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外泌体递送CRISPR/Cas系统在靶细胞内可实现基因编辑
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作者 王白燕 杨树 +5 位作者 王弋鸣 吴梦晴 肖瑀 郭梓璇 张博艺 冯书营 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第7期1839-1849,共11页
背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送... 背景:CRISPR/Cas基因编辑系统具有精准基因编辑、靶向设计简单、低成本以及高效率等特性,已被广泛应用于科学研究和相关临床治疗。然而,CRISPR/Cas系统如何更安全、更高效、更精准地递送到靶细胞内,仍是一个急需解决的难题。目的:从递送CRISPR/Cas系统的外泌体来源及工程化策略、外泌体对CRISPR/Cas系统的装载方法、CRISPR/Cas系统的生物形式及其在细胞内的作用途径等方面进行全方面综述,为该领域的研究者提供更直观、更系统的视角。方法:以“exosome,drug delivery systems,delivery,CRISPR/Cas,gene editing,engineered exosomes,targeting”为英文检索词,以“外泌体,药物递送,CRISPR/Cas,工程化”为中文检索词,分别检索Pub Med数据库及中国知网,检索时限为2014-2024年。通过仔细阅读文献的标题和摘要进行初步筛选,排除研究内容相关性差及内容重复的文献,最终纳入了78篇文献进行归纳和探讨。结果与结论:(1)外泌体是一种直径30-150 nm的脂质囊泡,具有循环半衰期长、靶向组织的内在能力、良好的生物相容性以及较小的固有毒性等优势,显现出强大的靶向递送能力;(2)CRISPR/Cas系统虽是一种强大的基因编辑工具,然而现有的CRISPR/Cas系统递送载体各有利弊,无法完全满足需求;(3)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要来源于高产外泌体的细胞或组织,但研究者们依然需要根据研究所需进行选择或进一步工程化;(4)递送CRISPR/Cas系统的外泌体主要通过基因工程修饰、化学修饰、外泌体-脂质体杂交等策略实现工程化;(5)外泌体装载CRISPR/Cas系统的方法包括电穿孔、孵育、转染和主动装载途径等,选择合适的装载方法取决于CRISPR/Cas系统的理化性质;(6)外泌体递送CRISPR/Cas系统的生物形式包括质粒和核糖核蛋白复合体,两种形式各具特点,成功递送的CRISPR/Cas系统在靶细胞内实现基因编辑。 展开更多
关键词 外泌体 CRISPR/Cas系统 基因编辑 药物负载 靶向递送 工程化
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零改造的认证迁移方案设计与实现——以中山大学为例
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作者 王旭 许桂满 关伟豪 《现代信息科技》 2026年第3期122-126,132,共6页
文章提出一种基于网关的零改造认证迁移方案,旨在解决复杂系统环境下向新商用认证平台平滑升级的难题。其核心在于通过服务网关动态路由作为枢纽,适配CAS协议请求,结合白名单机制将流量逐步从旧认证系统切换至新商用认证平台,同时利用统... 文章提出一种基于网关的零改造认证迁移方案,旨在解决复杂系统环境下向新商用认证平台平滑升级的难题。其核心在于通过服务网关动态路由作为枢纽,适配CAS协议请求,结合白名单机制将流量逐步从旧认证系统切换至新商用认证平台,同时利用统一LDAP目录服务实现新旧系统的认证。通过多副本网关部署、灰度流量切换和完备回滚机制,确保用户无感知迁移,将业务系统逐步引入新的认证平台。该方案具有普适性,为高校认证系统升级提供了可复用的技术框架,显著降低了迁移成本和业务风险。 展开更多
关键词 CAS认证 服务网关 单点登录 LDAP协议
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复方斑蝥胶囊联合替吉奥+奥沙利铂治疗Ⅲ~Ⅳ期胃癌的疗效观察
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作者 韩雪 田春阳 孙燕 《实用癌症杂志》 2026年第2期281-284,共4页
