因突变,其中KIT突变最常见(36例,38.71%),其次为RAS突变(24例,25.81%)。两类突变均在RUNX1-RUNX1T1 AML患者中发生率较高(P<0.05)。(4)巩固治疗1个疗程后,MRD阳性患者的总生存率(OS)显著低于MRD阴性患者(P<0.05)。对MRD阳性患者采用allo-HSCT后,57.90%在移植后获得分子学缓解;allo-HSCT能显著改善CBF-AML患者的OS、无事件生存率及无复发生存率(P<0.05),但获益情况与MRD状态有关。结论:CBF-AML两种亚型各具临床及分子特征;MRD状态是重要预后指标,为风险分层治疗提供依据;allo-HSCT获益情况因MRD状态而异。 展开更多
关键词 核心结合因子相关急性髓系白血病 附加染色体异常 基因突变 微小残留病 生存分析
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髓系高频基因突变在核心结合因子相关急性髓系白血病中发生率与预后影响
3
作者 问蓉 陶善东 李元媛 《医学检验与临床》 2026年第2期40-44,共5页
目的:观察髓系高频基因突变在核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)中的发生率及预后影响。方法:回顾性分析我院自2018年1月-2023年12月116例确诊CBF-AML的临床资料,预后相关的髓系高频基因突变均采用二代测序的方法检测。主要观察... 目的:观察髓系高频基因突变在核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)中的发生率及预后影响。方法:回顾性分析我院自2018年1月-2023年12月116例确诊CBF-AML的临床资料,预后相关的髓系高频基因突变均采用二代测序的方法检测。主要观察指标为常见预后相关基因突变发生率,次要观察指标为患者治疗完全缓解率(CR)、总生存期(OS)与无复发生存期(RFS)。结果:①在116例CBF-AML骨髓样本中共检测到11种基因突变(KIT、RAS、FLT3、WT1、TET2、DNMT2A、RUNX1、CEBPA、IDH1、IDH2、ASXL1、TP53、NPM1),突变发生率较高的6种基因分别为KIT25.0%(29/116)、RAS23.2%(27/116)、FLT318.1%(21/116)、WT113.8%(16/116)、DNMT3A12.9%(15/116)、TET212.1%(14/116)。②与非突变组相比,伴随DNMT3A和WT1突变的CBF-AML患者初始诱导缓解率较低,分别为33.3%vs65.3%,P=0.021和37.5%vs68.0%,P=0.025,伴随KIT、RAS、FLT3、TET2突变初始诱导缓解率无明显差异。③与非突变组相比,伴随KIT突变和WT1突变患者的中位OS均显著缩短,分别为16.6个月vs28.6个月、13.2个月vs28.6个月(P<0.05);伴随DNMT3A突变组患者中位RFS较非突变组缩短,分别为6.5个月vs28.5个月(P=0.09),但差异无统计学意义。结论:KIT、RAS、FLT3和WT1突变在CBF-AML患者中发生率较高,伴随DNMT3A、WT1突变的CBF-AML患者初始诱导缓解率低、生存期短。 展开更多
关键词 髓系高频基因突变 核结合因子 二代测序 急性髓系白血病 突变频率
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儿童核心结合因子相关急性髓系白血病的治疗进展
4
作者 陈碧溪 崔清彦 陈森 《妇儿健康导刊》 2026年第2期28-33,38,共7页
核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)占儿童急性髓系白血病的25%~30%,经典化疗方案治疗具有较高的缓解率,预后较好,但由于合并RAS、KIT、FLT3-ITD等基因突变,CBF-AML患儿仍面临较高的复发风险。维奈克拉、吉妥珠单抗、去甲基化药... 核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)占儿童急性髓系白血病的25%~30%,经典化疗方案治疗具有较高的缓解率,预后较好,但由于合并RAS、KIT、FLT3-ITD等基因突变,CBF-AML患儿仍面临较高的复发风险。维奈克拉、吉妥珠单抗、去甲基化药物及异基因造血干细胞移植等治疗手段的应用,对减少患儿治疗相关不良反应、降低复发率并改善生存质量具有重要意义。本文针对CBF-AML患儿的化疗、免疫治疗及造血干细胞移植等领域的研究进展进行综述,以期为临床实践提供参考。 展开更多
关键词 核心结合因子 急性髓系白血病 儿童 化疗 免疫治疗 造血干细胞移植
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急性心肌梗死患者PCI术后抑郁新型预测因子的筛选
5
作者 冯实 郑海亮 +4 位作者 马立庆 赵惠芳 郝翠杰 冯宝 梁淑新 《中国分子心脏病学杂志》 2025年第2期6710-6715,共6页
