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Retraction: MicroRNA-148a Acts as a Tumor Suppressor in Osteosarcoma via Targeting Rho-Associated Coiled-Coil Kinase
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2026年第1期622-622,共1页
The published article titled“MicroRNA-148a Acts as a Tumor Suppressor in Osteosarcoma via Targeting Rho-Associated Coiled-Coil Kinase”has been retracted from Oncology Research,Vol.25,No.8,2017,pp.1231–1243.DOI:10.3... The published article titled“MicroRNA-148a Acts as a Tumor Suppressor in Osteosarcoma via Targeting Rho-Associated Coiled-Coil Kinase”has been retracted from Oncology Research,Vol.25,No.8,2017,pp.1231–1243.DOI:10.3727/096504017X14850134190255 URL:https://www.techscience.com/or/v25n8/56908 Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed experiments were intended to have been shown,although the areas immediately surrounding this area featured comparatively different distributions of cells.In addition,the western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 cellular datawhere tumor suppressor western blots rho associated coiled coil kinase microrna cellular data OSTEOSARCOMA figures
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动物源弯曲杆菌免疫显性抗原鉴定及间接ELISA检测方法的建立
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作者 杨欢 王策 +6 位作者 王玉飞 赵晶 张会强 曹易博 姬钰浩 邓兴梅 张辉 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第3期1418-1433,共16页
【目的】筛选胎儿弯曲杆菌(Campylobacter fetus)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)血清免疫显性抗原,初步建立动物弯曲杆菌病血清学ELISA诊断方法。【方法】利用生物信息学分析软件对候选抗原进行分析筛选,用pET-28a(+)原核表达载... 【目的】筛选胎儿弯曲杆菌(Campylobacter fetus)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)血清免疫显性抗原,初步建立动物弯曲杆菌病血清学ELISA诊断方法。【方法】利用生物信息学分析软件对候选抗原进行分析筛选,用pET-28a(+)原核表达载体构建重组质粒,诱导表达并纯化重组蛋白。通过SDS-PAGE和His标签抗体Western blotting检测蛋白表达情况。制备兔源弯曲杆菌多克隆抗体并将其作为Western blotting一抗验证抗原与多克隆抗体反应原性。建立间接ELISA检测方法,优化抗原包被浓度、封闭液及封闭时间、一抗和二抗稀释度及反应时间等反应条件,确定临界值,评价其特异性、灵敏性、重复性。【结果】利用生物信息学分析软件筛选出胎儿弯曲杆菌抗原SapA、空肠弯曲杆菌抗原FlaA。原核表达纯化后,Western blotting检测SapA蛋白大小为101 ku,FlaA蛋白大小为59 ku。制备的胎儿弯曲杆菌兔多克隆抗体血清效价为1∶64000,空肠弯曲杆菌兔多克隆抗体效价为1∶128000。Western blotting结果表明,抗原SapA、FlaA特异性识别弯曲杆菌多克隆抗体,具有良好的反应原性。以纯化的SapA蛋白作为包被抗原,确定的最优包被浓度为2.5μg/mL,封闭液为5%BSA,封闭时间30 min,一抗、二抗稀释度分别为1∶500和1∶8000,孵育时间分别为30和90 min。以纯化的FlaA蛋白作为包被抗原,确定最优包被浓度为0.4μg/mL,封闭时间1 h,其余条件与前者一致。二者与结核分枝杆菌(MTB)、副结核分枝杆菌(MAP)及布鲁氏菌(Brucella)均无交叉反应,特异性强。SapA间接ELISA方法的灵敏性最低达到1∶6400,FlaA间接ELISA方法的灵敏性达到1∶12800。批内和批间重复性试验变异系数均<10%,证明其重复性好。【结论】本研究成功鉴定了胎儿弯曲杆菌免疫显性抗原SapA、空肠弯曲杆菌免疫显性抗原FlaA,建立了动物弯曲杆菌病血清学间接ELISA诊断方法,为弯曲杆菌病防控提供了有效的诊断抗原及快速诊断方法。 展开更多
关键词 弯曲杆菌 免疫显性抗原 原核表达 Western blotting 间接ELISA
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原发性肝细胞癌中NSUN6的表达及其临床意义
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作者 叶娟 何建忠 +1 位作者 唐瑶 余继海 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2026年第2期239-243,共5页
