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靶向敲除CDK2致人黑素瘤移植瘤的蛋白质组改变
1
作者 刘厚广 李铮 +4 位作者 霍珊珊 魏琼玲 张海梅 吴剑宾 蒋雅雯 《应用化学》 北大核心 2025年第3期345-352,共8页
人黑色素瘤具有较高的发病率和死亡率,特别是高级别的恶性黑色素瘤严重威胁着人类健康。人黑色素瘤细胞的细胞周期失去调控是黑色素瘤生成的先决条件,其中细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)在细胞周期调控中具有重要作用。然而,CDK2如何调... 人黑色素瘤具有较高的发病率和死亡率,特别是高级别的恶性黑色素瘤严重威胁着人类健康。人黑色素瘤细胞的细胞周期失去调控是黑色素瘤生成的先决条件,其中细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)在细胞周期调控中具有重要作用。然而,CDK2如何调控人黑色素瘤细胞的蛋白质组目前仍是未知。本文研究了靶向敲除CDK2对人黑色素瘤移植瘤蛋白质组的影响。结果表明,重组sgCDK2-108慢病毒感染人黑色素瘤细胞A375的小鼠移植瘤后,与肿瘤组相比,CDK2靶向敲除组共有185个DEPs(下调68个DEPs、上调117个DEPs)发生显著改变;与CDK2靶向敲除阴性对照组相比,CDK2靶向敲除组共有203个DEPs(下调98个DEPs、上调105个DEPs)发生显著改变。Rps29、Adrm1、Fam162a和Rps15为靶向敲除CDK2后共同下调的DEPs,Obp1b、Serpinb1a、Ttr和Slc9a3r1为靶向敲除CDK2后共同上调的DEPs。DEPs主要参与肽酶活性调节、肽链内切酶活性调节及水解酶活性负调节等生物学过程。本研究揭示了CDK2在人黑色素瘤生成过程中的调控网络和生物功能的作用,为靶向CDK2治疗人黑色素瘤提供新的参考。 展开更多
关键词 人黑色素瘤 cdk2 蛋白质组 移植瘤
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SPON2通过PCBP4影响肝癌细胞CDK2的表达及增殖能力
2
作者 周逢仓 汪玲 +2 位作者 乔婷婷 刘蓉 王惠 《皖南医学院学报》 2025年第3期213-217,共5页
目的:探讨细胞外基质蛋白脊椎蛋白2(SPON2)对肝癌细胞增殖能力的影响及其潜在机制。方法:利用生物信息学分析SPON2在肝癌中的诊断价值及其预后影响;利用Western blot检测SPON2的表达水平以进行肝癌细胞系筛选;利用小分子干扰RNA和外源... 目的:探讨细胞外基质蛋白脊椎蛋白2(SPON2)对肝癌细胞增殖能力的影响及其潜在机制。方法:利用生物信息学分析SPON2在肝癌中的诊断价值及其预后影响;利用Western blot检测SPON2的表达水平以进行肝癌细胞系筛选;利用小分子干扰RNA和外源性过表达质粒构建相关基因表达抑制和过表达的细胞模型并验证;利用EdU和CCK-8细胞检测试剂盒检测各组细胞的增殖能力。结果:抑制SPON2的表达可降低肝癌细胞的增殖能力(P<0.05);SPON2的表达影响肝癌细胞中多聚(rC)结合蛋白4(PCBP4)的表达水平(P<0.05);抑制PCBP4的表达可降低细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)的表达水平并抑制细胞增殖能力(P<0.05);单独抑制PCBP4组细胞与抑制PCBP4后过表达SPON2组中的CDK2表达水平及细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SPON2通过PCBP4影响肝癌细胞CDK2的表达及增殖能力。 展开更多
关键词 脊椎蛋白2 PCBP4 肝癌 cdk2
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基于机器学习与分子动力学模拟发现CDK2抑制剂
3
作者 谭英佳 陈亮 +2 位作者 刘聿琳 那日松 赵熹 《高等学校化学学报》 北大核心 2025年第3期121-131,共11页
通过机器学习和分子动力学模拟方法发现了细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)潜在的抑制剂.首先,利用现有的大型活性数据库和机器学习算法,建立了针对CDK2抑制剂的分类模型.采用圆形指纹(ECFP6)的极端梯度提升树模型(XGBoost)筛选Enamine数... 通过机器学习和分子动力学模拟方法发现了细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)潜在的抑制剂.首先,利用现有的大型活性数据库和机器学习算法,建立了针对CDK2抑制剂的分类模型.采用圆形指纹(ECFP6)的极端梯度提升树模型(XGBoost)筛选Enamine数据库,并选出了1152个新型化合物.通过分子对接和打分函数对这些潜在化合物在CDK2中的亲和力进行了排序,并采用指纹聚类的方法将化合物分为4类.分别从4类中选择1种对接评分较高的化合物,然后对4种化合物进行了类药性分析和分子动力学模拟.类药性分析结果表明,筛选出的4种潜在的CDK2抑制剂(Z1766368563, Z363564868, Z1891240670和Z2701273053)具有良好的成药性,并在分子动力学模拟结果中具有较高的结合自由能.这4种化合物可作为CDK2的先导化合物进行后续的改造和优化. 展开更多
