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棉花线粒体基因cRT-PCR改良及其在寻找CMS相关基因中的应用 被引量：1
1
作者 王裴林 周利利 +3 位作者 梁成真 孟志刚 郭三堆 张锐 《生物技术进展》 2019年第3期303-308,共6页
植物线粒体是含有遗传物质的细胞器,为细胞生命活动提供必需的能量。农业生产中,线粒体基因的变异容易导致细胞质雄性不育,为作物杂交育种提供了高效的杂交母本。然而,植物线粒体基因组结构复杂,不同类型的细胞质雄性不育的发生往往由... 植物线粒体是含有遗传物质的细胞器,为细胞生命活动提供必需的能量。农业生产中,线粒体基因的变异容易导致细胞质雄性不育,为作物杂交育种提供了高效的杂交母本。然而,植物线粒体基因组结构复杂,不同类型的细胞质雄性不育的发生往往由特异的基因突变所导致,为雄性不育基因的克隆带来了较大的困难。针对棉花线粒体基因的特性,改进了cRT-PCR技术,RNA连接酶将线粒体mRNA的5′和3′末端连接环化后,应用随机引物进行反转录,在保证与特异引物获得相同的完整线粒体基因转录本的基础上,实现了同时对所有线粒体编码基因的cRT-PCR,方便对线粒体编码基因的结构进行全局分析,并且通过改良方法对棉花CMS基因进行探索,从而快速找到异常因素,为线粒体功能基因组分析提供了新的方法。 展开更多
关键词 棉花 线粒体 环式RT-PCR 细胞质雄性不育
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应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA 被引量：3
2
作者 陈燃 伍迪 +2 位作者 唐榕 汪进 毛裕民 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期266-269,共4页
循环逆转录 (circulatoryreversetranscription ,CRT)是线性增长逆转录cDNA产量的一种新技术。为了将该技术用于检测HCVRNA ,通过改变CRT的循环次数 ,结合竞争PCR ,作出标准曲线。采用 16次CRT加 34次循环PCR检测了 136例HCVELISA阳性、... 循环逆转录 (circulatoryreversetranscription ,CRT)是线性增长逆转录cDNA产量的一种新技术。为了将该技术用于检测HCVRNA ,通过改变CRT的循环次数 ,结合竞争PCR ,作出标准曲线。采用 16次CRT加 34次循环PCR检测了 136例HCVELISA阳性、5 4例HCVELISA阴性和 10 8例临床可疑病人全血标本 ,并与逆转录PCR(RT -PCR)和巢式PCR (NT -PCR)的检测结果相比较 ,显示HCVRNA总检出率分别为 :5 7 9%、35 6 %、5 8 6 %。结果提示 ,CRT -PCR是一种简便有效的提高RNA检测灵敏度的方法 。 展开更多
关键词 循环逆转录 RT-PCR HCV 竞争定量PCR 丙型肝炎病
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人骨肉瘤组织钙网织蛋白表达及其意义探讨 被引量：1
3
作者 张永奎 郝延科 +1 位作者 陈义强 李建民 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期757-761,共5页
目的:探讨钙网织蛋白(calreticulin,CRT)在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤生长、转移的关系,以及化疗对其表达的影响。方法:取2005-10-01-2010-09-31在山东中医药大学附属医院(15例)、山东大学齐鲁医院(11例)及新汶矿务局集团中心医院(4例... 目的:探讨钙网织蛋白(calreticulin,CRT)在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤生长、转移的关系,以及化疗对其表达的影响。方法:取2005-10-01-2010-09-31在山东中医药大学附属医院(15例)、山东大学齐鲁医院(11例)及新汶矿务局集团中心医院(4例)骨科行骨肉瘤切除术、病历资料完整并排除合并其他运动系统肿瘤的骨肉瘤标本30例,其中转移20例,术前化疗者20例。每例标本同时取距离瘤组织>30mm的正常组织作对照。免疫组织化学染色法检测CRT在瘤体组织和正常组织中的表达;RT-PCR法检测CRT在mRNA水平的表达;蛋白质印迹法检测CRT蛋白的表达。结果:CRT主要存在于细胞质内,在所有标本中都有表达。其表达强度为瘤体组织(1.07±0.32)<瘤体周围正常组织(2.68±0.09),P<0.01;肿瘤转移组(0.93±0.21)<未转移组(1.36±0.42),P=0.020;术前未化疗组(0.75±0.21)<术前化疗组(1.24±0.30),P=0.001。