目的筛选急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后抑郁的新型预测因子。方法选取2021年1月至2024年3月河北大学附属医院心内科住院首次诊断为AMI并行PCI... 目的筛选急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后抑郁的新型预测因子。方法选取2021年1月至2024年3月河北大学附属医院心内科住院首次诊断为AMI并行PCI治疗的患者244例,依据出院时汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale-24,HAMD-24)评分结果将患者分为抑郁组(>20分,58例)和非抑郁组(≤20分,186例)。采用logistic回归分析和受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析。结果两组患者的摄食抑制因子-1(Nesfatin-1)、S100钙结合蛋白β(S100β)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血清水平差异有统计学意义(P均<0.01)。多因素logistic回归分析显示,Nesfatin-1≥3.26 ng/mL、S100β≥1.09μg/L、Hcy≥19.53μmol/L为AMI患者PCI术后抑郁的危险因素。ROC曲线分析显示,Nesfatin-1、S100β、Hcy水平均可预测AMI患者PCI术后抑郁的发生,曲线下面积(area under the curve,AUC)均>0.800。三项指标联合预测AMI患者PCI术后AUC为0.954(95%CI:0.890~0.997),高于单项指标(P均<0.05),其灵敏度、特异度分别为98.31%和87.32%。结论Nesfatin-1、S100β、Hcy是AMI患者PCI术后抑郁的独立预测因子,三者联合预测价值更高。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 经皮冠状动脉介入治疗 抑郁 预测 摄食抑制因子-1 S100钙结合蛋白β 同型半胱氨酸
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精神分裂症患者血清GNA13、IGFBP1水平与治疗效果及预后的关系
6
作者 李阳 胡畔 王文韬 《国际检验医学杂志》 2025年第24期2981-2986,共6页
目的探讨精神分裂症患者血清鸟嘌呤核苷酸结合蛋白α亚基13(GNA13)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)水平与治疗效果及预后的关系。方法选取2022年1月至2023年8月于该院就诊的精神分裂症患者198例作为研究组。另选取同期在该院进行... 目的探讨精神分裂症患者血清鸟嘌呤核苷酸结合蛋白α亚基13(GNA13)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)水平与治疗效果及预后的关系。方法选取2022年1月至2023年8月于该院就诊的精神分裂症患者198例作为研究组。另选取同期在该院进行体检的同年龄段健康者190例作为对照组。研究组根据治疗效果分为有效组(n=115)和无效组(n=83)。研究组根据预后情况又分为预后良好组133例、预后不良组65例。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清GNA13、IGFBP1水平。多因素Logistic回归分析精神分裂症患者预后不良的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GNA13、IGFBP1水平对精神分裂症患者预后不良的预测价值。结果研究组治疗前、后血清GNA13、IGFBP1水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有效组治疗后血清GNA13、IGFBP1水平较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组治疗前GNA13、IGFBP1及阳性和阴性症状量表(PANSS)评分较预后良好组升高,而治疗前标准化精神分裂症认知功能成套测验(MCCB)评分较预后良好组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,治疗前GNA13、IGFBP1及PANSS评分升高是精神分裂症患者发生预后不良的危险因素(P<0.05),而治疗前MCCB评分升高是精神分裂症患者发生预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,GNA13、IGFBP1联合预测精神分裂症患者发生预后不良的曲线下面积(AUC)明显高于单独检测的AUC(P<0.05)。结论精神分裂症患者血清GNA13、IGFBP1水平升高,其变化与治疗效果及预后密切相关,且二者联合检测对患者发生预后不良具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 精神分裂症 鸟嘌呤核苷酸结合蛋白α亚基13 胰岛素样生长因子结合蛋白1 预后
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淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化 被引量：39
7
