目的:克隆并原核表达小鼠高迁移率族蛋白1(high mobility group box1,HMGB1)。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,应用RT-PCR获得小鼠HMGB1cDNA,经PCR扩增小鼠HMGB1基因;通过T-A克隆将该基因构建到PMD-18T载体中,测序鉴定;将该基因插入pET...目的:克隆并原核表达小鼠高迁移率族蛋白1(high mobility group box1,HMGB1)。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,应用RT-PCR获得小鼠HMGB1cDNA,经PCR扩增小鼠HMGB1基因;通过T-A克隆将该基因构建到PMD-18T载体中,测序鉴定;将该基因插入pET-28a(+)表达载体,IPTG诱导后,可表达相对分子质量约30 kDa的蛋白。蛋白质印迹鉴定表达的目的蛋白。结果:经RT-PCR扩增得到648 bp的DNA片段,序列分析显示与基因库中报道的已知序列完全一致;构建了含有HMGB1编码序列的原核表达载体,经诱导表达、蛋白质印迹鉴定,获得相对分子质量约30 kDa的融合蛋白。结论:成功克隆和表达了小鼠HMGB1基因,为HMGB1蛋白的功能试验奠定了基础。展开更多