关键词 cdk2抑制剂 机器学习 分子动力学 结合自由能
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新型CDK2变构小分子抑制剂的设计、合成、活性及代谢稳定性研究
4
作者 洪悦 宁少波 +2 位作者 钟杰 张健 赵明珠 《中国药物化学杂志》 2025年第5期333-346,共14页
目的 以CDK2变构抑制剂EF-3-006为先导化合物,通过骨架跃迁中的环闭合策略对其柔性连接体进行系统性改造,设计并合成一系列吲哚并五元环和双吲哚化合物,以期获得代谢稳定性强的CDK2变构小分子抑制剂。方法 以苯肼盐酸盐类化合物为起始原... 目的 以CDK2变构抑制剂EF-3-006为先导化合物,通过骨架跃迁中的环闭合策略对其柔性连接体进行系统性改造,设计并合成一系列吲哚并五元环和双吲哚化合物,以期获得代谢稳定性强的CDK2变构小分子抑制剂。方法 以苯肼盐酸盐类化合物为起始原料,经Fischer吲哚合成、脱保护、亲核取代、酯水解反应得到化合物C01~C14;以吲哚-2-甲酸类化合物为起始原料,经还原、偶联、羰基化反应得到化合物C15~C17。采用ADP-Glo激酶检测体系,测定目标化合物对CDK2激酶活性的抑制作用,利用人肝微粒体代谢实验评估化合物的代谢稳定性。进一步通过表面等离子体共振技术与定点突变实验验证化合物结合位点。结果与结论设计并合成了14个吲哚并五元环化合物(C01~C14)以及3个双吲哚化合物(C15~C17),结构均经~1H-NMR、^(13)C-NMR和HRMS谱确证。体外激酶活性测试结果表明,化合物C15在体外对CDK2激酶活性的抑制能力较强,其IC_(50)值为10.4μmol·L^(-1);在人肝微粒体代谢稳定性测试中,化合物C03和C15的半衰期分别达到186.4 min和137.6 min,是先导化合物EF-3-006(12.7 min)的15倍和11倍。 展开更多
关键词 cdk2 变构调节 抑制剂 代谢稳定性 骨架跃迁
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靶向CDK2的小分子抑制剂的研究进展
5
作者 冯晋 程建昕 《江西科学》 2025年第1期171-180,共10页
目的:目前已有多个细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的小分子抑制剂在临床阶段表现出优异的体内外抗肿瘤活性,有望为肿瘤治疗提供全新策略。方法:通过检索国内外CDKS抑制剂的文献,对调控CDK2功能的信号通路及小分子药物的生物活性、结合... 目的:目前已有多个细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的小分子抑制剂在临床阶段表现出优异的体内外抗肿瘤活性,有望为肿瘤治疗提供全新策略。方法:通过检索国内外CDKS抑制剂的文献,对调控CDK2功能的信号通路及小分子药物的生物活性、结合模式等方面进行系统的综述。结果:CDK2抑制剂主要包括选择性抑制剂、ATP竞争性抑制剂和非ATP竞争性抑制剂,可结合CDK2不同位点发挥作用。意义:既往CDK2抑制剂是非特异性的,一直以来存在受脱靶效应限制的诸多问题。鉴于此,开发靶向CDK2的新型抗肿瘤小分子抑制剂具有一定的研究意义。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶2 小分子抑制剂 肿瘤 细胞周期 研究进展
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CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测
6
作者 万苗苗 阳倩 +5 位作者 陈吉璐 陈丹丹 毛林 班谦 陈胜 惠文巧 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第2期27-31,共5页
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,... 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 山羊 cdk2 基因敲除
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ZWINT和CDK2在乳腺癌中的表达及与临床病理特征的关系和诊断价值 被引量：2
7
作者 张芳芳 韩一菲 +3 位作者 王靖楠 邹炎 应莉 李娜 《新医学》 2024年第1期5-11,共7页