作者 鲍远 黄俊明 +5 位作者 靖兴志 李兴艳 董永辉 张津铭 郭风劲 陈安民 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第24期3501-3507,共7页
背景:传统中药淫羊藿应用于各类骨科疾病有着悠久的历史,其主要成分之一淫羊藿苷有多种生物学效应。目的:探讨淫羊藿苷在体内及体外对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用及机制。方法:在体外存在或不存在成骨诱导培养的条件下,用淫羊藿苷... 背景:传统中药淫羊藿应用于各类骨科疾病有着悠久的历史,其主要成分之一淫羊藿苷有多种生物学效应。目的:探讨淫羊藿苷在体内及体外对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用及机制。方法:在体外存在或不存在成骨诱导培养的条件下,用淫羊藿苷作用于骨髓间充质干细胞,通过RT-PCR检测runx2、ocn和osx基因的表达情况,以及通过茜素红染色检测成骨细胞分泌的钙结节数量。用淫羊藿苷喂养大鼠(2 mg/d)5周后,进行Micro CT扫描并分析胫骨上段骨结构。结果与结论:(1)无论是否存在成骨诱导培养条件,淫羊藿苷均能促进成骨分化相关基因的表达;(2)在成骨诱导培养时,淫羊藿苷能明显增加钙结节沉积;(3)动物实验表明淫羊藿苷能显著促进骨小梁的生成。 展开更多
关键词 淫羊藿属 骨髓 间质干细胞 骨钙素 核心结合因子α1亚基 组织工程 组织构建 骨细胞 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 成骨分化 runt相关转录因子2 成骨细胞特异性转录因子 国家自然科学基金
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Runx2基因高表达对脐血间充质干细胞成骨分化相关基因表达的影响 被引量：10
8
作者 周大凯 李慧宁 +1 位作者 马珊珊 程田 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第9期1444-1449,共6页
背景:Runx2在成骨分化的信号途径中起核心作用,在诱导干细胞成骨分化及促进骨愈合方面具有重要的研究意义。目的:观察Runx2基因高表达对脐血间充质干细胞成骨分化的影响。方法:(1)扩增Runx2基因,利用腺病毒载体构建Runx2重组腺病毒(pA d... 背景:Runx2在成骨分化的信号途径中起核心作用,在诱导干细胞成骨分化及促进骨愈合方面具有重要的研究意义。目的:观察Runx2基因高表达对脐血间充质干细胞成骨分化的影响。方法:(1)扩增Runx2基因,利用腺病毒载体构建Runx2重组腺病毒(pA d-Runx2),检测病毒滴度后用重组腺病毒感染脐血间充质干细胞,并于荧光显微镜下观察荧光表达变化;(2)感染后1,3,7,14 d采用实时荧光定量PCR及Western blot检测脐血间充质干细胞Runx2、BMP-2、OCN、ALP的mRNA和蛋白表达。结果与结论:(1)成功制备pA d-Runx2重组腺病毒,病毒滴度为1.7×10^(10)pfu/L;(2)Runx2重组腺病毒感染脐血间充质干细胞后细胞形态呈成骨样细胞改变,对照组细胞无明显变化;(3)感染组细胞Runx2、BMP-2、OCN、ALP mRNA和蛋白的表达量随感染时间的增加均有不同程度的上调;(4)结果表明,高表达Runx2基因腺病毒感染脐血间充质干细胞,能够上调BMP-2、OCN、ALP基因的表达,从而促进脐血间充质干细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 脐血干细胞移植 核心结合因子α1亚基 腺病毒科 组织工程 干细胞 脐带脐血干细胞 脐血间充质干细胞 腺病毒载体 Runx2基因 成骨分化 国家自然科学基金
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补肾活血汤水提物调控Cbfal/RUNX2基因沉默骨髓间充质干细胞SP7/Osterix及碱性磷酸酶的表达 被引量：13
9
作者 程英雄 罗毅文 +5 位作者 王斌 吴志方 沈玮 罗辉 孙世栋 黄文强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第13期1987-1992,共6页
背景:补肾活血汤可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化,探究分子机制利于推向临床。目的:探讨补肾活血汤水提物对Cbfal/RUNX2基因沉默的骨髓间充质干细胞Osterix、碱性磷酸酶表达的影响。方法:骨髓贴壁筛选法分离和培养大鼠骨髓间充质干细... 背景:补肾活血汤可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化,探究分子机制利于推向临床。目的:探讨补肾活血汤水提物对Cbfal/RUNX2基因沉默的骨髓间充质干细胞Osterix、碱性磷酸酶表达的影响。方法:骨髓贴壁筛选法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,Cbfal/RUNX2基因沉默慢病毒转染骨髓间充质干细胞。