目的探讨NSUN6蛋白和mRNA在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其在HCC进展及预后中的作用和意义。方法使用在线生物信息学分析工具分析NSUN6在HCC患者中的表达,并研究其与HCC患者预后的关系。采用免疫组化法检测9... 目的探讨NSUN6蛋白和mRNA在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其在HCC进展及预后中的作用和意义。方法使用在线生物信息学分析工具分析NSUN6在HCC患者中的表达,并研究其与HCC患者预后的关系。采用免疫组化法检测91例HCC和43例癌旁组织中NSUN6表达,分析其与HCC临床病理特征的关系。使用Kaplan-Meier生存分析验证NSUN6表达与HCC预后的关系。同时,使用Western bolt和RT-qPCR检测18对HCC癌组织及癌旁组织中NSUN6的表达。结果生物信息学分析示NSUN6在HCC癌组织中明显下调,NSUN6的低表达与更差的HCC预后相关。免疫组化分析表明NSUN6蛋白在HCC癌组织中的低表达率为52.7%(48/91)高于癌旁组织(16.3%,7/43),差异有统计学意义(P<0.05);NSUN6的低表达与分化程度、TNM分期、卫星结节、淋巴结转移均有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析示,NSUN6蛋白低表达HCC患者的总生存期低于NSUN6蛋白高表达患者(P=0.007)。Western blot和RT-qPCR检测表明,HCC中NSUN6蛋白及其mRNA的表达均低于配对的癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论NSUN6的表达下调可能与HCC密切相关,有望成为疾病进展及预后预测的有效标志物及临床治疗药物研究的新靶点。 展开更多
关键词 肝细胞癌 NSUN6 m5C 免疫组织化学 Western blot RT-QPCR
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Retraction:Long Noncoding RNA PVT1 Promotes Melanoma Progression via Endogenous Sponging miR-26b
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2026年第3期766-766,共1页
The published article titled“Long Noncoding RNA PVT1 PromotesMelanoma Progression via Endogenous Sponging miR-26b”has been retracted from Oncology Research,Vol.26,No.5,2018,pp.675–681.DOI:10.3727/096504017X14920318... The published article titled“Long Noncoding RNA PVT1 PromotesMelanoma Progression via Endogenous Sponging miR-26b”has been retracted from Oncology Research,Vol.26,No.5,2018,pp.675–681.DOI:10.3727/096504017X14920318811730 URL:https://www.techscience.com/or/v26n5/56680 Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed experiments were intended to have been shown,although the areas immediately surrounding this area featured comparatively different distributions of cells.In addition,the western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 cellular datawhere protein bands cellular data PVT long noncoding RNA MELANOMA miR b western blot
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Retraction:Long Noncoding RNA(lncRNA)HOTAIR Affects Tumorigenesis and Metastasis of Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating miR-613
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2026年第3期767-767,共1页
The published article titled“Long Noncoding RNA(lncRNA)HOTAIR Affects Tumorigenesis andMetastasis of Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating miR-613”has been retracted from Oncology Research,Vol.26,No.5,2018,pp.... The published article titled“Long Noncoding RNA(lncRNA)HOTAIR Affects Tumorigenesis andMetastasis of Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating miR-613”has been retracted from Oncology Research,Vol.26,No.5,2018,pp.725–734.DOI:10.3727/096504017X15119467381615 URL:https://www.techscience.com/or/v26n5/56685 Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed experiments were intended to have been shown,although the areas immediately surrounding this area featured comparatively different distributions of cells.In addition,the western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 non small cell lung cancer cellular datawhere Hotair METASTASIS long noncoding RNA TUMORIGENESIS western blot MIR
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Corrigendum
6
《Neural Regeneration Research》 2026年第3期922-922,共1页