CRT mRNA的表达强度为瘤体组织(0.58±0.30)<瘤体周围正常组织(1.48±0.14),P<0.01;肿瘤转移组(0.50±0.22)<未转移组(0.73±0.23),P=0.033;术前未化疗组(0.27±0.13)<术前化疗组(0.74±0.23),P<0.01。CRT蛋白的表达水平为瘤体组织(369.35±14.27)<瘤体周围正常组织(599.23±6.78),P<0.01;肿瘤转移组(361.95±17.37)<未转移组(394.15±17.97),P=0.031;术前未化疗组(288.96±12.86)<术前化疗组(409.54±18.22),P<0.01。结论:CRT的表达在人骨肉瘤组织中降低,其mRNA和蛋白质表达水平下降程度与瘤体是否转移有关,化疗可增加其表达水平。 展开更多
关键词 骨肉瘤 钙网织蛋白 免疫荧光组织化学染色 逆转录聚合酶链反应 蛋白质印迹
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钙网蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义 被引量：1
4
作者 刘倩 杨清 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2016年第4期249-252,256,共5页
目的:探讨子宫内膜癌中钙网蛋白(CRT)表达与子宫内膜癌生物学行为的关系。方法:选取2014年2月至2015年1月在中国医科大学附属盛京医院行手术治疗的50例子宫内膜癌组织标本(均为腺癌,术前均未接受放化疗),以及因宫颈CINIII、子宫脱垂等... 目的:探讨子宫内膜癌中钙网蛋白(CRT)表达与子宫内膜癌生物学行为的关系。方法:选取2014年2月至2015年1月在中国医科大学附属盛京医院行手术治疗的50例子宫内膜癌组织标本(均为腺癌,术前均未接受放化疗),以及因宫颈CINIII、子宫脱垂等行全子宫切除术的30例正常子宫内膜组织。分别采取实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CRT mRNA表达,免疫组织化学SP法及蛋白免疫印迹检测CRT蛋白表达水平。分析CRT表达量与子宫内膜癌临床病理学参数的关系。结果:子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中CRT mRNA相对表达量分别为3.58±3.49和2.00±1.89,CRT蛋白相对表达量分别为0.50±0.19和0.20±0.12,差异均有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织中CRT蛋白表达量与TNM分期和有无淋巴结转移有关(P<0.05),而与分化程度及有无肌层浸润无关(P=0.129)。结论:CRT蛋白在子宫内膜样腺癌中表达上调,且表达水平与子宫内膜样腺癌的生物学行为可能有一定关系。 展开更多
关键词 子宫内膜样腺癌 钙网蛋白 REAL time-PCR 免疫组化 蛋白免疫印迹
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茄子冷诱导转录因子CBF的分离及分析 被引量：3
5
作者 姜涛 申艳红 +1 位作者 赵湾湾 林碧英 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第9期1756-1762,共7页
利用白菜CBF基因序列搜索茄子基因组DNA序列和茄子EST序列,然后参考这些序列设计开放型阅读框两端的特异引物,以茄子叶片cDNA为模板克隆获得了该基因的cDNA序列。经生物信息学分析证实该序列是CBF基因,命名为SmCBF(登录号:KY780486.1)... 利用白菜CBF基因序列搜索茄子基因组DNA序列和茄子EST序列,然后参考这些序列设计开放型阅读框两端的特异引物,以茄子叶片cDNA为模板克隆获得了该基因的cDNA序列。经生物信息学分析证实该序列是CBF基因,命名为SmCBF(登录号:KY780486.1)。该基因编码211个氨基酸,包含AP2功能域和DNA结合位点,属于AP2超基因家族。用PlantCARE分析SmCBF基因启动子序列的顺式作用元件,发现了1个MYC识别位点和1个MYB结合位点,说明该基因受到MYC和MYB的调控。采用Real-timePCR研究了SmCBF基因在低温诱导茄子中的表达情况,结果显示该基因随着低温处理时间延长表达量逐渐升高,在6h达到最高值,说明低温诱导该基因表达。 展开更多
关键词 茄子 CBF基因 基因克隆 荧光定量PCR 启动子
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