取第3代骨髓间充质干细胞(空白对照组)、慢病毒沉默骨髓间充质干细胞(沉默组)和阴性病毒载体预处理骨髓间充质干细胞(阴性对照组),以及上述3组骨髓间充质干细胞加入100 mg/L补肾活血汤水提物干预3 d后,检测RUNX2、Osterix蛋白和mRNA表达以及碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)Cbfal/RUNX2基因沉默慢病毒转染效率达约90%;(2)与空白对照组和阴性对照组比较,沉默组骨髓间充质干细胞RUNX2和Osterix的蛋白及mRNA表达均下降,碱性磷酸酶活性也明显下降,差异有显著性意义(P<0.01);(3)补肾活血汤水提物干预后,沉默组骨髓间充质干细胞RUNX2、Osterix的表达和碱性磷酸酶活性明显增加,差异有显著性意义(P<0.01);(4)结果表明,补肾活血汤水提物可以促进骨髓间充质干细胞的RUNX2、Osterix表达,亦增加了碱性磷酸酶活性,从而促进骨髓间充质干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 补肾活血汤 成骨 骨髓间充质干细胞 RUNX2 OSTERIX 基因沉默 碱性磷酸酶 干细胞
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镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠胸主动脉血管钙化中的作用及机制研究 被引量：6
10
作者 张俊霞 徐金升 +4 位作者 王双宇 白亚玲 张胜雷 崔立文 张慧然 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第36期4324-4328,共5页
目的探讨镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠模型血管钙化中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠采用随机数字表法均分为对照组(A组)、慢性肾衰竭血管钙化组(B1组)、低镁组(B2组)、高镁组(B3组)。用硫酸腺嘌呤加高磷饮食复制慢性肾衰竭... 目的探讨镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠模型血管钙化中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠采用随机数字表法均分为对照组(A组)、慢性肾衰竭血管钙化组(B1组)、低镁组(B2组)、高镁组(B3组)。用硫酸腺嘌呤加高磷饮食复制慢性肾衰竭大鼠血管钙化模型。造模成功后测量4组大鼠主动脉脉搏波速率(PWV),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动脉血管钙化标志分子核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA的表达情况,von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法测定钙水平。结果 B1组血肌酐、尿素氮、血磷水平高于A组(t=32.284、22.010、26.000,P<0.05)。4组血镁水平比较,差异有统计学意义(F=7.745,P<0.05);B3组血镁水平高于B2组(q=2.897,P<0.05)。4组主动脉钙水平比较,差异有统计学意义(F=6.824,P<0.05);B2组主动脉钙水平高于B1组(q=13.192,P<0.05);B1组主动脉钙水平高于A组(q=21.925,P<0.05);B3组主动脉钙水平低于B1组和B2组(q=9.333、21.782,P<0.05)。4组胸主动脉PWV值比较,差异有统计学意义(F=6.454,P<0.05);B2组PWV值高于B1组(q=13.492,P<0.05);B1组PWV值高于A组(q=14.311,P<0.05);B3组PWV值低于B1组和B2组(q=5.333、16.865,P<0.05)。4组胸主动脉Cbfα1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=3.212,P<0.05);B1和B2组Cbfα1 mRNA表达量高于A组(q=7.333、13.565,P<0.05);B3组Cbfα1mRNA表达量低于B1组和B2组(q=10.198、13.858,P<0.05);B2组Cbfα1 mRNA表达量高于B1组(q=12.279,P<0.05)。结论镁离子能够抑制高磷诱导的慢性肾衰竭大鼠血管钙化,改善血管弹性功能;其可能机制之一是镁离子通过抑制高磷诱导血管平滑肌细胞表型转化实现。 展开更多
关键词 肾功能衰竭 慢性 动脉硬化 脉搏波速率 镁 核心结合因子α1亚基 大鼠 主动脉 胸
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尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化中Cbfα1/Runx2表达的影响 被引量：17
11
作者 张山山 杨乃龙 +2 位作者 徐丽丽 李百举 崔晶 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期363-366,344,共5页