目的探究复方斑蝥胶囊联合SOX方案对Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者的疗效及其对患者血清CA724水平及免疫功能的影响。方法采用随机数字表法将Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者(120例)分为对照组(60例,SOX方案)和治疗组(60例,复方斑蝥胶囊联合SOX方案)。比较两组疗效... 目的探究复方斑蝥胶囊联合SOX方案对Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者的疗效及其对患者血清CA724水平及免疫功能的影响。方法采用随机数字表法将Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者(120例)分为对照组(60例,SOX方案)和治疗组(60例,复方斑蝥胶囊联合SOX方案)。比较两组疗效、血清CA724水平及免疫功能。结果治疗组DCR(71.67%)明显高于对照组(53.33%)(P<0.05)。治疗后,两组CA724水平[(48.50±5.02)U/ml、(41.46±4.23)U/ml]、CA19-9水平[(50.66±5.60)U/ml、(41.58±5.42)U/ml]、CEA水平[(20.04±2.25)μg/ml、(17.15±2.04)μg/ml]及CD8^(+)水平均较治疗前[(60.22±6.48)U/ml、(61.30±6.27)U/ml、(82.14±7.56)U/ml、(81.51±7.99)U/ml、(25.62±3.01)μg/ml、(25.80±3.12)μg/ml]下降,且治疗组优于对照组(P<0.05);两组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、KPS评分均较治疗前升高,且治疗组较对照组升高。结论复方斑蝥胶囊联合SOX方案可有效提高Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者免疫功能、改善生存质量,降低血清肿瘤标志物水平,安全性好,效果显著。 展开更多
关键词 Ⅲ~Ⅳ期胃癌 SOX方案 复方斑蝥胶囊 CA724 免疫功能
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膀胱癌患者血清CEA、CA19-9、β2-MG水平与预后的相关性分析
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作者 孟佳丽 林海 孟伟 《医学临床研究》 2026年第1期69-72,共4页
【目的】探讨膀胱癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平与患者预后的相关性。【方法】检测106例膀胱癌患者(观察组),85例体检健康者(对照组)的血清CEA、CA19-9、β2-MG水平,分析其与膀胱癌患者预... 【目的】探讨膀胱癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)和β2-微球蛋白(β2-MG)水平与患者预后的相关性。【方法】检测106例膀胱癌患者(观察组),85例体检健康者(对照组)的血清CEA、CA19-9、β2-MG水平,分析其与膀胱癌患者预后的关系及患者死亡的危险因素。【结果】观察组术前、术后的CEA、CA19-9、β2-MG水平高于对照组,且观察组患者术前CEA、CA19-9、β2-MG水平高于术后(均P<0.05)。随访36个月,106例膀胱癌患者中63例存活(生存组),43例死亡(死亡组)。死亡组TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化的比例,以及CEA、CA19-9、β2-MG表达水平均高于生存组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化,CEA、CA19-9、β2-MG高表达均是膀胱癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。CEA、CA19-9、β2-MG高表达组的3年生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。【结论】膀胱癌患者血清CEA、CA19-9、β2-MG水平与患者的预后密切相关,其可作为预测膀胱癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 癌胚抗原 CA19-9抗原 Β2微球蛋白 预后
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国际体育仲裁案件可受理性的多维解构与理论形塑
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作者 向会英 《上海体育大学学报》 北大核心 2026年第2期1-13,共13页
