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构建cRNA作为标准曲线的实时RT-PCR检测方法 被引量:3
1
作者 蔡刚 李闻捷 +2 位作者 丁健华 付传刚 沈茜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期172-174,共3页
目的 建立一种新的基于LightCyclerTM技术 ,并通过构建cRNA标准曲线来对目的基因进行定量实时RT -PCR的检测方法。方法 以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的cRNA作为标准品 ,并与样本同时进行反转录和PCR扩增 ,用此方法来检测目... 目的 建立一种新的基于LightCyclerTM技术 ,并通过构建cRNA标准曲线来对目的基因进行定量实时RT -PCR的检测方法。方法 以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的cRNA作为标准品 ,并与样本同时进行反转录和PCR扩增 ,用此方法来检测目的基因在结直肠组织中的表达。结果 采用cRNA标准品制作的标准曲线具有较好的线性关系 (r>0 .99) ,而且在每次实验中都能取得较好的扩增效率 ,CEA与GAPDH的扩增效率分别大于 88.7%和 87.4 %。结论 此方法能较为准确的对组织中的目的基因表达进行定量检测。 展开更多
关键词 crna 标准曲线 实时RT-PCR检测 mRNA定量
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一种快速构建cRNA标准曲线检测基因表达方法的建立 被引量:10
2
作者 张燕 沈茜 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期474-477,共4页
为了建立一种适于实验室乃至常规定量检测mRNA表达的、可快速构建cRNA标准曲线的方法 ,设计带有T7启动子序列和PolyT序列的引物对目的基因和内参照进行PCR ,克隆入载体作为体外合成cRNA的模板 ,快速构建cRNA标准 .结果表明 :该曲线的线... 为了建立一种适于实验室乃至常规定量检测mRNA表达的、可快速构建cRNA标准曲线的方法 ,设计带有T7启动子序列和PolyT序列的引物对目的基因和内参照进行PCR ,克隆入载体作为体外合成cRNA的模板 ,快速构建cRNA标准 .结果表明 :该曲线的线性范围至少达 6个数量级 ,相关系数为 0 99.该法快速、简便 。 展开更多
关键词 crna 标准曲线 检测 基因表达 RT—PCR
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应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测胰岛素mRNA 被引量:3
3
作者 李占淳 黄岩 石爱荣 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期323-326,T018,共5页
成年雄性Wistar大鼠,用地高辛标记的CRNA探针在胰腺切片上进行原位杂交,以检测胰岛B细胞胰岛素基因表达产物mRNA,同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行比较。胰腺经4%多聚甲醛灌注固定... 成年雄性Wistar大鼠,用地高辛标记的CRNA探针在胰腺切片上进行原位杂交,以检测胰岛B细胞胰岛素基因表达产物mRNA,同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行比较。胰腺经4%多聚甲醛灌注固定,经Bouin液再固定20h,常规石蜡包埋和切片。经胰岛素CRNA探针杂交的胰腺切片中胰岛B细胞的胞质和核仁呈阳性反应,阳性信号为蓝色颗粒。瞩岛其他细胞及胰腺腺泡细胞为阴性。方法对照切片中均无阳性信号出现。经与免疫组织化学染色的相邻切片比较证明,原位杂交显示的阳性细胞与胰岛素免疫反应阳性细胞相一致。本研究所用原位杂交方法简单,结果可靠,重复性好。 展开更多
关键词 胰岛素 地高辛标记 crna 探针 MRNA
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诱生性一氧化氮合酶cRNA探针的制备及敏感性检测 被引量:2
4
作者 王迎伟 高丰光 +1 位作者 何球藻 秦慧莲 《徐州医学院学报》 CAS 1999年第4期265-267,共3页
目的制备地高辛标记的大鼠诱生性一氧化氮合酶(iNOS)cRNA探针。方法首先对携带大鼠iNOScDNA的PMOSBlue质粒进行转化扩增。然后提取扩增的质粒DNA并用BamHⅠ内切酶酶切处理使其线性化。以线性化的cD... 目的制备地高辛标记的大鼠诱生性一氧化氮合酶(iNOS)cRNA探针。方法首先对携带大鼠iNOScDNA的PMOSBlue质粒进行转化扩增。然后提取扩增的质粒DNA并用BamHⅠ内切酶酶切处理使其线性化。以线性化的cDNA为模板,在T7RNA聚合酶的作用下,体外转录带有地高辛的iNOScRNA探针。结果该地高辛标记的cRNA探针用点杂交法能检出相应DNA的敏感性可达0.1μg/L。结论该iNOScRNA探针可用作检测组织细胞内iNOSmRNA的表达。 展开更多
关键词 地高辛 iNOS探针 质粒 一氧化氮合酶 crna
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地高辛标记的血小板T细胞活化抗原1cRNA探针的制备与鉴定 被引量:1