Corrigendum:Epalrestat protects against diabetic peripheral neuropathy by alleviating oxidative stress and inhibiting polyol pathway https://doi.org/10.4103/NRR.NRR-D-25-00562 In the article titled“Epalrestat protect... Corrigendum:Epalrestat protects against diabetic peripheral neuropathy by alleviating oxidative stress and inhibiting polyol pathway https://doi.org/10.4103/NRR.NRR-D-25-00562 In the article titled“Epalrestat protects against diabetic peripheral neuropathy by alleviating oxidative stress and inhibiting polyol pathway,”published on pages 345-351 in Issue 2,Volume 11 of Neural Regeneration Research(Li et al.,2016),the Western blot bands in Figure 2A are incorrect. 展开更多
关键词 western blot bands diabetic peripheral neuropathy alleviating oxidative stress oxidative stress polyol pathway EPALRESTAT
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Retraction:miR-641 functions as a tumor suppressor by targeting MDM2 in human lung cancer
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第3期737-737,共1页
Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.The western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in man... Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.The western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 western blots protein bands protein band human lung cancer tumor suppressor MDM MIR western blot
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Retraction:Inhibition of Proliferation,Migration,and Invasion by Knockdown of Pyruvate Kinase-M2(PKM2)in Ovarian Cancer SKOV3 and OVCAR3 Cells
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第7期1801-1801,共1页
Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.The western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in man... Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.The western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 western blots protein bands RETRACTION ovarian cancer MIGRATION INVASION SKOV PROLIFERATION
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Retraction:MicroRNA-221-3p Plays an Oncogenic Role in Gastric Carcinoma by Inhibiting PTEN Expression
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第9期2598-2598,共1页
The published article titled“MicroRNA-221-3p Plays an Oncogenic Role in Gastric Carcinoma by Inhibiting PTEN Expression”has been retracted from Oncology Research,Vol.25,No.4,2017,pp.523–536.DOI:10.3727/096504016X14... The published article titled“MicroRNA-221-3p Plays an Oncogenic Role in Gastric Carcinoma by Inhibiting PTEN Expression”has been retracted from Oncology Research,Vol.25,No.4,2017,pp.523–536.DOI:10.3727/096504016X14756282819385 URL:https://www.techscience.com/or/v25n4/56833 Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed experiments were intended to have been shown,although the areas immediately surrounding this area featured comparatively different distributions of cells.In addition,the western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 cellular datawhere microrna p PTEN western blots inhibiting pten expression gastric carcinoma cellular data RETRACTION
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Retraction: MYBL2 is targeted by miR-143-3p and regulates breast cancer cell proliferation and apoptosis