可受理性在国际体育仲裁中具有独立价值,其对强制程序扩张的控制作用至关重要。尽管学界对其概念范畴界定存在分歧,但国际体育仲裁实践已建立了较为完善的适用规则。通过案例分析、比较研究等方法解析其概念内涵,系统化探讨其实践判例... 可受理性在国际体育仲裁中具有独立价值,其对强制程序扩张的控制作用至关重要。尽管学界对其概念范畴界定存在分歧,但国际体育仲裁实践已建立了较为完善的适用规则。通过案例分析、比较研究等方法解析其概念内涵,系统化探讨其实践判例并剖析难点问题,进而揭示其理论基础。结果发现:国际体育仲裁案件可受理性区别于管辖权与可仲裁性以及商事仲裁的可受理性,具有独特属性;不可受理事由主要包括逾期上诉、未用尽内部救济、无可上诉决定及无效申请;实践难点源于“可上诉决定”“用尽内部救济”与可受理性和管辖权的双重关系;其理论基础融合程序正义理论、仲裁自治理论及体育行业自治需求,形成独特逻辑构架。 展开更多
关键词 体育仲裁 可受理性 解构 国际体育仲裁院 仲裁实践
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复杂适应系统视角下高校学科专业调整优化的机制与路径
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作者 尹怡 毛国羽 《重庆高教研究》 北大核心 2026年第2期65-76,共12页
面对《教育强国建设规划纲要(2024—2035年)》提出的战略要求,我国高校学科专业调整亟待破解适应性滞后困境。以复杂适应系统理论为分析视角,揭示学科专业调整优化的核心在于有效响应由结构性需求、异质性需求与前沿性需求构成的多维需... 面对《教育强国建设规划纲要(2024—2035年)》提出的战略要求,我国高校学科专业调整亟待破解适应性滞后困境。以复杂适应系统理论为分析视角,揭示学科专业调整优化的核心在于有效响应由结构性需求、异质性需求与前沿性需求构成的多维需求系统,并弥合由此衍生的结构适配缺口、跨界协同缺口与前沿进化缺口。围绕三大缺口,构建“结构调适—边界整合—演化更新”三重优化机制,修复缺口、提升系统适应性。三重优化机制相互嵌套、协同联动,形成驱动学科专业调整持续优化的系统动力。高校应构建以敏捷适应为导向的学科调整模式,建立以价值共创为核心的评价激励机制,塑造以生态思维为基础的战略布局理念。 展开更多
关键词 复杂适应系统 学科专业结构 学科专业调整机制 优化机制
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报告噬菌体T6::Nluc的构建与诊断性能评估:一种快速检测大肠杆菌尿路感染的新方法 被引量:1
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作者 郝治云 赵强 +3 位作者 李民伟 李绵洋 王驰 王成彬 《陆军军医大学学报》 北大核心 2026年第2期147-157,共11页
目的 构建大肠杆菌特异性的报告噬菌体T6::Nluc,并评估其在尿路感染大肠杆菌快速诊断中的性能。方法 采用CRISPR/Cas9系统联合同源重组技术,构建报告噬菌体T6::Nluc。比较T6与T6::Nluc的最佳感染复数、一步生长曲线和裂解效率等生物学... 目的 构建大肠杆菌特异性的报告噬菌体T6::Nluc,并评估其在尿路感染大肠杆菌快速诊断中的性能。方法 采用CRISPR/Cas9系统联合同源重组技术,构建报告噬菌体T6::Nluc。比较T6与T6::Nluc的最佳感染复数、一步生长曲线和裂解效率等生物学特性。通过测定时间-发光曲线,确认T6::Nluc的检测限、尿液基质对检测的影响。将T6::Nluc与非大肠杆菌病原菌共培养后测定发光信号,探究检测特异性。从临床收集104株尿液分离的大肠杆菌,分析T6::Nluc的检测覆盖率。收集437例临床尿液样本进行临床检测验证。结果 T6::Nluc构建成功,其一步生长曲线、最佳感染复数与T6存在差异,但裂解效率相似。T6::Nluc可在40 min内检出≥10~4 CFU/mL的大肠杆菌标准菌株BL21,不受尿液基质影响,且表现出高度的检测特异性,可检出104株临床尿液大肠杆菌分离株中的51株(49.04%),在临床尿液样本中的检测灵敏度为48.84%,特异度为100.00。结论 成功构建了报告噬菌体T6::Nluc,并且可以灵敏、特异地检出尿路感染大肠杆菌,显著缩短了检测时间,有效提升了检测效率与准确性。 展开更多
关键词 报告噬菌体 大肠杆菌 尿路感染 CRISPR/Cas9 病原菌检测
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石灰消化制备高比表面氢氧化钙及其铅吸附性能研究