5
作者 陈丽华 欧阳为明 +1 位作者 朱勇 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第2期113-115,共3页
目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ... 目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ,再用SP6RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链cRNA探针。结果经斑点杂交证实 ,该探针敏感性高、特异性强。结论地高辛标记PTA1cRNA探针的制备 ,为进一步研究PTA1mR NA在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具。 展开更多
关键词 血小板T细胞活化抗原1 地高辛标记 crna探针
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地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长抑素mRNA 被引量:1
6
作者 王瑞安 蔡文琴 +2 位作者 姚钧 向正华 苏慧慈 《第四军医大学学报》 1995年第4期244-246,共3页
目的:建立敏感的非放射性原位杂交技术检测胃肠调节肽基因的表达.方法:用体外转录法制备地高辛精(Dig)标记生长抑素cRNA探针,在4%多聚甲醛固定的胃、十二指肠和胰腺恒冷箱切片标本上进行了原位杂交,结果:杂交阳性部位... 目的:建立敏感的非放射性原位杂交技术检测胃肠调节肽基因的表达.方法:用体外转录法制备地高辛精(Dig)标记生长抑素cRNA探针,在4%多聚甲醛固定的胃、十二指肠和胰腺恒冷箱切片标本上进行了原位杂交,结果:杂交阳性部位呈紫蓝色,位于胞浆,背景浅淡,反差强烈.含生长抑素mRNA细胞与以前所报道的生长抑素免疫反应细胞的形态、分布均一致。结论:Dig标记cRNA探针原位杂交法敏感、简便、迅速、可靠,可用于胃肠调节肽基因表达的研究. 展开更多
关键词 生长胰素 基因表达 原位杂交 crna探针 地高辛精
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甲状腺过氧化物酶mRNA cRNA探针的构建及意义
7
作者 陈云 朱明华 +1 位作者 周晓军 倪灿荣 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期584-588,共5页
目的探讨甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)mRNA cRNA探针的构建及原位表达的检测方法和意义。方法取甲状腺结节新鲜组织,在RT-PCR扩增TPO cDNA的基础上,构建pSPT19-TPO质粒,经HindⅢ和BamHⅠ单酶切后成线性化模板,在SP6和T7 RNA... 目的探讨甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)mRNA cRNA探针的构建及原位表达的检测方法和意义。方法取甲状腺结节新鲜组织,在RT-PCR扩增TPO cDNA的基础上,构建pSPT19-TPO质粒,经HindⅢ和BamHⅠ单酶切后成线性化模板,在SP6和T7 RNA聚合酶作用下,体外转录合成地高辛标记的TPO cRNA反义和正义探针,进行TPO mRNA的原位杂交实验。结果TPO mRNA阳性杂交信号分布于甲状腺滤泡细胞的胞质,本组腺瘤2例、结节性甲状腺肿4例、瘤周甲状腺组织1例原位杂交阳性,乳头状癌2例、桥本病1例原位杂交阴性。核酸原位杂交和RT-PCR检测甲状腺组织TPO mRNA的表达,结果一致。结论成功构建甲状腺过氧化物酶mRNA的cRNA探针;检测TPO mRNA是一种较准确反映甲状腺组织TPO状态的方法,TPO mRNA的原位检测可结合组织形态学了解甲状腺滤泡细胞的功能表达状况。 展开更多
关键词 甲状腺过氧化物酶 甲状腺 crna探针 原位杂交
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体外转录法制备地高辛标记cx43cRNA探针 被引量:1
8
作者 曹玉文 陆天才 +1 位作者 李锋 蒋金芳 《农垦医学》 2004年第1期9-10,共2页
关键词 体外转录法 制备 地高辛标记 cx43crna探针 检测
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地高辛标记cRNA探针原位杂交检测大鼠脑NMDAR-LmRNA
9
作者 刘爱平 刘兢 +1 位作者 张晓燕 阮迪云 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期565-568,共4页
采用地高辛(Digoxin Dig)标记神经递质受体NMDARLcRNA探针技术进行原位杂交,研究了Wistar 新生大鼠脑神经细胞NMDARL的基因表达.光学显微镜观察结果显示,大脑皮层、海马等区有明显的NMDA... 采用地高辛(Digoxin Dig)标记神经递质受体NMDARLcRNA探针技术进行原位杂交,研究了Wistar 新生大鼠脑神经细胞NMDARL的基因表达.光学显微镜观察结果显示,大脑皮层、海马等区有明显的NMDARLmRNA表达,胞浆着蓝色,胞核不着色,背景浅淡,反差显著.实验结果表明地高辛标记cRNA探针能快速、准确地检测出NMDARLmRNA,为进一步研究这一拟受体在脑中表达和分布奠定了基础. 展开更多
