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超螺旋质粒pVAX1-SGS的构建及其宿主细胞的筛选
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作者 江学文 成雪鸿 马苗鹏 《生物技术》 2025年第5期542-547,616,共7页
[目的]将Mu噬菌体强促旋酶结合位点(bacteriophage Mu strong gyrase site,Mu SGS)序列插入pVAX1质粒以稳定质粒超螺旋构型,并从中筛选质粒生产的最适大肠杆菌宿主细胞以及培养基。[方法]合成并克隆Mu SGS序列,通过无缝克隆技术将其插入... [目的]将Mu噬菌体强促旋酶结合位点(bacteriophage Mu strong gyrase site,Mu SGS)序列插入pVAX1质粒以稳定质粒超螺旋构型,并从中筛选质粒生产的最适大肠杆菌宿主细胞以及培养基。[方法]合成并克隆Mu SGS序列,通过无缝克隆技术将其插入pVAX1质粒构建超螺旋质粒pVAX1-SGS,将其转化4种大肠杆菌感受态细胞并提取质粒,测量质粒浓度和检测质粒形态结构。选取质粒产率最高的宿主细胞作为生产菌株,比较在3种培养基和3个卡那霉素浓度下的质粒产率。[结果]成功构建超螺旋质粒pVAX1-SGS,质粒pVAX1、pVAX1-SGS均在大肠杆菌MC1061中产率最高,其提取的质粒浓度近250μg/mL,远高于大肠杆菌Mach T1,且其质粒超螺旋构型稳定,LB-A培养基的质粒浓度高达80μg/mL,是LB、LB-B培养基的近2倍,在15μg/mL、30μg/mL、60μg/mL卡那霉素浓度下的质粒产率基本相近。[结论]Mu SGS序列能稳定质粒构型,增加超螺旋质粒的密度,超螺旋质粒pVAX1-SGS的最佳宿主菌为大肠杆菌MC1061,确定LB-A培养基为质粒生产的最适基础培养基,为以后进一步优化打下良好基础。 展开更多
关键词 DNA疫苗 PVAX1 超螺旋质粒 强促旋酶结合位点 无缝克隆 宿主细胞 MC1061 生长培养基
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黄鳝ADAR家族的克隆与表达分析
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作者 陈铭强 黄俊杰 +9 位作者 丁文祥 罗文杰 刘飞 田琴瑶 刘小英 陈晓晶 唐子婷 严太明 杨德英 何智 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1305-1314,1378,共11页
【目的】为探究ADAR家族在黄鳝性腺发育中的功能。【方法】对克隆的黄鳝ADAR家族3个基因序列进行特征分析,并检测黄鳝不同组织、性逆转周期性腺以及hCG孵育卵巢后ADAR家族的表达情况。【结果】与脊椎动物ADAR家族类似,黄鳝ADAR、ADARB1... 【目的】为探究ADAR家族在黄鳝性腺发育中的功能。【方法】对克隆的黄鳝ADAR家族3个基因序列进行特征分析,并检测黄鳝不同组织、性逆转周期性腺以及hCG孵育卵巢后ADAR家族的表达情况。【结果】与脊椎动物ADAR家族类似,黄鳝ADAR、ADARB1和ADARB2结构由dsRNA结合结构域(dsRBD)和腺苷脱氨酶结构域组成。ADAR和ADARB1在组织中广泛表达,在脾脏中高表达;而ADARB2在黄鳝组织中分布局限且表达量较低,在垂体中表达量相对较高。ADAR和ADARB1在黄鳝精巢发育早期表达量上升,在精巢发育后期表达量下降。体外孵育的结果表明,高浓度(100 ng/mL)hCG处理会抑制卵巢中ADAR表达,而低浓度(10 ng/mL)促进ADARB1表达。【结论】ADAR和ADARB1可能参与黄鳝精巢早期发育,这为研究黄鳝性腺性逆转机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 ADAR家族 A to I编辑位点 克隆 黄鳝
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猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救 被引量:1
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作者 刘元杰 徐璐 +9 位作者 朱元源 徐嫄 张乾义 李翠 李明 夏应菊 王琴 刘业兵 赵启祖 邹兴启 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期698-705,共8页
本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细... 本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖。结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功。经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救。病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代。综上,本研究成功构建了C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 C株 WH303位点 突变 感染性克隆
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一种筛选水稻Mutmap+突变位点的简易方法 被引量:1