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作者 陈建军 李力 +5 位作者 刘来宝 张岱宇 姜晨曦 竹含真 王辅 廖其龙 《无机盐工业》 北大核心 2026年第1期99-106,共8页
为探究不同烷醇胺改性剂对Ca(OH)_(2)理化性质和微观结构的影响,以及所制备的高比表面积Ca(OH)_(2)对铅吸附性能的影响,分别以三异丙醇胺(TIPA)、二乙醇单异丙醇胺(DEIPA)、三乙醇胺(TEA)为改性剂,生石灰为原料,采用消化法制备出片层状... 为探究不同烷醇胺改性剂对Ca(OH)_(2)理化性质和微观结构的影响,以及所制备的高比表面积Ca(OH)_(2)对铅吸附性能的影响,分别以三异丙醇胺(TIPA)、二乙醇单异丙醇胺(DEIPA)、三乙醇胺(TEA)为改性剂,生石灰为原料,采用消化法制备出片层状、高比表面积氢氧化钙,将其应用于含铅废水的处理。利用X射线衍射仪、高真空气体吸附分析仪、激光粒度仪、场发射扫描电镜对制备的Ca(OH)_(2)进行表征分析,结果表明,以TEA为改性剂获得的片层状Ca(OH)_(2)性能最佳,其比表面积、孔体积和平均孔径分别为53.94 m^(2)/g、0.208 cm^(3)/g和11.66 nm。同时,揭示高比表面积片层状Ca(OH)_(2)可能的形成机理。此外,Ca(OH)_(2)对铅的吸附过程更符合Langmuir模型(R^(2)=0.992 5)和准二级动力学模型(R^(2)=0.999 7),主要是以化学吸附为主的单分子吸附过程,同时伴随着少量物理吸附,其对水中铅的吸附率达99.54%,残留铅的质量浓度≤0.46 mg/L,远低于排放限值,证实烷醇胺改性Ca(OH)_(2)在含铅废水处理方面有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 高比表面积Ca(OH)_(2) 石灰消化 吸附铅 烷醇胺改性剂
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基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析
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作者 杜鹏飞 彭听雨 +3 位作者 范双旗 郑海学 朱紫祥 陈金顶 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期161-167,共7页
利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRI... 利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRISPR v2)连接。随后将构建成功的慢病毒载体与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率,然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明,本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系,并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6表达的上调,为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。 展开更多
关键词 GRSF1 PK-15 CRISPR/Cas9 基因敲除
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猪源TRAF3基因编辑细胞系的构建及缺失表型研究
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作者 邵文华 杨帆 +6 位作者 曹伟军 陈创伟 王伟 郑海学 张伟 朱紫祥 赵宗胜 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期33-39,共7页