关键词 地高辛 NMDAR-L 原位杂交 crna探针
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地高辛标记大鼠下丘脑生长激素释放因子cRNA探针的制备及应用
10
作者 汤淑萍 孙钰 向正华 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期18-21,共4页
目的:制备地高辛标记大鼠下丘脑释放因子cRNA探针.方法:大鼠下丘脑生长激素释放因子的重组质粒cDNA PGEM4经转化扩增后,用碱性裂解法获取质粒cDNR并纯化.用限制性内切酶ECORI酶切,以线性cDNA为模板.在T_7和Sp_6RNA聚合酶作用下.采用体... 目的:制备地高辛标记大鼠下丘脑释放因子cRNA探针.方法:大鼠下丘脑生长激素释放因子的重组质粒cDNA PGEM4经转化扩增后,用碱性裂解法获取质粒cDNR并纯化.用限制性内切酶ECORI酶切,以线性cDNA为模板.在T_7和Sp_6RNA聚合酶作用下.采用体外转录法分别合成地高辛素标记的大鼠下丘脑生长激素释放因子cRNA和RNA探针.实验采用原位杂交技术.以cDNA为探针,检测大鼠下丘脑中生长激素释放因子mRNA的分布.检测Dig-cRNA探针的灵敏度.结果:生长激素释放因子神经元呈圆形或多边形.主要集中于下丘脑弓状核团和腹内侧核团的周缘,此外.在下丘脑视前区、视交叉上核区域及视上核的结节部.还可见散在的神经元分布.结论;在对GHRF的进一步研究中,Dig-rhCHRFcRNA探针必将作为一种有力的工具而发挥重要的作用. 展开更多
关键词 下丘脑 生长激素 释放因子 地高辛素 crna探针
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DIG 标记的 cRNA 探针用于原位杂交最佳条件探讨
11
作者 张钦宪 史学义 +1 位作者 丁一 乐晓萍 《河南医科大学学报》 1997年第1期79-81,共3页
对地高辛(digoxigenin,DIG)标记的反义RNA探针用于原位杂交的技术问题进行研究。结果表明:①杂交标本取材后应在1h内放入固定液,时间过长,杂交信号明显降低;②探针工作浓度以0.4mg/L为宜,过高或过低... 对地高辛(digoxigenin,DIG)标记的反义RNA探针用于原位杂交的技术问题进行研究。结果表明:①杂交标本取材后应在1h内放入固定液,时间过长,杂交信号明显降低;②探针工作浓度以0.4mg/L为宜,过高或过低影响杂交背景或阳性率;③防止RNase的污染是技术成败的关键之一;④杂交温度和时间以43℃,16h为宜;⑤防止脱片是原位杂交的基本技术需要。 展开更多
关键词 crna探针 原位杂交 地高辛标记
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地高辛标记的黄鳝F64基因cRNA探针的制备及其应用 被引量:2
12
作者 蒋骄云 田文斐 +1 位作者 冯龙 曲宪成 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期137-141,共5页
以黄鳝F64基因序列为模板设计引物,扩增用于c RNA探针合成的模板,构建F64/p GM-T重组质粒并线性化,利用RNA聚合酶体外转录合成正、反义c RNA探针,并对其进行地高辛标记,利用原位杂交方法检测F64基因在黄鳝性腺发育过程中的表达变化情况... 以黄鳝F64基因序列为模板设计引物,扩增用于c RNA探针合成的模板,构建F64/p GM-T重组质粒并线性化,利用RNA聚合酶体外转录合成正、反义c RNA探针,并对其进行地高辛标记,利用原位杂交方法检测F64基因在黄鳝性腺发育过程中的表达变化情况。结果显示,正义探针未检测到阳性信号,反义探针检测到该基因在黄鳝性腺发育早期不表达,于V期性腺开始表达。研究结果表明,体外转录法可以有效合成c RNA探针,制备的c RNA探针可以准确检测F64基因的时空表达。 展开更多
关键词 黄鳝F64基因 性腺发育 c RNA探针 原位杂交
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褪黑素受体Mel_(1a)和 ROR_β的基因克隆和 cRNA探针的制备(英文)
13
作者 王新辉 周江宁 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期145-149,共5页
为了研究褪黑素受体在人脑中的表达状况以及褪黑素在老年性痴呆中的作用 ,本研究克隆了 Mel1 a和 RORβ等两种褪黑素受体的 c DNA并将其转入 p Bluescript ( KS+)质粒载体中。重组质粒通过限制性内切酶鉴定分析并测序。结果表明 ,克隆... 为了研究褪黑素受体在人脑中的表达状况以及褪黑素在老年性痴呆中的作用 ,本研究克隆了 Mel1 a和 RORβ等两种褪黑素受体的 c DNA并将其转入 p Bluescript ( KS+)质粒载体中。重组质粒通过限制性内切酶鉴定分析并测序。结果表明 ,克隆的序列与 Gen Bank中的序列一致。利用线性化的质粒模板反转出 c RNA探针 。 展开更多
关键词 褪黑素受体 Mel1α RORβ 基因 克隆 crna探针 质粒模板 人脑 老年性痴呆
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Detection of somatostatin mRNA in rat gastroentero-pancreatic system with digoxigenin-labeled cRNA probe in situ hybridization
