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蜂斗菜素调控circSETDB1/miR-345-5p对肝癌细胞生物学行为的影响
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作者 王锻 周莉 《湖南中医药大学学报》 CAS 2024年第11期2014-2023,共10页
目的本研究旨在评估蜂斗菜素对肝细胞癌细胞系2(hepatocellular carcinoma cell line 2,HepG2)的抗肿瘤活性,并探讨蜂斗菜素通过调控环状SET结构域蛋白1(circular RNA SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,circSE... 目的本研究旨在评估蜂斗菜素对肝细胞癌细胞系2(hepatocellular carcinoma cell line 2,HepG2)的抗肿瘤活性,并探讨蜂斗菜素通过调控环状SET结构域蛋白1(circular RNA SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,circSETDB1)和微小RNA-345-5p(microRNA-345-5p,miR-345-5p)的mRNA表达对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将HepG2细胞分为多个处理组。对照组不做任何处理;蜂斗菜素处理包括蜂斗菜素L组(25 mol/L)、蜂斗菜素M组(50 mol/L)、蜂斗菜素H组(100 mol/L)、蜂斗菜素组(100 mol/L);siRNA干扰包含环状SET结构域蛋白1小干扰RNA(small interfering RNA targeting circular SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,si-circSETDB1)组、小干扰RNA阴性对照(small interfering RNA negative control,si-NC)组;过表达环状SET结构域蛋白1过表达质粒(overexpression vector for circular SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,pcDNA-circSETDB1)组和蜂斗菜素+pcDNA-circSETDB1组。采用qRT-PCR检测肝癌组织及癌旁组织的circSETDB1和miR-345-5p的mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平;克隆形成实验检测细胞集落形成;划痕实验和Transwell实验分别检测细胞愈合率和迁移;双荧光素酶报告基因实验验证circSETDB1与miR-345-5p的靶向关系。结果与癌旁组织相比,肝癌组织中circSETDB1 mRNA表达升高(P<0.05),miR-345-5p mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,蜂斗菜素各剂量组HepG2细胞的细胞活性、集落形成数降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。与si-NC组相比,si-circSETDB1组HepG2细胞的circSETDB1表达、细胞活性、集落形成数、迁移细胞数和划痕愈合率降低(P<0.05),miR-345-5p表达、细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与蜂斗菜素组相比,蜂斗菜素+pcDNA-circSETDB1组HepG2细胞中circSETDB1表达、细胞活性、集落形成数、迁移细胞数和划痕愈合率升高(P<0.05),miR-345-5p表达、细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05)。结论蜂斗菜素可抑制肝癌细胞HepG2增殖和迁移,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制circSETDB1表达而上调miR-345-5p表达有关。 展开更多
关键词 蜂斗菜素 肝癌 circsetdb1 miR-345-5p 细胞增殖 凋亡 迁移
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