本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TRAF3基因敲除的PK-15细胞模型,该模型为阐明TRAF3在口蹄疫病毒(FMDV)复制中的调控作用提供试验材料。针对猪TRAF3基因的编码区序列,设计并筛选出2条高效特异的单向导RNA(sgRNA),并将其分别克隆至CRISPR... 本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TRAF3基因敲除的PK-15细胞模型,该模型为阐明TRAF3在口蹄疫病毒(FMDV)复制中的调控作用提供试验材料。针对猪TRAF3基因的编码区序列,设计并筛选出2条高效特异的单向导RNA(sgRNA),并将其分别克隆至CRISPR/Cas9载体pX459中。通过脂质体介导的转染技术将重组质粒导入PK-15细胞后,采用嘌呤霉素梯度筛选和有限稀释法相结合的策略,成功获得单克隆细胞系。采用DNA测序结合蛋白质免疫印迹技术对构建的细胞系进行验证,结果显示,TRAF3基因存在特异性碱基缺失突变,且未检测到相应蛋白表达,由此确认TRAF3基因敲除细胞模型构建成功。为探究该基因缺失对FMDV复制的调控作用,通过Western-blot、实时定量PCR(RT-qPCR)及半数组织培养感染剂量(TCID_(50))等多维度检测发现,TRAF3基因的稳定敲除可增强FMDV的复制能力。本研究结果不仅为阐明TRAF3的生物学功能提供了工具细胞系,更为后续研究该基因在病毒-宿主相互作用中的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 TNF受体关联蛋白3 细胞系 口蹄疫病毒
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利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻新种质
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作者 潘月云 黄雨青 +3 位作者 丁正权 施扬 黄海祥 李白 《浙江农业学报》 北大核心 2026年第1期17-23,共7页
稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger... 稻米直链淀粉含量直接影响其蒸煮食味品质,该性状主要由Waxy(Wx)基因控制。本研究基于Wx基因上SNP的表型关联分析,选择其第3、第4外显子设计编辑靶点。利用CRISPR/Cas9技术,以水稻品种嘉禾香1号为受体,对Wx基因进行编辑。经PCR与Sanger测序验证,获得4个不同类型的双位点纯合突变体。4个双位点纯合T 2代突变体株系的稻米均呈蜡质状,其直链淀粉含量由野生型的16.9%降至0.83%~1.23%,达到糯稻水平。结果表明,利用CRISPR/Cas9技术可快速创制优质香糯型水稻种质资源。 展开更多
关键词 水稻 WX基因 CRISPR/Cas9 直链淀粉
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生长抑素信号通过抑制软骨内骨化来调节骨量
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作者 刘璐 于茜 +1 位作者 袁辉明 陈洁 《生物学杂志》 北大核心 2026年第1期79-85,共7页
生长抑素(somatostatin, SST)是一种功能多样的肽,也是内分泌生长轴中的一类十分重要的调控因子,具有广泛的内分泌和外分泌功能,一些证据表明生长抑素(SST)可能在骨生理学中发挥作用。本研究旨在探究生长抑素信号通路在斑马鱼骨骼发育... 生长抑素(somatostatin, SST)是一种功能多样的肽,也是内分泌生长轴中的一类十分重要的调控因子,具有广泛的内分泌和外分泌功能,一些证据表明生长抑素(SST)可能在骨生理学中发挥作用。本研究旨在探究生长抑素信号通路在斑马鱼骨骼发育中的调控作用。通过Somatostatin1.2(sst1.2)基因敲除的斑马鱼模型,综合运用阿利新蓝软骨染色、茜素红硬骨染色、微型CT扫描、钙黄绿素标记以及关键成骨基因表达分析等多重技术手段评估SST信号对骨骼发育的影响。实验结果显示,sst1.2缺失未显著影响软骨发育和脊柱的膜内骨化过程,但使得斑马鱼突变体头骨骨量明显增加;鳞片发育未受干扰;组织学分析和成骨基因表达证实骨量增加源于软骨内骨化增强。以上结果揭示了在斑马鱼成骨过程中,SST信号通过抑制斑马鱼软骨内骨化进而调节骨量。这可为深入解析鱼类骨骼发育提供新的理论基础,也为建立更精准的骨骼发育异常疾病模型(如骨代谢障碍性疾病)开辟新思路。 展开更多
关键词 生长抑素 骨量 软骨内骨化 斑马鱼 CRISPR/Cas9
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基于导管消融术治疗房颤的治疗型医疗器械经济性评估
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作者 廖博玮 胡敏 +1 位作者 解君 陈文 《中国医学装备》 2026年第1期95-100,共6页
