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水稻白叶枯病黄单胞菌中与甘蓝黑腐病黄单胞菌致病因子调控基因(rpf 基因)同源基因的分子克隆 被引量：1
1
作者 唐纪良 温海祥 +2 位作者 黎起秦 冯家勋 马庆生 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 1991年第2期1-9,共9页
DNA-DNA 杂交结果表明,水稻白叶枯病黄单胞菌总 DNA 中存在着与甘蓝黑腐病黄单胞菌致病因子调控基因(rpf 基因)具有同源性的 DNA 外段.应用广谱性寄主载体pLAFRI,在大肠杆菌中建立了水稻白叶枯病黄单胞菌野生型菌株 T3000的基因文库.从... DNA-DNA 杂交结果表明,水稻白叶枯病黄单胞菌总 DNA 中存在着与甘蓝黑腐病黄单胞菌致病因子调控基因(rpf 基因)具有同源性的 DNA 外段.应用广谱性寄主载体pLAFRI,在大肠杆菌中建立了水稻白叶枯病黄单胞菌野生型菌株 T3000的基因文库.从文库中筛选到与 rpf 基因具有同源性的克隆 pGXN3000,将重组质粒 pGXN3000通过三亲本接合转入甘蓝黑腐病黄单胞菌 rpf 基因突变体,发现 pGXN3000能互补甘蓝黑腐病黄单胞菌 rpf突变体,恢复其致病性胞外酶和胞外多糖的产生及致病性.转座子 Tn5诱变,缺失分析及DNA-DNA 杂交实验结果表明,重组质粒 pGXN3000中确实含有与甘蓝黑腐病黄单胞菌编码。双组份调控系统”蛋白的 rpfC 基因功能相同的基因,此基因被定位于 pGXN3000中的3kb BamHl 片段中。 展开更多
关键词 克隆 水稻 白叶枯病 甘蓝 黑腐病 黄单胞菌属/致病因子调控基因(rpf 基因) 双组份调控系统
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PCR技术在单克隆抗体cDNA的筛选及标记同位素探针上的应用 被引量：1
2
作者 黄震宇 朱伟民 洪锦心 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1992年第4期14-17,7374,共5页
以往对cDNA克隆鉴定过程中,经斑点杂交筛选出的克隆数较多,在进一步的鉴定中不可避免地要进行质粒扩增、抽提、纯化酶解、片段分离等许多步骤。本文对这一步的鉴定采用了PCR技术,这样便可省去酶解及片段分离等繁琐步骤。且由于扩增片段... 以往对cDNA克隆鉴定过程中,经斑点杂交筛选出的克隆数较多,在进一步的鉴定中不可避免地要进行质粒扩增、抽提、纯化酶解、片段分离等许多步骤。本文对这一步的鉴定采用了PCR技术,这样便可省去酶解及片段分离等繁琐步骤。且由于扩增片段纯净,故可直接用于Southern blot鉴定及DNA序列分析。 本文另一新的探索是利用PCR法标记探针,尤其是小片段DNA探针,其不同于常用的缺口平移和随机引物延伸标记。由于它在扩增过程中只有位于两个引物间的片段才能标上同位素,所以标记后的探针量大、比放射性强,加之PCR合成仪的出现,使此法更加高效、简便安全。 展开更多
关键词 PCR 同位素探针 标记 单克隆抗体
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