目的探讨ZW10结合因子(ZWINT)和细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)的相关性及其在乳腺癌病理诊断中的价值。方法通过GEPIA数据库分析ZWINT在乳腺癌和正常乳腺组织之间的表达差异,以及在乳腺癌中ZWINT和CDK2表达的相关性。通过Kaplan-Meier Pl... 目的探讨ZW10结合因子(ZWINT)和细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)的相关性及其在乳腺癌病理诊断中的价值。方法通过GEPIA数据库分析ZWINT在乳腺癌和正常乳腺组织之间的表达差异,以及在乳腺癌中ZWINT和CDK2表达的相关性。通过Kaplan-Meier Plotter数据库预测ZWINT的表达与乳腺癌患者预后的关系。收集84例乳腺癌及其配对癌旁组织石蜡包埋病理标本和20例乳腺癌及其配对的癌旁组织新鲜标本,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学检测乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中ZWINT和CDK2的mRNA及蛋白的表达,分析ZWINT和CDK2与乳腺癌临床病理特征的关系,并采用关联分析分析ZWINT和CDK2的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线评估ZWINT和CDK2在乳腺癌病理诊断中的价值。结果数据库分析结果显示,ZWINT在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌中ZWINT和CDK2的表达呈正相关(r_(s)=0.600,P<0.001),ZWINT的表达与乳腺癌患者的预后相关(P均<0.05)。84例病例检测结果显示,在乳腺癌组织中ZWINT和CDK2的mRNA及蛋白的表达均高于癌旁组织(P均<0.05),并且其高表达均与肿瘤大小、分期和淋巴结转移相关(P均<0.05)。关联分析结果显示,对称测量下的Φ、Cramer V系数检验的关联程度相同,为0.322(P=0.003),而列联系数为0.306(P=0.003),ZWINT蛋白和CDK2蛋白表达密切相关。ZWINT和CDK2的ROC曲线的曲线下面积分别为0.886和0.818,对乳腺癌均具有较高的诊断价值。结论ZWINT和CDK2与乳腺癌的发生发展及预后相关,检测ZWINT和CDK2有助于乳腺癌的病理诊断。 展开更多
关键词 乳腺癌 ZW10结合因子 细胞周期蛋白依赖激酶2 临床病理特征 诊断价值
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CDK2-抑制剂结合自由能计算 被引量：11
8
作者 蒋勇军 曾敏 +2 位作者 周先波 邹建卫 俞庆森 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第18期1751-1754,共4页
细胞周期蛋白依赖性激酶II (cyclin dependentkinase 2 ,CDK2 )是一种重要的治疗癌症的靶标 .本文中采用分子动力学取样 ,运用MM PBSA/GBSA两种方法计算了CDK2 NU610 2复合物的绝对结合自由能 .通过能量分解的方法考察了CDK2大分子主... 细胞周期蛋白依赖性激酶II (cyclin dependentkinase 2 ,CDK2 )是一种重要的治疗癌症的靶标 .本文中采用分子动力学取样 ,运用MM PBSA/GBSA两种方法计算了CDK2 NU610 2复合物的绝对结合自由能 .通过能量分解的方法考察了CDK2大分子主要残基与配体NU610 2之间的相互作用和识别 . 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶Ⅱ 分子动力学 cdk2 抑制剂 结合自由能 相互作用 癌症
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斑节对虾CDK2基因全长cDNA克隆及表达分析 被引量：14
9
作者 戴文婷 傅明骏 +5 位作者 赵超 周发林 杨其彬 王艳 史进选 邱丽华 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期1-11,共11页
该研究以斑节对虾(Penaeus monodon)c DNA文库中的CDK2片段为基础,利用RACE技术获得Pm CDK2的c DNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。Pm CDK2基因全长1 679 bp,包括编码306个氨基酸的921 bp的开放阅读框(ORF),258 bp的5'UTR和5... 该研究以斑节对虾(Penaeus monodon)c DNA文库中的CDK2片段为基础,利用RACE技术获得Pm CDK2的c DNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。Pm CDK2基因全长1 679 bp,包括编码306个氨基酸的921 bp的开放阅读框(ORF),258 bp的5'UTR和500 bp的3'UTR。同源性分析显示,Pm CDK2与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)等物种的CDK2具有较高的同源性。使用荧光定量PCR技术研究了Pm CDK2的mRNA在不同组织和卵巢发育各时期的相对表达量和变化模式,结果显示,Pm CDK2在斑节对虾的脑、心、淋巴、肝胰腺、性腺等组织中均有表达,其中精巢中表达量显著高于其他组织;卵巢发育阶段表达分析则显示Pm CDK2在Ⅲ期表达量最高,其次是Ⅳ期。通过原核表达技术成功获得了含有6个His标签的融合蛋白,并对融合蛋白进行Western Blot试验,初步探讨了重组蛋白表达情况。结果表明,Pm CDK2基因在斑节对虾卵巢发育过程中可能发挥了重要作用,该结果对进一步探究斑节对虾卵巢发育机理提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 斑节对虾 cdk2 实时荧光定量PCR 原核表达 卵巢发育