目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 ... 目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 mmol/l、0.4 mmol/l、0.8mmol/l)的成骨诱导组,通过倒置显微镜观察细胞形态,碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定细胞。在干预诱导第7天和第14天行RT-PCR检测Cbfα1/Runx2的表达。结果碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果均阳性,表示诱导后细胞为成骨细胞。RT-PCR结果表明,对照组各时间点均无Cbfα1/Runx2表达,尿酸培养组随尿酸浓度增加和时间的延长,Cbfα1/Runx2表达逐渐增强,呈现时间依赖性和浓度依赖性。结论尿酸可能通过促进Cbfα1/Runx2的表达,从而促进hBMSCs向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 尿酸 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Cbfcfal RUNX2
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镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响 被引量：6
12
作者 白亚玲 徐金升 +4 位作者 冯伟勋 张俊霞 崔立文 张慧然 张胜雷 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第5期443-446,共4页
目的：探讨不同浓度镁离子对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响。方法原代培养获取VSMCs，进行形态学及免疫细胞鉴定，后将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、镁干预组。阴性对照组采用含10%胎牛血清培养，高磷组采用高磷培养基培... 目的：探讨不同浓度镁离子对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响。方法原代培养获取VSMCs，进行形态学及免疫细胞鉴定，后将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、镁干预组。阴性对照组采用含10%胎牛血清培养，高磷组采用高磷培养基培养，镁干预组在高磷培养基的基础上分别加入不同浓度氯化镁，使镁离子终浓度分别为1、2、3 mmol/L（镁干预组1~3），刺激7 d后行钙化检测，测定钙含量及碱性磷酸酶（ALP）活性，并行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内核心结合因子α1（Cbfα1）mRNA的表达。结果高磷组和镁干预组VSMCs均有钙盐沉积，其钙含量均高于阴性对照组；镁干预组随镁离子浓度增大钙化结节逐渐缩小，除镁干预组1钙含量与高磷组差异无统计学意义外，镁干预组2和镁干预组3均低于高磷组（均P＜0.05）。VSMCs ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达除镁干预组3与阴性对照组差异无统计学意义外，其余组均高于阴性对照组（P＜0.05）。镁干预组随镁离子浓度增大，ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达水平均逐渐降低，且均低于高磷组（P＜0.05）。结论镁离子可在一定程度上抑制高磷诱导的VSMCs钙化和成骨样转分化，其可能是通过降低VSMCs中Cbfα1的表达来实现的。 展开更多
关键词 β-甘油磷酸盐 血管平滑肌肌细胞 镁 钙化 钙含量 碱性磷酸酶 核心结合因子α1亚基
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人脱落乳牙干细胞骨向分化相关分子Runx2的动态表达 被引量：6
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作者 王立媛 刘大勇 贾智 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第15期2345-2350,共6页
背景:Runx2被认为是成骨基因表达的主要调节因子,是一种向成骨细胞分化的不可或缺的转移因子,在成骨细胞发育、分化、调控、骨钙化形成及骨修复过程中起着极其重要的作用。目的:观察人脱落乳牙干细胞生物学特征,探讨乳牙干细胞骨向分化... 背景:Runx2被认为是成骨基因表达的主要调节因子,是一种向成骨细胞分化的不可或缺的转移因子,在成骨细胞发育、分化、调控、骨钙化形成及骨修复过程中起着极其重要的作用。目的:观察人脱落乳牙干细胞生物学特征,探讨乳牙干细胞骨向分化潜能,以及不同时间点成骨相关转录因子Runx2的动态表达规律。方法:体外分离、培养人脱落乳牙干细胞。流式细胞仪检测乳牙干细胞表面标志。体外脂向诱导分化4周后进行油红O染色,检测脂滴形成情况;矿化诱导21 d进行茜素红染色,检测矿化结节形成情况。于成骨诱导的不同时间点,用RT-PCR技术检测Runx2的动态表达。结果与结论:通过酶消化法和有限稀释法获得了乳牙干细胞,流式细胞仪检测显示CD146和STRO-1均有不同程度的表达。成脂诱导油红O染色可见橙红色阳性颗粒。矿化诱导茜素红染色呈阳性。RT-PCR技术检测Runx2在成骨诱导第0天已有表达,0-6 d成明显增强趋势,6-12 d显著下降,12-18 d表达再次上升,以后相对平稳。结果表明乳牙干细胞可体外分离、培养,表达间充质干细胞表面标志,具有成脂和成骨向分化能力。Runx2在乳牙干细胞成骨分化各阶段均有表达,早期和晚期表达上升,中期表达有下降趋势。 展开更多
