】目的 :构建小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c DNA重组表达质粒 ,以便深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :通过反转录 PCR从 NIH3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基编码区 c DNA,PCR扩增酶为高保真 DNA聚合酶。将 N de I/ H i...】目的 :构建小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c DNA重组表达质粒 ,以便深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :通过反转录 PCR从 NIH3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基编码区 c DNA,PCR扩增酶为高保真 DNA聚合酶。将 N de I/ H ind 彻底双酶切 PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去 5′端磷酸的同样彻底 Nde I/ H ind 双酶切的表达载体 p T7- 7中 ,转化感受态大肠杆菌 DH5 α获得转化子 ,用 0 .8%琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选两个阳性克隆进行 DNA测序。结果 :转化子的阳性筛选率为 10 0 % ,限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。 DNA测序结果表明 :两个重组小鼠 CK2 β亚基克隆中的插入片段序列均与两种已报道的小鼠 CK2 β亚基 c DNA编码区序列分别存在一个碱基差异 ,但我们报道的这 2个差异碱基与大鼠、兔、猪和人 CK2 β亚基 c DNA的编码区相应碱基序列一致。结论 :本实验克隆的小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c展开更多
文摘】目的 :构建小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c DNA重组表达质粒 ,以便深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :通过反转录 PCR从 NIH3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基编码区 c DNA,PCR扩增酶为高保真 DNA聚合酶。将 N de I/ H ind 彻底双酶切 PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去 5′端磷酸的同样彻底 Nde I/ H ind 双酶切的表达载体 p T7- 7中 ,转化感受态大肠杆菌 DH5 α获得转化子 ,用 0 .8%琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选两个阳性克隆进行 DNA测序。结果 :转化子的阳性筛选率为 10 0 % ,限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。 DNA测序结果表明 :两个重组小鼠 CK2 β亚基克隆中的插入片段序列均与两种已报道的小鼠 CK2 β亚基 c DNA编码区序列分别存在一个碱基差异 ,但我们报道的这 2个差异碱基与大鼠、兔、猪和人 CK2 β亚基 c DNA的编码区相应碱基序列一致。结论 :本实验克隆的小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c