目的:通过评估导管消融(CA)术治疗房颤的经济价值,分析治疗型医疗器械经济价值评估的可行性。方法:检索中国知网(CNKI)、万方及美国Pubmed、英国Cochrane、荷兰Embase和我国SinoMed等中英文数据库中CA术治疗房颤的相关文献,关键词限定... 目的:通过评估导管消融(CA)术治疗房颤的经济价值,分析治疗型医疗器械经济价值评估的可行性。方法:检索中国知网(CNKI)、万方及美国Pubmed、英国Cochrane、荷兰Embase和我国SinoMed等中英文数据库中CA术治疗房颤的相关文献,关键词限定为中文和英文,文献检索时间为2015年1月至2025年1月,分析国内外已有CA术经济学评价对我国当前CA术治疗房颤决策实践的可参考性,并基于离散事件模拟(DES)模型,从我国卫生体系视角,对主流CA术治疗房颤的治疗型医疗器械经济性进行评估。结果:共检索出CA术治疗房颤的相关研究文献35篇,排除非经济性评估研究等,最终筛选出15篇文献进行CA术治疗房颤的经济学评价。CA术相比抗心律失常药物(AADs)是一种具有成本效果的房颤治疗方式,使用thermocool smarttouch导管联合消融指数技术(STAI)进行射频消融(RFCA)和二代冷冻球囊消融(CB-2)与AADs是我国当下主流的消融技术。结论:使用RFCA相比AADs治疗房颤和冷冻球囊消融技术(CB-2)更具有经济性。治疗型医疗器械的经济价值评估具有“环境特异性”和“较短保质期”,当外部环境未能反映当前支付制度、价格水平及临床应用模式时,需针对当下决策环境,选择可靠的研究方法重新开展经济性研究,以保证评估结果的可靠性和适用性。 展开更多
关键词 治疗型医疗器械 经济性评价 导管消融(CA) 房颤 参考性
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POP基因敲除PK-15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响
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作者 卢炳州 李建斌 +10 位作者 王姿逸 杨洋 赵陇和 李亚军 刘华南 李明桂 马坤 郑海学 郭建宏 茹毅 郝荣增 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期27-32,共6页
为探索脯氨酰寡肽酶(POP)缺失对口蹄疫病毒(FMDV)增殖的影响,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过慢病毒包装、嘌呤霉素筛选及有限稀释法单克隆培养,构建POP基因敲除的PK-15细胞系(POP-KO),并以野生型PK-15(WT-PK-15)细胞为对照,接种FMDV... 为探索脯氨酰寡肽酶(POP)缺失对口蹄疫病毒(FMDV)增殖的影响,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过慢病毒包装、嘌呤霉素筛选及有限稀释法单克隆培养,构建POP基因敲除的PK-15细胞系(POP-KO),并以野生型PK-15(WT-PK-15)细胞为对照,接种FMDV后采用实时荧光定量RT-PCR检测FMDV RNA水平,通过Western-blot分析病毒结构蛋白VP1表达量及病毒滴度测定(TCID50)方法综合评估POP缺失对FMDV增殖的影响。结果表明,与WT-PK-15细胞相比,POP-KO细胞中VP1蛋白表达水平显著降低(P<0.001),病毒滴度降低了1.24 lg TCID50/m L(P<0.001),FMDV RNA拷贝数显著低于对照细胞(P<0.001)。本研究成功建立了POP基因敲除的PK-15细胞系,证实POP缺失可显著抑制FMDV的增殖,揭示POP是FMDV复制的关键宿主促进因子。 展开更多
关键词 脯氨酰寡肽酶 CRISPR/Cas9 基因敲除 口蹄疫病毒 病毒增殖
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pcolcea和pcolceb基因在斑马鱼骨骼发育中的功能分化
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作者 王文秀 陈宇龙 +2 位作者 肖正雨 高泽霞 聂春红 《水产学报》 北大核心 2026年第1期22-33,共12页
