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题名猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达
被引量：11
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作者
杨湘越
孙树汉
陈蕊雯
郭瀛军
颜宏利
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机构
上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室
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出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第3期31-33,67,共4页
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基金
国家 8 63计划资助项目 (10 1-0 6-0 5 0 4)
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文摘
目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。
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关键词
cc1cdna
克隆表达
巴斯德毕赤酵母
囊虫病
猪囊尾蚴
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Keywords
cc1cdna
Cloning and expression
Pichia pastoris
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分类号
R383.34
[医药卫生—医学寄生虫学]
R532.330.3
[医药卫生—内科学]
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