目的探讨circFAT1调控miR-145对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及其潜在机制,为骨肉瘤的分子靶向治疗提供新的视角和理论依据。方法收集2015-07-10-2017-02-10在空军军医大学第一附属医院骨科住院治疗的30例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和癌旁...目的探讨circFAT1调控miR-145对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及其潜在机制,为骨肉瘤的分子靶向治疗提供新的视角和理论依据。方法收集2015-07-10-2017-02-10在空军军医大学第一附属医院骨科住院治疗的30例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测circFAT1和miR-145在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平。在HOS和U2OS细胞中分别转染sh-NC和sh-circFAT1后,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞增殖情况,qRT-PCR法检测增殖相关分子Ki-67表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测凋亡相关分子cleaved-Caspase-3的表达水平。采用双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)法检测circFAT1和miR-145结合情况。采用Pearson相关分析探讨circFAT1与miR-145在骨肉瘤组织中表达的相关关系。运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并通过log-rank检验评估生存率的差异。结果circFAT1在骨肉瘤组织(2.00±0.56 vs 1.21±0.40,t=6.094,P<0.001)和细胞(HOS:1.42±0.11,U2OS:2.36±0.20;vs Host:1.00±0.09,t值分别为5.174和11.030,均P<0.001)中高表达并与患者预后不良(χ^(2)=4.264,P=0.039)有关。沉默circFAT1能够抑制HOS(F=11.423,P=0.003)和U2OS(F=8.004,P=0.009)细胞增殖和下调增殖相关分子Ki-67(HOS:1.00±0.05 vs 0.65±0.05,t=8.156,P=0.001;U2OS:1.00±0.03 vs 0.55±0.06,t=11.186,P<0.001)的表达水平;过表达circFAT1促进HOS(5.50±0.56 vs 10.23±1.03,t=7.006,P=0.002)和U2OS(6.25±0.64 vs 12.02±1.10,t=7.855,P=0.001)细胞凋亡和上调凋亡相关分子cleaved-Caspase-3(HOS:1.00±0.04 vs 1.36±0.12,t=4.789,P=0.009;U2OS:1.00±0.04 vs 1.45±0.13,t=5.721,P=0.005)的表达水平。荧光素酶报告基因和RIP检测结果显示,circFAT1能够通过ceRNA机制靶向结合miR-145。沉默circFAT1上调HOS(1.00±0.04 vs 1.52±0.11,t=7.850,P=0.001)和U2OS(1.00±0.05 vs 1.64±0.12,t=8.648,P=0.001)细胞中miR-145表达水平。miR-145在骨肉瘤组织和细胞中低表达,同时circFAT1和miR-145在骨肉瘤组织中的表达水平呈负相关,r=-0.472,P=0.009。回复实验显示,过表达circFAT1能够促进HOS和U2OS细胞增殖和抑制细胞凋亡,在转染oe-circFAT1+miR-145 mimics后能够反转过表达circFAT1对HOS和U2OS细胞增殖和凋亡的影响。结论circFAT1在骨肉瘤组织和细胞中高表达,circFAT1能够通过ceRNA机制靶向miR-145促进骨肉瘤细胞增殖和抑制细胞凋亡。展开更多
文摘目的探讨circFAT1调控miR-145对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及其潜在机制,为骨肉瘤的分子靶向治疗提供新的视角和理论依据。方法收集2015-07-10-2017-02-10在空军军医大学第一附属医院骨科住院治疗的30例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测circFAT1和miR-145在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平。在HOS和U2OS细胞中分别转染sh-NC和sh-circFAT1后,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞增殖情况,qRT-PCR法检测增殖相关分子Ki-67表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测凋亡相关分子cleaved-Caspase-3的表达水平。采用双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)法检测circFAT1和miR-145结合情况。采用Pearson相关分析探讨circFAT1与miR-145在骨肉瘤组织中表达的相关关系。运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并通过log-rank检验评估生存率的差异。结果circFAT1在骨肉瘤组织(2.00±0.56 vs 1.21±0.40,t=6.094,P<0.001)和细胞(HOS:1.42±0.11,U2OS:2.36±0.20;vs Host:1.00±0.09,t值分别为5.174和11.030,均P<0.001)中高表达并与患者预后不良(χ^(2)=4.264,P=0.039)有关。沉默circFAT1能够抑制HOS(F=11.423,P=0.003)和U2OS(F=8.004,P=0.009)细胞增殖和下调增殖相关分子Ki-67(HOS:1.00±0.05 vs 0.65±0.05,t=8.156,P=0.001;U2OS:1.00±0.03 vs 0.55±0.06,t=11.186,P<0.001)的表达水平;过表达circFAT1促进HOS(5.50±0.56 vs 10.23±1.03,t=7.006,P=0.002)和U2OS(6.25±0.64 vs 12.02±1.10,t=7.855,P=0.001)细胞凋亡和上调凋亡相关分子cleaved-Caspase-3(HOS:1.00±0.04 vs 1.36±0.12,t=4.789,P=0.009;U2OS:1.00±0.04 vs 1.45±0.13,t=5.721,P=0.005)的表达水平。荧光素酶报告基因和RIP检测结果显示,circFAT1能够通过ceRNA机制靶向结合miR-145。沉默circFAT1上调HOS(1.00±0.04 vs 1.52±0.11,t=7.850,P=0.001)和U2OS(1.00±0.05 vs 1.64±0.12,t=8.648,P=0.001)细胞中miR-145表达水平。miR-145在骨肉瘤组织和细胞中低表达,同时circFAT1和miR-145在骨肉瘤组织中的表达水平呈负相关,r=-0.472,P=0.009。回复实验显示,过表达circFAT1能够促进HOS和U2OS细胞增殖和抑制细胞凋亡,在转染oe-circFAT1+miR-145 mimics后能够反转过表达circFAT1对HOS和U2OS细胞增殖和凋亡的影响。结论circFAT1在骨肉瘤组织和细胞中高表达,circFAT1能够通过ceRNA机制靶向miR-145促进骨肉瘤细胞增殖和抑制细胞凋亡。