【目的】探究硬骨鱼类前胶原蛋白酶增强因子(PCOLCE)的2种亚型(pcolcea和pcolceb)在斑马鱼骨骼发育中的作用。【方法】采用生物信息学分析、原位杂交、荧光定量PCR、CRISPR/Cas9基因编辑及显微型计算机断层扫描等分析技术和实验手段以... 【目的】探究硬骨鱼类前胶原蛋白酶增强因子(PCOLCE)的2种亚型(pcolcea和pcolceb)在斑马鱼骨骼发育中的作用。【方法】采用生物信息学分析、原位杂交、荧光定量PCR、CRISPR/Cas9基因编辑及显微型计算机断层扫描等分析技术和实验手段以明确斑马鱼pcolcea和pcolceb基因的序列特征、蛋白结构、组织表达以及功能缺失对骨骼发育的影响。【结果】pcolcea和pcolceb基因主要在脊椎、头部和胸鳍表达。与野生型斑马鱼相比,pcolcea^(-/-)斑马鱼和pcolcea^(-/-);pcolceb^(-/-)双突变斑马鱼脊椎骨的密度显著降低,而pcolceb^(-/-)斑马鱼与野生型相比无显著性差异。在pcolcea^(-/-)突变体的尾部椎骨中,bmp1b、col1a1a、col1a2、runx2b、alpl、sp7基因的表达显著下调,在pcolcea^(-/-);pcolceb^(-/-)双突变体的尾部椎骨中,bmp1b、col1a1a、col1a1b、col1a2、runx2b、entpd5a、bglap、sp7基因的表达均显著低于野生型斑马鱼。【结论】pcolcea基因功能的丧失会影响斑马鱼骨骼组织的正常矿化,且pcolcea和pcolceb基因的同时缺失会显著加重该表型。本研究揭示了pcolcea和pcolceb在斑马鱼骨骼发育中的作用,为进一步研究鱼类骨骼发育的分子调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 斑马鱼 pcolcea pcolceb 骨骼发育 CRISPR/Cas9 基因表达
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弓形虫表面抗原相关序列蛋白Tgsrs51基因的生物学功能研究
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作者 肖淑婷 江新成 +3 位作者 王萌 邬向东 李谷月 陈小庆 《江西农业大学学报》 北大核心 2026年第1期196-207,共12页
【目的】弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,可感染包括人类在内的所有温血动物。目前,弓形虫病的治疗缺乏特效药物,传统药物治疗存在毒副作用大、疗效有限等问题。因此,开发安全有效的疫苗成为防控该病的重要策略。弓形虫表面抗原相关... 【目的】弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,可感染包括人类在内的所有温血动物。目前,弓形虫病的治疗缺乏特效药物,传统药物治疗存在毒副作用大、疗效有限等问题。因此,开发安全有效的疫苗成为防控该病的重要策略。弓形虫表面抗原相关序列蛋白(SRSs)在虫体的毒力、入侵与黏附、免疫调节等方面均发挥着关键作用。其中,SRS51蛋白(TGME49_308840)作为SRS家族成员之一,具体生物学功能尚不明确,具有潜在的研究价值。旨在探究弓形虫SRS51蛋白的生物学功能及作用机制,为开发安全有效的弓形虫疫苗提供参考依据。【方法】以弓形虫II型Pru株为研究对象,采用CRISPR-Cas9基因编辑和无缝克隆技术,构建Tgsrs51基因缺失株(PruΔsrs51),分别通过噬斑试验、细胞入侵与增殖试验、逸出试验、体外缓殖子转化试验以及小鼠毒力试验,系统评估弓形虫SRS51蛋白的生物学功能。【结果】Tgsrs51基因缺失后,弓形虫的噬斑面积和数量显著减少(P<0.000 1),降低了微线体蛋白MIC2的表达,入侵和胞内增殖能力明显下降(P<0.001),对小鼠的致病力也有所减弱(P<0.05),但不影响虫体的逸出能力和体外缓殖子转化(P>0.05)。【结论】SRS51蛋白缺失可显著削弱弓形虫的急性毒力及慢性包囊形成能力,可作为弓形虫弱毒疫苗候选基因。 展开更多
关键词 弓形虫 SRS51蛋白 CRISPR/Cas9 基因敲除 毒力
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基于改进YOLOv11s算法的风电叶片表面缺陷检测研究
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作者 姚运帅 李华新 +2 位作者 周长江 谭龙 李想 《轨道交通材料》 2026年第1期39-46,共8页
针对风电叶片复合材料表面存在非均匀纹理、环境光干扰以及微小缺陷的情况,提出一种改进的YOLOv11s算法进行风电叶片表面缺陷的检测。首先,在主干网络引入VoVGSCSP模块,以此提高对微小特征的提取能力;其次,分别在颈部网络和头部网络之间... 针对风电叶片复合材料表面存在非均匀纹理、环境光干扰以及微小缺陷的情况,提出一种改进的YOLOv11s算法进行风电叶片表面缺陷的检测。首先,在主干网络引入VoVGSCSP模块,以此提高对微小特征的提取能力;其次,分别在颈部网络和头部网络之间的3个分支引入CA(Coordinate Attention)注意力机制,更好地处理风电叶片表面缺陷之间的空间关系;然后,将CIoU(Complete IoU Loss)损失函数替换为MPDIoU(Minimum Point Distance Intersection over Union)损失函数,提升模型边界框的定位精度;最后,根据企业内部自制数据集,实验表明改进的YOLOv11s算法精确率平均提升5.51%,召回率平均提升5.92%,mAP@0.5平均提升7.22%,验证所提算法有效。 展开更多