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VES抑制Raji细胞增殖中对CDK2和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响 被引量：7
10
作者 肖浩文 叶建锋 +1 位作者 欧程山 高宁 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-3,共3页
目的　比较观察维生素E琥珀酸酯 (VES)和维生素E(VE)对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期素依赖性激酶 2 (CDK2 ) ,细胞凋亡相关蛋白Bcl- 2、Bax的影响。方法　应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方... 目的　比较观察维生素E琥珀酸酯 (VES)和维生素E(VE)对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期素依赖性激酶 2 (CDK2 ) ,细胞凋亡相关蛋白Bcl- 2、Bax的影响。方法　应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法 ,体外观察VES和VE对Raji细胞的作用。结果　VES和VE对Raji细胞均有程度不一的生长抑制作用 ,2 0 μg/mlVES对Raji细胞的生长抑制在 72h即达 10 0 % ,而 2 0 μg/mlVE的抑制率仅与 5 μg/mlVES的接近。VES较强的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生 ,具有剂量效应和时间效应关系 ,同时VES作用后 ,细胞内CDK2蛋白 ,Bcl- 2蛋白表达下降 ,Bax蛋白表达增加。结论　VES通过影响细胞周期调控因子CDK2 ,细胞凋亡相关蛋白Bcl- 2。 展开更多
关键词 维生素E琥珀酸酯 RAJI细胞 cdk2 BCL-2 BAX 白血病
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增生性瘢痕成纤维细胞中CyclinD1,CDK2,CDK4作用及与细胞周期的相关性 被引量：9
11
作者 金文虎 王达利 +2 位作者 聂开瑜 唐红梅 魏在荣 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第24期4422-4426,共5页
背景:增生性瘢痕的发生和发展可能与细胞周期调节相关基因的异常表达有关。目的:检测增生性瘢痕不同阶段细胞CyclinD1、CDK2和CDK4 mRNA及蛋白的表达,以及同一标本增生性瘢痕成纤维细胞的细胞周期运行中3者之间的一致性。方法:采集32份... 背景:增生性瘢痕的发生和发展可能与细胞周期调节相关基因的异常表达有关。目的:检测增生性瘢痕不同阶段细胞CyclinD1、CDK2和CDK4 mRNA及蛋白的表达,以及同一标本增生性瘢痕成纤维细胞的细胞周期运行中3者之间的一致性。方法:采集32份增生性瘢痕标本,以增生性瘢痕形成时段分为3个月组、6个月组、1年组、2年组,各8份,并以8份正常真皮标本作为对照。利用实时荧光定量PCR法、Western blotting法检测标本中CyclinD1、CDK2、CDK4 mRNA及蛋白表达,流式细胞术检测成纤维细胞的细胞周期。结果与结论:增生性瘢痕标本发展过程中CyclinD1、CDK2、CDK4 mRNA及蛋白表达水平由强至弱变化。3,6个月增生性瘢痕中成纤维细胞主要分布在S、G2/M期;1,2年增生性瘢痕与对照组成纤维细胞多处于G0/G1期。表明增生性瘢痕不同时期CyclinD1、CDK2、CDK4各自的mRNA和蛋白表达趋势基本一致,同时增生性瘢痕中成纤维细胞的细胞周期分布与这3个蛋白所执行的功能情况相对应。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 CYCLIND1 cdk2 CDK4 细胞周期 成纤维细胞
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胃癌中Cdk2和p21的表达及其与临床病理和预后的关系 被引量：9
12
作者 刘雷 陈国昌 +2 位作者 宋振云 郜恒骏 陈卫昌 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第17期2045-2047,F0002,共4页