关键词 组织构建 骨组织工程 人脱落乳牙干细胞 RUNX2 骨向分化 动态表达
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核心结合因子α1基因修饰骨髓间充质干细胞对骨缺损的修复研究 被引量：10
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作者 董世武 应大君 +2 位作者 朱楚洪 张伟 刘光久 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期555-559,共5页
目的探讨以核心结合因子α1(core-bindingfactorα1,Cbfa1)基因修饰骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)作为种子细胞,与猪脱细胞骨基质材料复合构建组织工程骨修复兔桡骨缺损的可行性。方法选择3月龄日本大白兔40只,建... 目的探讨以核心结合因子α1(core-bindingfactorα1,Cbfa1)基因修饰骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)作为种子细胞,与猪脱细胞骨基质材料复合构建组织工程骨修复兔桡骨缺损的可行性。方法选择3月龄日本大白兔40只,建立桡骨1.2cm缺损模型,根据不同的修复方式分成4组。A组:Cbfa1基因修饰MSCs与脱细胞骨基质材料复合后修复;B组:未行基因修饰的MSCs与脱细胞骨基质材料复合后修复;C组:单纯脱细胞骨基质支架材料修复;D组:空白对照,不作任何植骨处理。术后4、8和12周分别行大体、X线片和组织学观察评价修复效果,并对修复后桡骨进行生物力学检测。结果大体观察至术后12周取材时,A组原骨缺损植骨区新生骨成熟度好、饱满、质硬;B组植骨区有骨性连接,质软;C组可在植骨区发现少量骨性连接;D组形成骨不连。X线片和组织学观察示:术后4、8周A组支架材料降解、新骨生成及髓腔再建优于其它3组。术后12周A组支架材料完全降解,新骨塑形完成,骨髓腔通畅,皮质骨改建成正常的板层骨结构;B组缺损区近端部分骨髓腔塑形再通;C组截骨两端骨痂向植骨中长入,髓腔塑形不明显;D组纤维组织充填,形成骨不连。以前述各组健侧桡骨为正常对照组(仍为D组),余分组同前,行破坏压缩载荷检测,结果示12周后A、B组与D组比较差异无统计学意义(P>0.05),而C组与D组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Cbfa1基因修饰MSCs与脱细胞骨基质材料复合构筑的组织工程骨可较好地修复兔桡骨缺损。 展开更多
关键词 组织工程骨 核心结合因子α1基因 转染 修复 兔
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川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究 被引量：84
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作者 武密山 赵素芝 +4 位作者 任立中 王茹 白霞 韩红伟 李彬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期222-226,共5页
目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向... 目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。 展开更多
关键词 川续断皂苷Ⅵ 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 细胞增殖 细胞分化 碱性磷酸酶 核心结合因子α-1
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针刺对慢性脑缺血大鼠Aβ蛋白影响的研究 被引量：3
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作者 刘丹 朱永志 +2 位作者 韩威 罗正凯 王馨 《中国临床保健杂志》 CAS 2011年第1期68-69,共2页