关键词 风电叶片 表面缺陷检测 改进YOLOv11s VoVGSCSP CA注意力机制
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类食品乳杆菌LBM 12001基于CRISPR/Cas9技术多基因编辑平台的构建
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作者 黄宗潇 侯倩 +2 位作者 徐岩 黄卫宁 穆晓清 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第3期11-19,共9页
作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通... 作为传统发酵食品的核心功能菌株,类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台,以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通过优化质粒大小以及引入λ-Red重组酶辅助同源重组,构建了双质粒系统(pCRI01/pCRI02)。实验结果表明,该系统显著提升了转化效率[单基因敲除转化子达(63±11)个,阳性突变率75%],并实现了三基因同步敲除[转化子(57±8)个,突变率(46±7)%]。创新性整合BioBricks模块化组装、温度敏感型复制子及自靶向诱导型sgRNA技术,使多基因编辑周期缩短40%以上。该体系突破了传统方法的效率限制,成功实现多基因无痕编辑,为构建类食品乳杆菌高效细胞工厂提供了关键性技术支撑。 展开更多
关键词 类食品乳杆菌 CRISPR/Cas9 多基因编辑 λ-Red重组酶 BioBricks组装
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碱基编辑技术及其在斑马鱼中的开发应用
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作者 郑少辉 刘洋 +1 位作者 夏新欣 刘彦梅 《遗传》 北大核心 2026年第1期46-60,共15页
单核苷酸变异是人类遗传疾病的主要致病因素之一,在所有致病突变类型中占据显著比例。在动物模型中深入研究这类突变的致病意义对于理解疾病机制和开发治疗方法至关重要。而此类研究的进展在很大程度上依赖于基因编辑技术的不断创新与... 单核苷酸变异是人类遗传疾病的主要致病因素之一,在所有致病突变类型中占据显著比例。在动物模型中深入研究这类突变的致病意义对于理解疾病机制和开发治疗方法至关重要。而此类研究的进展在很大程度上依赖于基因编辑技术的不断创新与发展。近年来,基于CRISPR/Cas9系统的碱基编辑技术应运而生,它能够精确实现单个碱基的特异性转换。凭借其高效性和便捷性,碱基编辑技术已被广泛应用于基因治疗、动物模型构建以及分子育种等多个领域,为生命科学研究和医学应用带来了新的突破和机遇。另一方面,斑马鱼(Danio rerio)凭借其体型小、产卵多、胚胎透明、体外发育等优势,在疾病机制和药物筛选研究中作为一种理想的模式生物发挥着重要作用。本文系统综述了基于CRISPR/Cas9的碱基编辑技术的发展历程,介绍了新型编辑工具的开发,并深入探讨了碱基编辑技术在构建斑马鱼精准模型中的应用与发展。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 碱基编辑 斑马鱼 疾病模型
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玉米基因编辑技术研究进展
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作者 郭建华 李庭锋 刘慧迪 《现代化农业》 2026年第2期2-5,共4页
基因编辑技术在玉米育种中的应用取得了重大突破。文章综述了玉米基因编辑技术的研究进展,重点介绍了CRISPR/Cas9、基础编辑和质粒体编辑等新兴技术在玉米改良中的应用。讨论了玉米基因编辑技术面临的挑战,以及未来的发展方向。
关键词 玉米 基因编辑 CRISPR/Cas9 分子育种
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