目的研究Cdk2和p21在胃癌中的表达及其与临床病理和预后的关系。方法将130例胃癌组织和248例癌旁胃组织标本石蜡块制成组织芯片,采用免疫组化法检测Cdk2及p21的表达。结果胃癌组织组Cdk2及p21阳性表达率分别为63.8%(83/130)和70.0%(91/1... 目的研究Cdk2和p21在胃癌中的表达及其与临床病理和预后的关系。方法将130例胃癌组织和248例癌旁胃组织标本石蜡块制成组织芯片,采用免疫组化法检测Cdk2及p21的表达。结果胃癌组织组Cdk2及p21阳性表达率分别为63.8%(83/130)和70.0%(91/130),明显高于癌旁组织的18.1%(45/248)和37.1%(92/248)(P<0.05)。p21的阳性表达与胃癌的分化程度有关,Cdk2的阳性表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。p21阳性表达组5年生存率低于阴性表达组。多因素分析显示,Cdk2和p21的表达可作为胃癌独立的预后因素。结论 Cdk2及p21在胃癌的发生、发展中可能起重要作用,可作为判断胃癌预后的指标。 展开更多
关键词 胃癌 cdk2 P21
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Runx3、Smad4、Cdk2、p21在胃癌中的表达及其临床意义 被引量：10
13
作者 刘雷 陈国昌 +2 位作者 宋振云 郜恒骏 陈卫昌 《胃肠病学》 2015年第10期597-601,共5页
背景:近年来,组织芯片技术已越来越多地应用于恶性肿瘤相关研究。TGF-β信号通路在恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。目的:应用组织芯片技术研究TGF-β信号通路相关分子Runx3、Smad4、Cdk2、p21在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征... 背景:近年来,组织芯片技术已越来越多地应用于恶性肿瘤相关研究。TGF-β信号通路在恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。目的:应用组织芯片技术研究TGF-β信号通路相关分子Runx3、Smad4、Cdk2、p21在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法:收集130例行胃癌根治术患者的癌组织(n=130)癌旁组织(n=248)标本石蜡块,制成组织芯片,以免疫组化方法检测Runx3、Smad4、Cdk2、p21表达。结果:胃癌组织Runx3、Smad4、Cdk2、p21异常表达率分别为67.7%、35.4%、63.8%和70.0%,分别显著高于癌旁组织的14.1%、12.5%、18.1%和37.1%(P<0.05)。Runx3异常表达与胃癌组织学分型和淋巴结转移有关(P<0.05),Smad4和p21异常表达仅与胃癌组织学分型有关(P<0.05),Cdk2异常表达与胃癌组织学分型、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05)。除Cdk2仅与Runx3相关外,Runx3、Smad4、p21在胃癌中的异常表达两两相关。Kaplan-Meier生存分析显示,Runx3、Smad4、p21异常表达组5年生存率分别显著低于相应正常表达组(P<0.05);Cox比例风险模型显示Runx3和Smad4为胃癌患者的独立预后因素。结论:Runx3、Smad4、Cdk2、p21可能在胃癌的发生、发展中起一定作用。由于四者间存在相互影响,Runx3和Smad4能否作为判断胃癌预后的指标尚待进一步研究。 展开更多
关键词 组织芯片 胃肿瘤 预后 RUNX3 SMAD4 cdk2 P21
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PET32a-CDK2重组质粒的构建与表达 被引量：5
14
作者 黄宪章 张战锋 +2 位作者 陈炜烨 何敏 庄俊华 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期681-684,共4页
目的构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白。方法从人白细胞中提取总RNA,采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行... 目的构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白。方法从人白细胞中提取总RNA,采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将克隆得到的PET32a-CDK2重组质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果菌落PCR及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出52 kD左右的蛋白。结论成功构建重组质粒,并且CDK2全长蛋白在原核表达菌BL21中成功表达。 展开更多
关键词 cdk2 重组质粒 原核表达
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瑞香狼毒药效组分诱导人肝癌细胞凋亡及对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的影响 被引量：6