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作者 王延妍 李颖颖 +4 位作者 王子瑞 毛馨晨 唐家琪 于恒秀 张超 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2024年第1期27-32,共6页
利用基因组重测序技术进行基因定位目前已在水稻功能基因组学研究中得到广泛应用。其中,Mutmap+技术因无需进行杂交操作,且无需背景亲本的基因组信息,具有更广阔的应用前景。然而,目前Mutmap+技术筛选候选突变位点的方法依赖于复杂的数... 利用基因组重测序技术进行基因定位目前已在水稻功能基因组学研究中得到广泛应用。其中,Mutmap+技术因无需进行杂交操作,且无需背景亲本的基因组信息,具有更广阔的应用前景。然而,目前Mutmap+技术筛选候选突变位点的方法依赖于复杂的数据计算,要求研究者具有较高的生物信息学知识。根据Mutmap+的实验原理,设计一种简单的筛选候选突变位点的方法。该方法对混池测序的表型池与非表型池的突变指数分别加以限定,即表型池突变指数等于1,非表型池突变指数小于0.5。对测序所得突变位点进行简单排序,即可得到候选突变位点。运用该筛选方法,从6个水稻不育突变体成功克隆突变基因,并对其中1个突变体进行了细胞学表型的验证。该方法可简化Mutmap+技术的数据分析流程,便于将Mutmap+技术更好地运用到水稻功能基因组学研究中。 展开更多
关键词 水稻 Mutmap+ 突变位点筛选 基因克隆
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南方地区杨树胶合板材定向培育技术的研究 被引量:26
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作者 方升佐 吕士行 +2 位作者 徐锡增 唐罗忠 曹福亮 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第6期120-124,共5页
Based on the results of more than ten year’s scientific research and practice, some key techniques for cultivating poplar veneer glued wood were summarized systematically. The results were as follows: (1)Selecting ap... Based on the results of more than ten year’s scientific research and practice, some key techniques for cultivating poplar veneer glued wood were summarized systematically. The results were as follows: (1)Selecting appropriate poplar clones for various cultivation zones according to their growth rate and wood quality. (2)Choosing good sites being suitable for poplar clone growing (at least SI≥18?m). (3)Adopting reasonable planting density which can produce more timbers to meet the need of plywood(the tree spacing should be more than 5?m×5?m). (4)Using correct planting methods for different soil conditions, however, large seedling with 2 year old root and 1 year old stem (seedling height>4?m)were advocated. (5)Taking effective measures to tend the stand, the most effective measure was interplanting with crops. (6)Pruning was neccessary to produce non node timber, but pruning method, pruning intensity and pruning season should be controlled properly. If the 6 measures mentioned above were carried out, the poplar forests with a high yield and high quality could be ensured. In order to provied some theoretical basis for cultivating poplar veneer glued wood, 4 optimum cultivation patterns were also established using the method of two dimensions system. 展开更多
关键词 胶合板材 杨树 立地控制 密度控制 定向培育