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第3期739-739,共1页
Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed ... Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed experiments were intended to have been shown,although the areas immediately surrounding this area featured comparatively different distributions of cells.In addition,the western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 western blots cellular datawhere protein bands performed experiments RETRACTION cellular data
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Retraction:miR-135a confers resistance to gefitinib in non-small cell lung cancer cells by upregulation of RAC1
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第3期733-733,共1页
Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.The western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in man... Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.The western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 non small cell lung cancer western blots protein bands RETRACTION GEFITINIB MIR
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Retraction:Knockdown of Rap1b Enhances Apoptosis and Autophagy in Gastric Cancer Cells via the PI3K/Akt/mTOR Pathway
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作者 Oncology Research Editorial Office 《Oncology Research》 2025年第8期2177-2177,共1页
The published article titled“Knockdown of Rap1b Enhances Apoptosis and Autophagy in Gastric Cancer Cells via the PI3K/Akt/mTOR Pathway”has been retracted from Oncology Research,Vol.24,No.5,2016,pp.287–293.DOI:10.37... The published article titled“Knockdown of Rap1b Enhances Apoptosis and Autophagy in Gastric Cancer Cells via the PI3K/Akt/mTOR Pathway”has been retracted from Oncology Research,Vol.24,No.5,2016,pp.287–293.DOI:10.3727/096504016X14648701447779 URL:https://www.techscience.com/or/v24n5/56977 Following the publication,concerns have been raised about a number of figures in this article.An unexpected area of similarity was identified in terms of the cellular data,where the results from differently performed experiments were intended to have been shown,although the areas immediately surrounding this area featured comparatively different distributions of cells.In addition,the western blots in this article were presented with atypical,unusually shaped and possibly anomalous protein bands in many cases. 展开更多
关键词 gastric cancer cells cellular datawhere western blots AUTOPHAGY RETRACTION rap b APOPTOSIS pi k akt mtor pathway
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蔬菜病毒不同检测技术灵敏度的比较研究
13
作者 陈伟 姚洁 +4 位作者 冯明峰 李帅 蒋西子 蒋磊 江彤 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1072-1081,共10页
为了明确蔬菜病毒种类,探索快速、灵敏、低成本、高通量的病毒检测方法。将10种蔬菜病毒,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,... 为了明确蔬菜病毒种类,探索快速、灵敏、低成本、高通量的病毒检测方法。将10种蔬菜病毒,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的cp基因质粒DNA顺次固定在同一张硝酸纤维素膜(NC膜)上,根据10种蔬菜病毒的cp基因序列制备地高辛(DIG)标记的特异性探针,利用dot-Southern blot方法一次性检测10种病毒。再采用dot-Southern blot、dot-Northern blot、PCR和ELISA方法检测TMV,比较不同检测方法的灵敏度。结果发现,dot-Southern blot方法可在同一张NC膜上一次性检出10种病毒的cp基因质粒DNA。dot-Southern blot检测TMV cp基因质粒DNA和cp基因cDNA的最低浓度分别为5×10^(-2)ng·μL^(-1)和5×10^(-1)ng·μL^(-1),dot-Northern blot检测感染TMV蔬菜样本总RNA的最低浓度为5×10^(-2)ng·μL^(-1),PCR检测TMV cp基因质粒DNA的最低浓度为5×10-3ng·μL^(-1),RT-PCR检测TMV cDNA的最低浓度为5×10^(-2)ng·μL^(-1),dot-ELISA和TAS-ELISA检测感染TMV蔬菜病汁液的最低浓度为9.8 ng·μL^(-1)和78 ng·μL^(-1)。说明dot-Southern blot能够一次性检出多种病毒,可用于蔬菜病毒复合侵染检测。dot-Southern blot、dot-Northern blot、RT-PCR和PCR等核酸检测方法的灵敏度相对较高,而ELISA检测方法的灵敏度相对较低。 展开更多
