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circHECTD1在脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应中的N6-甲基腺苷依赖性调控机制
1
作者 别恒杰 符亚红 +1 位作者 贾恩志 陶正贤 《实用心电与临床诊疗》 2025年第4期481-493,共13页
目的探讨环状RNA circHECTD1作为冠心病的潜在诊断标志物,在巨噬细胞极化过程中的调控作用及相关机制。方法采用脂多糖诱导的M1型巨噬细胞极化模型模拟低度炎症反应过程。通过实时荧光定量PCR检测circHECTD1及N6-甲基腺苷(N6-methyladen... 目的探讨环状RNA circHECTD1作为冠心病的潜在诊断标志物,在巨噬细胞极化过程中的调控作用及相关机制。方法采用脂多糖诱导的M1型巨噬细胞极化模型模拟低度炎症反应过程。通过实时荧光定量PCR检测circHECTD1及N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)调控因子的表达水平,并利用蛋白质印迹法检测M1表型标志蛋白和自噬相关蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果沉默circHECTD1可显著降低M1表型相关蛋白和炎症因子的表达,降低ROS水平并增强细胞自噬能力。在细胞模型及冠心病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)样本中,多种m6A调控因子的表达呈紊乱状态。多种m6A甲基化调控因子在冠心病组与对照组间的表达水平差异有统计学意义,提示其在冠心病诊断中的潜在价值。单因素及多因素Logistic回归分析显示,m6A调控因子METTL3、METTL14、ALKBH5和YTHDC2与冠心病风险显著相关。进一步分析发现,在动脉粥样硬化晚期阶段,METTL14和ALKBH5表达显著上调。circHECTD1的表达水平与FTO、YTHDF3、ALKBH5、METTL3、METTL14和YTHDF2显著相关。体外实验结果表明,沉默METTL14和ALKBH5可显著下调circHECTD1的表达,提示METTL14和ALKBH5可正向调控circHECTD1表达。结论m6A调控因子的表达紊乱可能与冠心病的发生发展密切相关,其机制是通过调节circHECTD1的表达和功能参与疾病进程。 展开更多
关键词 冠心病 circhectd1 M1型巨噬细胞 N6-甲基腺苷
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circHECTD1在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及靶向miR-296-3p的调控机制
2
作者 王伟新 杨建斌 +1 位作者 魏东义 郭田 《中华实验外科杂志》 2025年第12期2522-2526,共5页
目的探讨circHECTD1在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及靶向miR-296-3p的调控机制。方法选取2023年6月到2024年6月河南医药大学第一附属医院收集经病理确诊的口腔鳞状细胞癌组织样本和对应癌旁正常组织41例作为研究对象, 采用荧光定量PCR... 目的探讨circHECTD1在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及靶向miR-296-3p的调控机制。方法选取2023年6月到2024年6月河南医药大学第一附属医院收集经病理确诊的口腔鳞状细胞癌组织样本和对应癌旁正常组织41例作为研究对象, 采用荧光定量PCR分析口腔鳞状细胞癌和癌旁组织中circHECTD1表达水平。以circHECTD1均值为阈值, 分别为circHECTD1高表达组和低表达组, 分析circHECTD1表达水平与转移的关系。将对数生长期的CAL-27细胞接种于6孔板, 分别采用对照shRNA、circHECTD1 shRNA、空载和circHECTD1过表达慢病毒感染, 建立对照细胞系(shRNA-NC组)、circHECTD1敲低细胞系(circHECTD1-KD组)、对照细胞系(对照组)和circHECTD1过表达细胞系(circHECTD1-OE组)。采用细胞划痕实验检测细胞的迁移能力, 采用Transwell实验检测细胞的侵袭能力。采用蛋白质免疫印迹分析采用Starbase数据库搜索与circHECTD1可能存在互补配对区域的miRNA。采用双荧光素酶报告基因分析circHECTD1与miRNA的调控关系。组间计量数据比较采用独立样本t检验。结果口腔鳞状细胞癌组织中circHECTD1的相对表达量(1.79±0.20)显著高于癌旁正常组织(0.94±0.12), 差异有统计学意义(t=22.950, P<0.05)。circHECTD1高表达组患者的淋巴结转移率[63.33%(19/30)]显著高于circHECTD1低表达组患者[27.27%(3/11)], 差异有统计学意义(χ^(2)=4.209, P<0.05)。shRNA-NC组细胞划痕愈合率[(79.14±6.69)%]明显高于circHECTD1-KD组细胞缓和愈合率[(55.86±4.91)%], 差异有统计学意义(t=7.419, P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(82.86±5.93)%]明显低于circHECTD1-OE组细胞[(90.71±4.03)%], 差异有统计学意义(t=2.900, P<0.05)。shRNA-NC组细胞侵袭数量[(60.71±4.15)个]明显高于circHECTD1-KD组细胞[(37.14±7.73)个], 差异有统计学意义(t=7.105, P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(58.14±5.08)个]明显低于circHECTD1-OE组细胞[(67.14±5.87)%], 差异有统计学意义(t=3.067, P<0.05)。shRNA-NC组细胞E-钙黏蛋白表达水平(1.05±0.14)明显低于circHECTD1-KD组细胞(1.40±0.07), 差异有统计学意义(t=5.813, P<0.05)。对照组细胞E-钙黏蛋白表达水平(1.02±0.13)明显高于circHECTD1-OE组细胞(0.66±0.09), 差异有统计学意义(t=5.937, P<0.05)。shRNA-NC组细胞N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平(1.04±0.07、0.88±0.05)明显高于circHECTD1-KD组细胞(0.69±0.09、0.60±0.08), 差异有统计学意义(t=8.705、7.456, P<0.05)。对照组细胞N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平(1.06±0.09、0.87±0.06)明显低于circHECTD1-OE组细胞(1.46±0.13、1.43±0.13), 差异有统计学意义(t=6.747、10.490, P<0.05)。circHECTD1与miR-296-3p存在碱基互补。口腔鳞状细胞癌组织中miR-296-3p的相对表达量(0.72±0.09)显著低于癌旁正常组织(1.03±0.12), 差异有统计学意义(t=22.950, P<0.05)。circHECTD1-OE组细胞miR-296-3p的相对表达量(0.63±0.08)明显低于对照组细胞(1.00±0.08), 差异有统计学意义(t=8.340,P<0.05)。结论 circHECTD1在口腔鳞状细胞癌组织中呈高表达, 通过与miR-296-3p作用, 调节口腔鳞状细胞癌的转移能力。 展开更多
关键词 circhectd1 口腔鳞状细胞癌 肿瘤转移 miR-296-3p
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