14
作者 王瑞安 蔡文琴 +2 位作者 姚钧 向正华 苏慧慈 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1996年第2期139-141,146,共4页
Objective: To establish a sensitive, nonradioactive in situ hybridization method to detect the expression of gut regulatory peptide genes. Methods: The digoxigenin (Dig) labeled somatostatin (SS) RNA probes were synth... Objective: To establish a sensitive, nonradioactive in situ hybridization method to detect the expression of gut regulatory peptide genes. Methods: The digoxigenin (Dig) labeled somatostatin (SS) RNA probes were synthesized with in vitro transcription system and the in situ hybridization was conducted on the cryostat sections of rat stomach , duodenum and pancreas. Results: Positive reaction sites were purple-blue in color and located in the cytoplasm with a light background and a strong contrast. Both the morphosis and distribution of the SS mRNA posrtive cells corresponded well with those of the previously reported SS immunoreactive cells. Conclusion: The Dig -labeled cRNA probe in situ hybridization method is simple, sensitive and reliable for the study of gut regulatory peptide gene expression. 展开更多
关键词 DIGOXIGENIN SOMATOSTATIN in situhybridization gastroenteropancreatic SYSTEM crna PROBE RATS
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应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交法检测大鼠下丘脑生长抑素mRNA
15
作者 李英 周济远 +3 位作者 任君旭 王建伟 白雪梅 张耕 《张家口医学院学报》 1996年第1期6-7,共2页
用成年雄性Wistar大鼠,经4%多聚甲醛灌注固定,取下丘脑组织,行再固定24h,常规石蜡包埋和切片,用地高辛标记的cRNA探针进行厚位杂交,结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元,阳性信号为蓝色颗粒,胞质、核膜及核仁呈阳性 阴性对照... 用成年雄性Wistar大鼠,经4%多聚甲醛灌注固定,取下丘脑组织,行再固定24h,常规石蜡包埋和切片,用地高辛标记的cRNA探针进行厚位杂交,结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元,阳性信号为蓝色颗粒,胞质、核膜及核仁呈阳性 阴性对照均无阳性反应出现 本实验证实,用石蜡切片进行原位杂交组织化学研究,能检测下丘脑生长抑素神经元基因表达产物mRNA,方法稳定,重复性好,便于普通实验室开展工作。 展开更多
关键词 生长抑素 地高辛标记 探针 下丘脑 原位杂交
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动脉粥样硬化相关基因FWA1功能的cRNA原位杂交研究
16
作者 陆立鹤 刘玉清 +1 位作者 陈敬洲 惠汝太 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2001年第1期58-60,共3页
目的 探讨成人主动脉cDNA文库的新基因FWA1在心血管疾病中的作用。方法 应用cRNA原位杂交法对动脉粥样硬化(AS)动物摸型研究其mRNA表达水平上的变化。结果该基囚在血管内皮细胞胞浆中表达且在AS模型中表达增强。结论 FWA1基因可能与AS... 目的 探讨成人主动脉cDNA文库的新基因FWA1在心血管疾病中的作用。方法 应用cRNA原位杂交法对动脉粥样硬化(AS)动物摸型研究其mRNA表达水平上的变化。结果该基囚在血管内皮细胞胞浆中表达且在AS模型中表达增强。结论 FWA1基因可能与AS的发生发展有关。 展开更多
关键词 基因功能 crna原位杂交 动脉粥样硬化
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用洋地黄毒苷标记的cRNA探针进行RNA原位杂交
17