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新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建 被引量:7
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作者 沈毅珺 潘卫 +7 位作者 易进华 徐容 陈秋莉 潘欣 冯春芝 邓松华 戚中田 刘彦君 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期298-302,共5页
目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。 展开更多
关键词 噬菌体展示 噬菌粒载体 多克隆位点 多肽接头
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pET3c衍生载体的构建及应用研究 被引量:4
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作者 熊盛 林剑 +4 位作者 洪岸 刘杰森 张玲 李志英 姚汝华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第1期4-7,共4页
对原核表达载体 pET3c进行改建 ,消去载体上非必需的EcoRⅠ、HindⅢ限制酶位点 ,然后在克隆位点BamHⅠ处引入LacZ片段 ,经此二步改建后的载体命名为 pJN982。该载体保留了 pET3c高效表达外源基因的能力 ,同时 ,其融合克隆位点由 1个增... 对原核表达载体 pET3c进行改建 ,消去载体上非必需的EcoRⅠ、HindⅢ限制酶位点 ,然后在克隆位点BamHⅠ处引入LacZ片段 ,经此二步改建后的载体命名为 pJN982。该载体保留了 pET3c高效表达外源基因的能力 ,同时 ,其融合克隆位点由 1个增至 7个 ,并获得以目视法筛选重组子的能力。应用该载体在E coliBL2 1(DE3)pLysS中融合表达牛碱性成纤维细胞生长因子 ,表达量占菌体总蛋白 30 0 4%。破碎菌体上清经阳离子交换和肝素亲和两步层析 ,得纯度为 95 %的重组蛋白 ,活性检测显示 ,重组蛋白具有与参照品一致的促有丝分裂活性。 展开更多
关键词 pET载体 多克隆位点 目视法筛选 牛碱性成纤维细胞生长因子 pET3C BBFGF
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小反刍兽疫病毒非结构蛋白V基因的克隆及其编码蛋白的结构与功能 被引量:4
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作者 张海瑞 翟军军 +3 位作者 窦永喜 石晓妮 蒙学莲 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期235-239,共5页
采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同... 采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同时使用I-TASSER服务器对小反刍兽疫病毒V蛋白三级结构进行同源建模,分析其结构与功能。结果显示,小反刍兽疫病毒V蛋白氨基酸序列与麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒和海豹瘟病毒V蛋白的相似性分别为61.1%、56.0%、61.7%和51.7%,三级结构预测显示V蛋白由多α-螺旋的N-端结构域、中间结构域和含锌指结构的C-端结构域组成。本研究成功克隆了小反刍兽疫病毒V基因,预测分析了V蛋白结构和功能的关系,为其分子生物学和功能的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 V蛋白 克隆 定点突变
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通路克隆系统:DNA重组技术的新进展 被引量:12
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作者 汪宗桂 郑文岭 马文丽 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第7期24-27,共4页
近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述... 近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述了该系统的作用原理、特点及其应用。 展开更多
关键词 通路克隆系统 DNA重组技术 载体 定向克隆 亚克隆
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一种改造载体多克隆位点的新方法 被引量:4
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作者 李磊 薛芗 +7 位作者 左示敏 陈宗祥 张亚芳 李前前 潘存红 朱俊凯 马玉银 潘学彪 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期40-43,共4页