15
作者 潘国凤 杨庆 +4 位作者 刘安 翁小刚 李玉洁 刘晓霓 朱晓新 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期41-45,共5页
目的:探讨瑞香狼毒药效组分Zp1111对人肝癌细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用及机制。方法:MTT法比较瑞香狼毒药效组分Zp1111对体外培养的人来源肝癌细胞与正常肝细胞LO2抑制作用,采用流式细胞术检测用药前后BEL-7402细胞凋亡的变化并分析Zp... 目的:探讨瑞香狼毒药效组分Zp1111对人肝癌细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用及机制。方法:MTT法比较瑞香狼毒药效组分Zp1111对体外培养的人来源肝癌细胞与正常肝细胞LO2抑制作用,采用流式细胞术检测用药前后BEL-7402细胞凋亡的变化并分析Zp1111对DNA周期分布的影响,荧光共振能量转移法检测Zp1111对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的抑制作用。结果:Zp1111对体外培养的肝癌细胞HepG2、BEL-7402、SMMC-7721均有较好的抑制作用,IC50分别为37.75μg/ml、28.60μg/ml、29.22μg/ml,而对正常肝细胞LO2抑制作用不明显,在25μg/ml及以下的浓度对LO2细胞反而有一定促进作用。Zp1111能诱导BEL-7402细胞发生凋亡,一定药物浓度范围内凋亡率具有药物浓度依赖关系;Zp1111还能调控体外培养的BEL-7402细胞周期分布,显著下调S期的细胞比例,并且对CDK2具有较好的抑制作用。结论:瑞香狼毒药效组分Zp1111具有一定诱导凋亡作用,可使BEL-7402细胞周期阻滞在G1期,其作用机制可能与抑制CDK2有关。 展开更多
关键词 瑞香狼毒 细胞凋亡 细胞周期 cdk2
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CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文) 被引量：3
16
作者 刘琦 罗阳 +3 位作者 姜莉 周伟强 满晓辉 张学 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期444-448,共5页
应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠... 应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。 展开更多
关键词 cdk2 入核转运 增强型绿色荧光蛋白 质粒 转染
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CDK2-AP1基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖及周期的影响 被引量：4
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作者 关晓燕 周卫兵 +2 位作者 黄隽 王龙云 廖遇平 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期990-996,共7页
目的:通过过表达手段上调细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白1(CDK2-AP1)基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,并观察其对MCF-7细胞生长和细胞周期调控的作用。方法:将CDK2-AP1基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MCF-7细胞,应用实时定... 目的:通过过表达手段上调细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白1(CDK2-AP1)基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,并观察其对MCF-7细胞生长和细胞周期调控的作用。方法:将CDK2-AP1基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MCF-7细胞,应用实时定量PCR和Western印迹验证CDK2-AP1基因mRNA和蛋白的表达效率。利用MTT法绘制生长曲线、克隆形成实验观察CDK2-AP1基因过表达后MCF-7细胞生长的变化,PI染色流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的改变。通过Western印迹检测CDK2-AP1过表达后,细胞周期相关蛋白(CDK2,CDK4,P16Ink4A,P21Cip1/Waf1)的表达。结果:过表达CDK2-AP1基因的慢病毒感染MCF-7细胞可上调其mRNA表达6.94倍,蛋白表达也十分显著地增高,两者相一致。生长曲线显示MCF-7细胞过表达CDK2-AP1基因后,增殖能力显著降低(P<0.05);克隆形成实验表明,其形成的克隆数目同样显著减少(P<0.05);流式细胞仪检测证实MCF-7细胞过表达CDK2-AP1能够使细胞周期出现G1期阻滞,并且出现凋亡峰;CDK2-AP1基因表达上调导致P21Cip1/Waf1和P16Ink4A蛋白表达上调,CDK2和CDK4蛋白表达下调。结论:CDK2-AP1基因具有抑癌基因的功能,在乳腺癌MCF-7细胞过表达该基因能够抑制细胞的生长和克隆形成能力,并且使细胞阻滞于G1期。 展开更多
