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环状RNA circ-SOD2对肠上皮屏障和溃疡性结肠炎的作用 被引量：7
1
作者 王婷婷 韩影 +2 位作者 高芳芳 叶磊 张育军 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期805-812,共8页
目的:探索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中环状RNA的表达谱改变,寻找在溃疡性结肠炎中表达发生明显异常的环状RNA,并探讨其对肠上皮细胞屏障功能的影响。方法:挑选5对UC患者炎症结直肠黏膜组织和正常黏膜组织进行环状RNA,芯片检... 目的:探索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中环状RNA的表达谱改变,寻找在溃疡性结肠炎中表达发生明显异常的环状RNA,并探讨其对肠上皮细胞屏障功能的影响。方法:挑选5对UC患者炎症结直肠黏膜组织和正常黏膜组织进行环状RNA,芯片检测,筛选溃疡性结肠炎中表达发生改变的环状RNA。使用实时荧光定量PCR在30例UC患者炎症结直肠黏膜组织和正常黏膜组织中进一步验证表达发生明显上调的环状RNA circ-SOD2。使用炎症因子(LPS、TNF-α和IL1-β)刺激肠上皮细胞系Caco2、NMC460,检测circ-SOD2的表达改变。使用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检测circ-SOD2在UC肠黏膜组织中的细胞定位。构建并合成circ-SOD2过表达载体,将其转染至Caco2细胞后检测Caco2细胞的跨上皮细胞电阻、FITC-右旋糖酐透过率,使用Western blotting检测上皮细胞屏障相关蛋白的表达改变。结果:环状RNA芯片检测后,通过限定条件(差异倍数>1.5,P<0.05),在溃疡性结肠炎受累的结直肠黏膜中共筛选出111个上调、153个下调的circRNA。限定筛选条件:(1)在circRNA表达谱芯片中原始信号值(raw data)>100;(2)差异表达倍数>2倍;(3)差异有统计学意义(P<0.05),筛选出10个差异明显的circRNA,并最终锁定在UC炎症肠黏膜组织中上调倍数最高的circ-SOD2。进一步扩大样本量在30对溃疡性结肠炎患者炎症和正常肠黏膜组织中使用荧光实时定量PCR技术进行验证,发现circ-SOD2表达明显上调(P<0.001);使用LPS、TNF-α、IL1-β刺激Caco2、NCM460细胞后,发现circ-SOD2在刺激后1~7 h的不同时间点均表达上调。荧光原位杂交实验表明circ-SOD2主要表达于肠黏膜组织的肠上皮细胞,而在间质和炎症细胞中表达较少。在Caco2细胞中过表达circ-SOD2后,跨上皮细胞电阻明显下降,FITC-右旋糖酐透过率明显上升,上皮细胞屏障分子闭合蛋白(claudin-8,CLDN-8)表达明显下降(P<0.05)。结论:溃疡性结肠炎中环状RNA表达出现明显异常,其中在UC中表达上调的circ-SOD2可减弱肠上皮屏障,进而可能导致溃疡性结肠炎发生。 展开更多
关键词 环状RNA circ-sod2 肠上皮屏障 溃疡性结肠炎
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circ-SOD2/miR-424-5p分子轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的调控作用 被引量：1
2
作者 汪蕾 杨沙 +1 位作者 尹小娟 温慧敏 《现代医学》 2021年第8期911-918,共8页
目的:探讨circ-SOD2/miR-424-5p分子轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制。方法:用脂多糖(LPS)诱导的滑膜成纤维细胞建立类风湿关节炎模型(LPS组);实验分组:Con组、LPS+si-NC组、LPS+si-circ-SOD2组、LPS+m... 目的:探讨circ-SOD2/miR-424-5p分子轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制。方法:用脂多糖(LPS)诱导的滑膜成纤维细胞建立类风湿关节炎模型(LPS组);实验分组:Con组、LPS+si-NC组、LPS+si-circ-SOD2组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-424-5p组、LPS+si-circ-SOD2+anti-miR-NC组、LPS+si-circ-SOD2+anti-miR-424-5p组;采用实时荧光定量PCR法检测circ-SOD2与miR-424-5p的表达量;采用ELISA法检测TNF-α、IL-6的水平;采用MTT实验、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测circ-SOD2与miR-424-5p的靶向关系;采用Western blot法检测Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白表达量。结果:与Con组比较,LPS组circSOD2的表达水平升高(P<0.05),细胞增殖率与TNF-α、IL-6的水平升高(P<0.05),克隆形成数增多(P<0.05),miR-424-5p的表达水平降低(P<0.05),凋亡率与Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白水平降低(P<0.05);与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ-SOD2组细胞增殖率与TNF-α、IL-6的水平降低(P<0.05),克隆形成数减少(P<0.05),miR-424-5p的表达水平升高(P<0.05),凋亡率与Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白水平升高(P<0.05);circ-SOD2能够靶向调控miR-424-5p;与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-424-5p组TNF-α、IL-6的水平降低(P<0.05),细胞增殖率降低(P<0.05),克隆形成数减少(P<0.05),凋亡率与Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),而共转染si-circ-SOD2与anti-miR-424-5p可明显逆转干扰circ-SOD2表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症、增殖、克隆形成与凋亡的作用。结论:干扰circ-SOD2表达可通过靶向调控miR-424-5p而抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症反应、增殖、克隆形成及诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 circ-sod2 miR-424-5p 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 增殖 凋亡
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