目的:探寻一种快速的、便捷的改造已知载体多克隆位点的方法。方法:应用一对5’末端分别添加了多个酶切位点的引物扩增任一已知DNA片段,用两端的限制性酶酶切后连接至载体多克隆位点中,从而引入两个新的酶切位点。我们将这一方法称为衔... 目的:探寻一种快速的、便捷的改造已知载体多克隆位点的方法。方法:应用一对5’末端分别添加了多个酶切位点的引物扩增任一已知DNA片段,用两端的限制性酶酶切后连接至载体多克隆位点中,从而引入两个新的酶切位点。我们将这一方法称为衔接子引物-PCR引入法。结果:两个研究实例的酶切结果证实:结果预先设计的酶切位点已替换至载体的多克隆位点,且引入的酶切位点能被顺利切割。结论:衔接子引物-PCR引入法是一种改造已知载体多克隆位点的可行方法。 展开更多
关键词 多克隆位点 改造 衔接子引物
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抗性稗草1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因的克隆与表达分析 被引量:3
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作者 董明超 杨霞 +2 位作者 张自常 李永丰 管荣展 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第20期4077-4085,共9页
【目的】克隆稗草(Echinochloa crus-galli)乙烯生物合成途径关键酶1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(Ec ACO),对其进行表达分析和酶活性测定,以探究稗草抗二氯喹啉酸的机理。【方法】根据转录组测序所得Ec ACO部分序列设计引物,分别从二... 【目的】克隆稗草(Echinochloa crus-galli)乙烯生物合成途径关键酶1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(Ec ACO),对其进行表达分析和酶活性测定,以探究稗草抗二氯喹啉酸的机理。【方法】根据转录组测序所得Ec ACO部分序列设计引物,分别从二氯喹啉酸的抗性和敏感型稗草中克隆Ec ACO的全长序列,用DNAman以及Gene DOC等软件进行序列分析。用q RT-PCR方法分析抗性和敏感性稗草间的Ec ACO表达水平差异。最后分别将抗性和敏感性稗草Ec ACO的开放阅读框(ORF)序列连接至原核表达载体p MAL-c5x中,并转化至大肠杆菌菌株BL21,经终浓度为0.4 mmol·L-1的IPTG于18℃诱导16 h后,检测Ec ACO蛋白的表达情况。采用MBP吸附柱分离纯化Ec ACO蛋白后,通过测定乙烯释放量,测定抗性和敏感稗草Ec ACO蛋白间的活性差异。【结果】克隆得到抗性稗草和敏感稗草Ec ACO,其编码区序列长度为936 bp,预测蛋白含311个氨基酸残基,蛋白分子量大小和理论等电点分别为35 k D和5.4。序列比对表明,抗性稗草Ec ACO氨基酸序列与粟(Setaria italica)、玉米(Zea mays)、高粱(Sorghum bicolor)同源性分别为93%、92%和91%;与敏感性稗草Ec ACO相比,抗性稗草Ec ACO的氨基酸序列存在5个突变位点,其中有3个突变位点位于保守功能域上。q PCR分析显示,Ec ACO在抗性和敏感性稗草中并无明显的表达水平差异。原核蛋白表达和酶活性测定结果表明,敏感型稗草MBP::Ec ACO融合蛋白单位时间内产生的乙烯释放量是抗性稗草MBP::Ec ACO融合蛋白的2.15倍,因而该基因可能解释了稗草的抗药性机理。【结论】从抗二氯喹啉酸的稗草中克隆了Ec ACO,发现了与抗性相关的5个氨基酸突变位点,其中的3个位点突变位于保守结构域,这可能是引起乙烯释放速率降低以及稗草产生二氯喹啉酸抗性的原因。 展开更多
关键词 稗草 1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶 基因克隆 点突变 表达
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重组鱼腥藻脂肪氧合酶基因的克隆表达、分离纯化及活性分析 被引量:10
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作者 张充 周孝伟 +4 位作者 吕凤霞 别小妹 陶婷婷 应琦 陆兆新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期440-456,共17页
克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因,对该功能基因进行了定点突变研究,确定了ana-LOX的最短功能基因长度,构建原核重组表达载体,对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LO... 克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因,对该功能基因进行了定点突变研究,确定了ana-LOX的最短功能基因长度,构建原核重组表达载体,对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LOX基因,通过序列分析和比对,发现LOX功能基因位于双功能酶AOS(单加氧酶)-LOX的C端,通过定点突变研究,证实了ana-LOX活性中心位点为His197、His202、His369、Asn373和Ile455。通过逐步缩短基因长度的策略,获得ana-LOX基因的最短功能基因长度为1 254 bp。构建的表达载体pET-32a/ana-LOX转化入BL21(DE3)宿主内,在低温16℃条件下的诱导表达,重组脂肪氧合酶活力可达6 750 U/mL。表达产物通过Ni-NTA亲和柱进行分离纯化,比活达到11.4×104U/mg蛋白,酶活回收率为60.89%。重组ana-LOX最适反应温度45℃,最适反应pH 6.0,在常温下具有较好的稳定性,金属离子Fe2+、Mg2+、Ca2+对该酶存在明显的激活作用,而Fe3+和Cu2+对该酶有强烈的抑制作用。重组ana-LOX能够改善面团的显微结构。该研究获得了高效表达重组ana-LOX,为实现其在食品加工中的应用提供了参考。 展开更多