关键词 蔬菜病毒 检测方法 灵敏度 dot-Southern blot
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马疱疹病毒1型对BHK-21细胞自噬影响的研究
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作者 玄玉莹 庞涛 +5 位作者 付婧 丁玉林 王文龙 高娃 祁咏华 王金玲 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第10期1073-1079,共7页
为研究马疱疹病毒1型(EHV-1)感染仓鼠肾纤维细胞(BHK-21)后对细胞自噬功能的影响,本实验首先通过不同感染量(MOI)的EHV-1感染BHK-21细胞48 h后,利用Western blot检测自噬蛋白LC3 II和LC3 I的表达情况,计算LC3 II/LC3 I值;以不同浓度的... 为研究马疱疹病毒1型(EHV-1)感染仓鼠肾纤维细胞(BHK-21)后对细胞自噬功能的影响,本实验首先通过不同感染量(MOI)的EHV-1感染BHK-21细胞48 h后,利用Western blot检测自噬蛋白LC3 II和LC3 I的表达情况,计算LC3 II/LC3 I值;以不同浓度的雷帕霉素(Rapa)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别作用于BHK-21细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,筛选最适药物浓度(Rapa 0.1μmol/L,3-MA 0.5μmol/L)后,经Western blot检测分析EHV-1感染BHK-21细胞与最适药物浓度作用后BHK-21细胞的LC3 II/LC3 I值。结果显示,不同感染剂量EHV-1感染BHK-21细胞48 h后,感染组LC3 II/LC3 I值极显著低于对照组(P<0.001);EHV-1感染组LC3 II/LC3 I值显著低于对照组(P<0.05),且极显著低于Rapa处理组(P<0.001),而与3-MA组无显著差异。利用EHV-1感染BHK-21细胞后,采用Western blot检测不同时间点自噬蛋白LC3和P62的表达情况,并计算LC3 II/LC3 I与P62/GAPDH值;将EHV-1感染过表达LC3B的BHK-21细胞,利用激光共聚焦显微镜观察感染后的聚集情况;以MOI 1 EHV-1感染BHK-21细胞后,利用透射电镜观察不同时间点的自噬体。Western blot结果显示,EHV-1感染BHK-21细胞12 h后LC3 II/LC3 I值均极显著高于对照组(P<0.05),24 h~60 h时LC3 II/LC3 I值均极显著低于对照组(P<0.01);12 h~36 h时P62/GAPDH值显著高于对照组(P<0.05);48 h、60 h的P62/GAPDH值与对照组无显著差异。激光共聚焦显微镜观察可见,感染EHV-112 h后的BHK-21细胞中GFP-LC3B聚集量多于24 h、36 h时的感染组和12 h时的对照组;24 h和36 h感染组的GFP-LC3B聚集少于同一时间的对照组。透射电镜观察结果显示,EHV-1感染BHK-21细胞12 h后,BHK-21细胞中的自噬体明显多于对照组;而感染36 h时BHK-21细胞中自噬体的数量少于对照组和感染12 h自噬体的数量。激光共聚焦和透射电镜观察结果与Western blot检测结果一致。上述结果首次证实,EHV-1感染BHK-21细胞12 h促进细胞自噬,24 h后抑制细胞自噬。本研究为深入探究细胞自噬对EHV-1复制和感染的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 BHK-21细胞 细胞自噬 Western blot 透射电镜
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自体黄韧带干预TGF-β1/Smad3信号通路抑制兔硬膜外纤维瘢痕形成的实验研究
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作者 王鹏 张德宝 +5 位作者 张杨 张海斌 时嘉 张少杰 李树文 吴一民 《中国临床解剖学杂志》 北大核心 2025年第1期69-75,共7页
目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验... 目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验动物中心购买的48只6~8月龄的日本大白兔,分为保留黄韧带组,自体脂肪回置组,不保留黄韧带组,对不同组别进行手术造模。术后对每组间的实验动物分别饲养3、6周后进行处死(3、6周各处死8只)。采用Western blot蛋白定量分析、RTPCR技术测定各组样本中的TGF-β1、Smad3蛋白含量及mRNA表达水平,并将以上数据分别进行组间比较,分析其差异性。结果①Western blot检测结果:3、6周保留组TGF-β1、Smad3蛋白表达量小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未发现明显差异。②RT-PCR结果显示:对于TGF-β1、Smad3两者的mRNA表达量而言,3、6周保留组明显小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未见明显差异。结论腰椎手术术后,会形成不同程度的硬膜外纤维瘢痕。若在术中保留自体黄韧带,可减少硬膜外成纤维细胞的形成,其机制与TGF-β1/Smad3信号通路有关。 展开更多
关键词 黄韧带 纤维瘢痕 TGF-β1/Smad3信号通路 Western blot RT-PCR技术
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条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠构建与鉴定
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作者 侯梦龙 齐心语 +4 位作者 吴建凤 廖启超 马杰 周磊 李一星 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第8期1432-1439,共8页