目的观察针刺对脑组织内Aβ蛋白表达的变化,探讨针刺治疗慢性脑缺血的作用机制。方法采用大鼠分次永久性双侧颈总动脉阻塞(2VO)法制备慢性脑缺血大鼠模型并观察不同组别大鼠脑组织病理形态学的变化及脑组织内Aβ蛋白水平的变化。结果模... 目的观察针刺对脑组织内Aβ蛋白表达的变化,探讨针刺治疗慢性脑缺血的作用机制。方法采用大鼠分次永久性双侧颈总动脉阻塞(2VO)法制备慢性脑缺血大鼠模型并观察不同组别大鼠脑组织病理形态学的变化及脑组织内Aβ蛋白水平的变化。结果模型组大鼠神经元变性严重,而立即针刺组及针刺治疗组较之模型组神经元变性均明显减轻。模型组大鼠较正常组大鼠脑组织内Aβ蛋白显著升高。立即针刺组及针刺治疗组脑组织内Aβ蛋白显著下降。结论针刺能减轻神经元的变性受损,降低其脑组织内Aβ水平,减少Aβ的神经毒作用。这可能是针刺改善慢性脑缺血作用机制之一。 展开更多
关键词 脑缺血 针刺 穴位 转录因子 大鼠 wistar
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成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒的构建、纯化及表达 被引量：11
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作者 郭国宁 周跃 张正丰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期150-154,共5页
目的　构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究。方法　以含有全长cDNA的pCMVβCbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack -CMV上,在BJ5 183细菌内和pAdEasy 1... 目的　构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究。方法　以含有全长cDNA的pCMVβCbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack -CMV上,在BJ5 183细菌内和pAdEasy 1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染2 93T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,CsCl梯度离心纯化病毒。AdEasy1 Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western blotting检测Cbfa1蛋白的表达。结果　测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功。AdEasy1 Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western blotting检测到Cbfa1蛋白的表达。结论　成功构建了含有小鼠Cbfa1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究基因治疗骨缺损、脊柱融合奠定基础。 展开更多
关键词 核心结合因子 腺病毒 基因治疗
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核心结合因子a1在小鼠牙齿发育过程中的表达 被引量：9
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作者 余擎 肖明振 +2 位作者 朱庆林 郭婷 李峰 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2003年第9期517-519,T001,共4页
目的 :观察Cbfa1蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法 :用自制的Cbfa1多克隆抗体 ,采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果 :Cbfa1蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛 ,在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本... 目的 :观察Cbfa1蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法 :用自制的Cbfa1多克隆抗体 ,采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果 :Cbfa1蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛 ,在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞 ,而在钟状晚期 ,Cbfa1在牙乳头表达为阴性 ,成牙本质细胞层弱阳性 ,成釉细胞为阳性或强阳性。结论 :Cbfa1可能在小鼠牙胚发育 ,尤其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 核心结合因子al 免疫组化 牙齿发育
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氟对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1表达的影响 被引量：15