关键词 重组脂肪氧合酶 克隆表达 定点突变 分离纯化 活性分析
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湘北平原区杨树优良无性系选育及立地适应性评价 被引量:4
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作者 唐洁 李永进 +7 位作者 黎蕾 杨艳 汤玉喜 田野 丁昌俊 黄秦军 陈建军 贺光宗 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期9-14,43,共7页
针对湘北平原区杨树育种群体及品种资源单一、遗传基础变窄以及适应性减退等问题,定向选育品种与立地相适应的杨树优良无性系,提高杨树遗传改良水平,充分发挥优良无性系增产及土地利用潜力。选择30个杨树无性系在岳阳君山区、益阳沅江市... 针对湘北平原区杨树育种群体及品种资源单一、遗传基础变窄以及适应性减退等问题,定向选育品种与立地相适应的杨树优良无性系,提高杨树遗传改良水平,充分发挥优良无性系增产及土地利用潜力。选择30个杨树无性系在岳阳君山区、益阳沅江市等3个不同立地条件类型进行区域试验,应用多点联合方差分析、AMMI模型和GGE双标图等分析方法,对5~9年生杨树试验林平均胸径、树高、材积、材性等指标以及立地适应性进行综合评价。各参试杨树指标性状无性系间存在极显著差异,胸径、材积性状无性系×地点交互效应显著,树高差异不显著;以综合指标平均材积进行分析,基因型主效应(G)、环境主效应(E)以及基因与环境互作效应(I GE)其平方各占总变异平方和的比例分别为29.5%、59.8%和10.7%;与当前主栽良种比较生长量较高的无性系依次是LA09-N56、LA06-N30、TN02-92、TN02-13、TN01-88、TN01-49、TN01-90、TN01-38和TN01-30。7个杨树无性系木材基本密度、纤维长度、纤维宽度和纤维长宽比范围分别在0.3331~0.3817 g/cm^(3)、1273.09~1366.85μm、19.65~28.19μm和46.05~69.76,均符合纤维材和大径级胶合板材质量要求,其中LA09-N56、LA06-N30两个新无性系不仅速生性能与对照比有大幅提高,且木材基本密度没有下降。综合生长性状的适应性和稳定性考虑,筛选的优良无性系可分为两类,一类是LA06-N30、TN01-90、TN01-38为广泛生境型,在湖洲滩地、江河岸线和内垸林地等不同立地条件下造林均能较充分地发挥自身遗传潜力;另一类是LA09-N56、TN02-92、TN02-13、TN01-88、TN01-49为优良生境型,可选择内垸立地条件较好的地类栽植。 展开更多
关键词 杨树 无性系 生长 木材 立地条件
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枯草杆菌manA基因的克隆及定点突变 被引量:3
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作者 毛绍名 章怀云 张学文 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期528-532,共5页
manA是编码β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC3.2.1.78)的基因。将枯草杆菌A33株的manA基因插入到pET-32a载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了异源非融合表达,表达活力为41.58U/mL。为了提高酶的表达活力,当采用PCR介导的... manA是编码β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC3.2.1.78)的基因。将枯草杆菌A33株的manA基因插入到pET-32a载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了异源非融合表达,表达活力为41.58U/mL。为了提高酶的表达活力,当采用PCR介导的定点突变技术将该基因第2号密码子CUU突变为GUU,构建成突变表达载体pET-32a-manA*并转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,目标酶表达活力增加到138.65U/mL。说明当β-甘露聚糖酶N端第二号氨基酸由亮氨酸突变为缬氨酸后,酶在大肠杆菌中的表达活力大大提高。推测是由于突变后的β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中的稳定性增强所致。突变表达的β-甘露聚糖酶最适作用温度和pH值并没有发生明显改变。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 基因克隆 定点突变
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转基因动物整合位点的研究进展 被引量:19
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作者 吴波 朱作言 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期77-80,共4页