作者 Di.,HBPM 陈红 《科技译丛(长沙)》 1995年第4期23-27,共5页
关键词 洋地黄毒苷 crna探针 RNA 原位杂交
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lncRNA对骨质疏松骨代谢相关信号通路影响的研究进展 被引量:11
18
作者 马智勇 郭成龙 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期547-551,共5页
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)参与了多种生物学过程,在基因表达如转录调控、表观遗传修饰及蛋白翻译后修饰等机制中发挥重要作用,若它们缺乏则会导致蛋白质编码能力的缺失,失调的lncRNA与骨质疏松密切相关。作为骨质疏松(... 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)参与了多种生物学过程,在基因表达如转录调控、表观遗传修饰及蛋白翻译后修饰等机制中发挥重要作用,若它们缺乏则会导致蛋白质编码能力的缺失,失调的lncRNA与骨质疏松密切相关。作为骨质疏松(osteoporosis,OP)骨代谢过程中的生物标志物,lncRNA调控骨代谢相关信号通路的作用机制复杂,随着表观遗传学的发展,lncRNA将为OP诊断、治疗及判断预后提供新的靶向目标。本文将从lncRNA与成骨细胞分化相关信号通路、与破骨细胞分化相关信号通路、与钙相关信号通路三个方面对近年来lncRNA与骨质疏松症骨代谢相关信号通路的研究进行综述。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 骨质疏松 骨代谢 信号通路
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The Importance of Hunting and Hunting Areas for Big and Small Game (Food) for the Tourism Development in the Crna River Basin in the Republic of Macedonia 被引量:1
19
作者 Cane Koteski Dushko Josheski Zlatko Jakovlev Snezana Bardarova Mimoza Serafimova 《Journal of Earth Science and Engineering》 2014年第2期121-125,共5页
The Crna River is a river in the Republic of Macedonia, right tributary to Vardar. Its source is in the mountains of Western Macedonia, west of Krusevo. It flows through the village of Sopotnica, and southwards throug... The Crna River is a river in the Republic of Macedonia, right tributary to Vardar. Its source is in the mountains of Western Macedonia, west of Krusevo. It flows through the village of Sopotnica, and southwards through the plains east of Bitola. The name means "black river" in Macedonian, which is translation for its former Thracian name. The purpose of this paper is to show the hunting and hunting areas for big and small Game (food), the structure of the areas of certain hunting, fishing, fishing water objects, fish species, fishponds up to 20 years shown by municipalities and individual farms with ponds in the basin of Black River. It had used statistical data for the hunting grounds by areas, fishing ponds. Fish is very diverse in this river. Hunting in the Black River basin is of great importance for the economy of Republic of Macedonia. It is also a necessary factor for development of other economic activities. 展开更多
关键词 Structure of the hunting grounds fishing water objects types of fish FISHPONDS agricultural holdings
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