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作者 井玲 剂玲 +1 位作者 李彤 李广生 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期629-632,共4页
目的观察不同剂量氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1(cbfa1)表达的影响。方法采用细胞培养的方法,将细胞分为对照组和6个染氟组(0．1、1．0、100．0、1000．0、10 000．0、20 000．0μg／L),分别在5个染氟时间... 目的观察不同剂量氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1(cbfa1)表达的影响。方法采用细胞培养的方法,将细胞分为对照组和6个染氟组(0．1、1．0、100．0、1000．0、10 000．0、20 000．0μg／L),分别在5个染氟时间段(2、4、24、48、72 h)收集培养细胞培养上清液和细胞,应用酶联免疫吸附(ELISA)法和免疫组化方法检测cbfa1蛋白含量和表达,应用RT-PCR方法检测染氟48 h cbfa1 mRNA的表达。结果①与对照组比较(2．13±0．07),成纤维细胞染氟48 h时,cbfa1蛋白含量在0．1、1．0、100．0、1 000．0、20 000．0μg／L组[(2.35±0．08)、(2．28±0．09)、(2．32±0．09)、(2．25±0．08)、(2．28±0．09)]及染氟72 h的10 000．0μg／L组(2．48±0．22)明显升高;染氟48 h,cbfa1 mRNA表达呈升高趋势,其中10 000．0μg／L组(1．29±0．30)与对照组(1．02±0．12)比较,明显增强;免疫组化结果显示,染氟48 h的0．1μg／L组成纤维细胞内可见明显cbfa1阳性表达。②在成骨细胞,染氟组cbfa1蛋白含量较对照组有不同程度增加;染氟48 h时,0．1、1．0、100．0、1 000．0μg／L组cbfa1 mRNA表达较对照组(1．27±0．20)升高,其中0．1μgL组(1．34±0．19)明显升高。结论氟能提高成纤维细胞和成骨细胞cbfa1蛋白含量,促进cbfa1和cbfa1 mRNA表达,成纤维细胞可能在氟骨症骨周化骨的发生中起重要作用。 展开更多
关键词 氟化物 成纤维细胞 成骨细胞 核心结合因子Α1 细胞培养
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核心结合因子α1促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究 被引量：19
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作者 李华壮 周跃 郭国宁 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期121-124,共4页
目的观察核心结合因子α1(corebinding factorα1,Cbfα1)对兔骨髓间充质干细胞(marrowmesench ymalstemcells,MSCs)的促成骨效应。方法体外分离培养日本大白兔MSCs,按培养方法的不同分为3组。对照组:常规培养;单纯诱导组:以条件培养液... 目的观察核心结合因子α1(corebinding factorα1,Cbfα1)对兔骨髓间充质干细胞(marrowmesench ymalstemcells,MSCs)的促成骨效应。方法体外分离培养日本大白兔MSCs,按培养方法的不同分为3组。对照组:常规培养;单纯诱导组:以条件培养液(低糖DMEM+10%胎牛血清+10mmol/L地塞米松+50mg/L维生素C+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)培养;实验组:以AdEasy1/Cbfα1转染MSCs,加入条件培养液培养。在诱导3d,1、2、3和4周时,行组织学观察和免疫组织化学等方法检测成骨标志碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)和骨钙素的表达。结果体外培养兔MSCs生长良好,实验组AdEasy1/Cbfα1转染后90%以上MSCs表达绿色荧光蛋白。实验组及单纯诱导组ALP染色呈棕黑色阳性,随培养时间延长逐渐加深,对照组仅少量散在细胞ALP呈弱阳性;第1、2、3和4周实验组ALP浓度与单纯诱导组及对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组及单纯诱导组从2周开始有红色的阳性染色矿化结节出现,对照组为阴性,结节数目随时间推移而增多。实验组及单纯诱导组1周时有少量骨钙素染色阳性,2、3及4周时大量出现,对照组为阴性。结论应用Cbfα1可促进兔MSCs向成骨细胞分化,其分子机制仍需进一步深入研究。 展开更多
关键词 核心结合因子Α1 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 分化 兔
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