转基因动物整合位点克隆及相关序列特征研究是探索外源基因整合机制和整合稳定性的重要手段。转基因整合位点序列的克隆方法主要有:个体基因组文库筛选法、反向PCR法、热不对称交互式PCR法和质粒回收法。4种方法各有优缺点,可根据不同... 转基因动物整合位点克隆及相关序列特征研究是探索外源基因整合机制和整合稳定性的重要手段。转基因整合位点序列的克隆方法主要有:个体基因组文库筛选法、反向PCR法、热不对称交互式PCR法和质粒回收法。4种方法各有优缺点,可根据不同条件选用。克隆到的整合位点序列表明,整合位点可能存在一定的共同特征。 展开更多
关键词 转基因动物 整合位点 研究进展 克隆方法
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尾叶桉无性系多点遗传分析及优良无性系选择 被引量:9
16
作者 李光友 徐建民 +3 位作者 RISTO Vuokko 蒋虎 唐正涛 陆钊华 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期84-88,共5页
对广西3地点20个以尾叶桉为主要亲本的桉树无性系进行6、12、18个月生的性状分析与遗传测定。结果表明,生长性状在无性系、地点和无性系×地点交互效应上均存在极显著差异,试验可选择出生长优良的无性系;不同地点生长量表现为:山口&... 对广西3地点20个以尾叶桉为主要亲本的桉树无性系进行6、12、18个月生的性状分析与遗传测定。结果表明,生长性状在无性系、地点和无性系×地点交互效应上均存在极显著差异,试验可选择出生长优良的无性系;不同地点生长量表现为:山口>天堂>犀牛脚;18个月生时性状综合分析和评定表明,12、17、18号无性系适应性广,具速生丰产性,可试行推广利用,而2、3、5、6号无性系丰产性和稳定性差,缺少利用价值。 展开更多
关键词 尾叶桉无性系 生长分析 无性系×地点互作 早期选择
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猪传染性胃肠炎华毒弱毒株纤突蛋白B、C抗原位点片段基因的克隆与序列分析 被引量:9
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作者 冯力 佟有恩 +5 位作者 李伟杰 朱远茂 马思奇 王明 陈洪岩 陈奖励 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第5期361-365,共5页
猪传染性胃肠炎华毒 (TGEVH)是我国分离的代表毒株 ,H弱毒株是我国自行培育成功的具有良好免疫原性的疫苗株。应用RT_PCR方法扩增出 1.3kb的目的片段 ,包括S基因的编码的B、C两个主要抗原位点的片段 ,目的片段与pUC19质粒载体进行连接 ... 猪传染性胃肠炎华毒 (TGEVH)是我国分离的代表毒株 ,H弱毒株是我国自行培育成功的具有良好免疫原性的疫苗株。应用RT_PCR方法扩增出 1.3kb的目的片段 ,包括S基因的编码的B、C两个主要抗原位点的片段 ,目的片段与pUC19质粒载体进行连接 ,转化 ,鉴定后得到阳性重组质粒 ,命名为pTS1,将重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较 ,其结果表明TGEVH株S基因 5′端B、C位点片段 1190bp的核苷酸序列与国外的TGEV毒株Miller、Purdue_115、FS772 / 70及台湾省TFI毒株序列均具有很高的同源性 ,达 94.72 %以上。推导的氨基酸序列同源性为 94.70 %以上。编码抗原位点C的序列与其它毒株完全一致 ,但在B位点发生改变 ,即第 97个氨基酸发生改变 ,由Trp突变为Ser。该核苷酸该片段全长 12 6 1bp ,包括起始密码子ATG及基因间的共同序列ACTAAAC。本研究首次报道了国内的TGEV分离株_H弱毒株S基因的RT_PCR扩增及其编码的B、C抗原位点片段的分子克隆及序列分析 ,为进一步揭示TGEV强弱毒差别的分子机制。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 分子克隆 序列分析
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Variation among poplar clones for growth and crown traits under field conditions at two sites of North-western India 被引量:5
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作者 G.P.S. Dhillon Avtar Singh +1 位作者 D.S. Sidhu H.S. Brar 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第1期61-67,共7页