关键词 cdk2-AP1 过表达 增殖 细胞周期
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血管内皮生长因子及其受体与Cyclin E-CDK2在肝癌发生发展过程中的表达变化 被引量：3
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作者 王东 李笑岩 +1 位作者 李红星 白咸勇 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期310-315,共6页
目的通过观察血管内皮生长因子(VEGF)及其受体和细胞周期蛋白E(Cyclin E)在肝癌模型大鼠肝脏中表达情况,探讨VEGF与细胞周期相关蛋白在肝癌发生发展过程中的作用。方法建立诱发性肝癌模型,采用酶联免疫吸附试验检测血清中VEGF量的变化,... 目的通过观察血管内皮生长因子(VEGF)及其受体和细胞周期蛋白E(Cyclin E)在肝癌模型大鼠肝脏中表达情况,探讨VEGF与细胞周期相关蛋白在肝癌发生发展过程中的作用。方法建立诱发性肝癌模型,采用酶联免疫吸附试验检测血清中VEGF量的变化,免疫组化技术检测VEGFR1、Cyclin E和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)的表达情况。结果血清中的VEGF含量在对照组中最低,在实验组中逐渐增多,以癌变期含量最高。VEGFR1、Cyclin E和CDK2蛋白表达的平均光密度值均随着肝癌的发生发展有增高的趋势,大鼠血清中的VEGF量与肝脏组织中VEGFR1、Cyclin E和CDK2蛋白表达的平均光密度值随着肝癌的发生发展呈正相关(r=0.834,F=42.1274,P<0.05)。结论 VEGF及其受体VEGFR1在肝癌发生发展中异常表达,促进肝癌的发生发展,可能与Cyclin E、CDK2细胞周期蛋白异常表达有关。 展开更多
关键词 诱发性肝癌 VEGF VEGFR1 CYCLIN E cdk2
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慢病毒载体介导CDK2基因沉默对黑素瘤B16-F1细胞生物学行为的影响 被引量：3
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作者 晋佳路 朱仁书 +1 位作者 谢育媛 刘红春 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期243-249,共7页
目的:探讨由慢病毒载体p UL介导的p UL-CDK2-shRNA3(CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制。方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI... 目的:探讨由慢病毒载体p UL介导的p UL-CDK2-shRNA3(CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制。方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI染色、Annexin V-FITC/PI双染流式术检测细胞凋亡情况,流式术检测细胞周期变化,细胞黏附实验、transwell小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞周期信号通路上RB蛋白(成视网膜细胞瘤蛋白)、pRB蛋白、细胞周期相关转录因子E2F1及侵袭迁移相关蛋白基质金属酶-2(MMP-2)、基质金属酶-9(MMP-9)的表达水平。结果:与空白对照组和阴性对照组相比,CDK2-shRNA组细胞相对增殖率、细胞黏附率、细胞侵袭和迁移能力均显著下降(均P<0.05)。细胞凋亡率显著增加(均P<0.05);G1期细胞显著增加而S期和G2期显著降低(P<0.05)。细胞周期相关蛋白pRB、E2F1明显降低而RB显著升高(P<0.05),细胞侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9明显降低(P<0.05)。结论:慢病毒载体p UL介导的shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞恶性生物学行为有显著的抑制作用,其机制主要与细胞周期和细胞侵袭迁移相关蛋白表达变化有关。 展开更多
关键词 黑素瘤 B16-F1细胞 cdk2基因 sh-RNA 恶性生物学行为 机制
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