We evaluated the growth and crown traits of 36 poplar clones at two distinct agro-climatic regions of Punjab (Ludhiana and Bathinda) in northwestern India, following randomized block design with three replications a... We evaluated the growth and crown traits of 36 poplar clones at two distinct agro-climatic regions of Punjab (Ludhiana and Bathinda) in northwestern India, following randomized block design with three replications and plot size of four trees. Significant differences among clones (p〈0.001) were observed for diameter at breast height (DBH), tree height, volume, crown width and number of branches under both the site conditions. Clones ‘G-3’, ‘25-N’ and ‘41-N’ at Ludhiana and ‘G-3’, ‘RD-01’ and ‘S7C8’ at Bathinda were found to be superior for volume production. All growth and crown traits registered significantly higher values at Ludhiana in comparison to those at Bathinda. Clone site interaction was also significant (p〈0.001). For volume, clones ‘L-62/84’, ‘113520’, ‘25-N’ and ‘S4C2’ witnessed huge fluctuations in ranking between sites. The correlations between growth traits were positive and highly significant (p〈0.001) at both sites. The clonal mean heritability was moderate for DBH and volume both at Ludhiana (0.61–0.66) and Bathinda (0.61–0.62). Across sites, the genetic advance was the highest for volume (49.76%) and the lowest (6.50%) in case of height. 展开更多
关键词 clonal heritability clonal selection clone-site interaction genetic correlation Populus deltoides
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脂肪酶A的研究进展 被引量:4
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作者 何勇锦 周有彩 +4 位作者 季潇炜 邱昌扬 王明兹 郭诤 陈必链 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期255-261,共7页
来自南极假丝酵母(Candida antarctica)产的脂肪酶A(CALA)作为一种生物催化剂,已广泛应用食品、医药、化妆品等领域,具有热稳定性、对映体选择性强、反式脂肪酸的选择性等特性。文中就该酶的分子结构、克隆表达、催化特性及其特性应用... 来自南极假丝酵母(Candida antarctica)产的脂肪酶A(CALA)作为一种生物催化剂,已广泛应用食品、医药、化妆品等领域,具有热稳定性、对映体选择性强、反式脂肪酸的选择性等特性。文中就该酶的分子结构、克隆表达、催化特性及其特性应用进行综述,旨在能发现该酶的新用途和新特性。 展开更多
关键词 脂肪酶A(CALA) 活性中心 克隆表达 催化特性
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尾叶桉无性系多性状遗传分析 被引量:5
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作者 李光友 徐建民 +3 位作者 Risto Vuokko 陆钊华 蒋虎 唐正涛 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第1期43-47,共5页
对广西山口林场、钦廉林场天堂分场及钦州市犀牛脚镇等3个地点20个以尾叶桉为主参试无性系6、12、18、42个月生的生长性状进行分析与遗传测定.结果表明:参试的20个无性系生长性状在无性系、地点和无性系×地点交互效应上均存在极显... 对广西山口林场、钦廉林场天堂分场及钦州市犀牛脚镇等3个地点20个以尾叶桉为主参试无性系6、12、18、42个月生的生长性状进行分析与遗传测定.结果表明:参试的20个无性系生长性状在无性系、地点和无性系×地点交互效应上均存在极显著差异;42个月生参试的20个无性系在不同试验地点平均生长量表现为:钦廉林场天堂分场>山口林场>钦州市犀牛脚镇,性状综合分析及评定表明12、15、18号等3个尾叶桉无性系适应性广,具速生丰产性,可推广利用;3个试点选择12、15、18号3个普适型无性系时,其单株材积遗传增益可达35.32%-47.57%. 展开更多
关键词 尾叶桉无性系 生长分析 无性系×地点互作 早期选择
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