目的为了探究肝白血病因子(HLF)在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠动物模型。方法在细胞水平上,通过CCK-8试验验证HLF抑制或过表达对MIN6细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平... 目的为了探究肝白血病因子(HLF)在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠动物模型。方法在细胞水平上,通过CCK-8试验验证HLF抑制或过表达对MIN6细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平检测HLF抑制或过表达效果。将HLF flox/flox转基因小鼠与Pdx1-Cre+/-小鼠(C57BL/6J)杂交繁育,获得子代小鼠。利用PCR方法鉴定小鼠基因型,通过RT-qPCR技术和Western blot检测HLF基因在胰岛β细胞敲除小鼠(HLF flox/flox Cre+/-)和对照小鼠(HLF flox/flox)中的mRNA水平和蛋白水平表达差异,验证敲除效果。同时取2组小鼠的胰岛组织制作石蜡切片并进行苏木精-伊红(HE)染色分析。结果HLF基因抑制或过表达对MIN6细胞增殖无显著影响。在MIN6细胞中抑制HLF基因,其mRNA表达水平较对照组下降了74%,蛋白表达水平较对照组下降了60%;过表达HLF基因后,其mRNA表达水平为对照组的2.13倍,蛋白表达水平为对照组的1.8倍。敲除小鼠的HLF基因mRNA表达水平较对照组下降了89%,蛋白表达水平较对照组下降了65%。HE染色结果显示:敲除小鼠胰岛组织内细胞形态与对照小鼠无明显差异。抑制HLF使MIN6细胞中糖原含量提高约20%。结论成功构建HLF基因敲除小鼠,为研究HLF在糖尿病发病机制中的作用提供了动物模型。 展开更多
关键词 肝白血病因子 条件性胰岛β细胞 RT-QPCR Western blot 基因敲除 C57BL/6J小鼠
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CSF1R^(+/-)小鼠的构建和基因鉴定
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作者 周园园 刘崇 +4 位作者 王安琪 张慧茹 邱佳琪 朱梦娟 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期884-889,共6页
目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外... 目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外显子下游插入一个双侧有Loxp位点的新霉素抗性盒(PGK-neo)。将线性化的靶向载体电穿孔至胚胎干细胞(ES)。将正确靶向的ES注射到C57BL/6J小鼠的胚泡中得到嵌合小鼠,与透明带3-Cre(Zp3-Cre)小鼠进行繁殖。新生小鼠出生后9~14天编号并剪鼠尾,提取小鼠的DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出CSF1R^(+/-)小鼠。应用流式细胞术检测小鼠巨噬细胞中CSF1R的表达;Western blot检测小鼠组织中CSF1R的蛋白表达。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,野生小鼠(WT)扩增出453 bp的条带,CSF1R^(+/-)小鼠扩增出453 bp和650 bp的条带。流式细胞术结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠的腹腔来源巨噬细胞(PM)和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中的CSF1R低表达(P<0.05)。Western blot结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠脾脏、肾脏、脑组织中的CSF1R蛋白低表达(P<0.05)。结论成功构建、繁育和鉴定CSF1R^(+/-)小鼠,为进一步揭示CSF1R在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 CSF1R PCR Western blot 流式细胞术 Cre/Loxp 动物模型
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ODF1单克隆、多克隆抗体的制备及特异性检测
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作者 瞿成龙 向雨欣 +3 位作者 明胜利 曾磊 王江 褚贝贝 《山西农业科学》 2025年第6期159-165,共7页
为探究ODF1蛋白的生物学功能,制备并鉴定其特异性抗体工具,采用原核表达系统表达重组ODF1蛋白,将高纯度的重组ODF1蛋白作为免疫原,利用杂交瘤技术制备鼠源单克隆抗体,通过免疫新西兰兔制备多克隆抗体。采用Western blot和免疫荧光(IFA)... 为探究ODF1蛋白的生物学功能,制备并鉴定其特异性抗体工具,采用原核表达系统表达重组ODF1蛋白,将高纯度的重组ODF1蛋白作为免疫原,利用杂交瘤技术制备鼠源单克隆抗体,通过免疫新西兰兔制备多克隆抗体。采用Western blot和免疫荧光(IFA)对抗体性能进行系统评价。结果成功筛选出1A1-7、5C6-4等2株稳定分泌抗ODF1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,亚型均为IgM,同时获得了高效价的兔源多克隆抗体。Western blot和免疫荧光分析结果表明,单克隆、多克隆抗体均能特异性识别内源性、外源性ODF1蛋白,表现出良好的特异性和应用潜力。综上,该试验成功制备了特异性良好的ODF1单克隆、多克隆抗体。 展开更多
关键词 原核表达 ODF1蛋白 单克隆抗体 Western blot 多克隆抗体 杂交瘤技术 免疫荧光
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短链脂肪酸异戊酸对痘苗病毒体外活性的影响
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作者 杜梦华 李云洁 +6 位作者 郭亚迪 梅航天 邵弓宇 尚雨欣 王江 褚贝贝 明胜利 《山西农业科学》 2025年第6期127-134,共8页
为探究短链脂肪酸异戊酸对痘苗病毒(VACV)体外增殖的抑制作用及其机制,采用直接免疫荧光法筛选5种短链脂肪酸的抗病毒效应;通过CCK-8法评估异戊酸(30~3000μmol/L)对BHK-21、Vero细胞活力的影响;PI染色结合流式细胞术分析异戊酸(10~100... 为探究短链脂肪酸异戊酸对痘苗病毒(VACV)体外增殖的抑制作用及其机制,采用直接免疫荧光法筛选5种短链脂肪酸的抗病毒效应;通过CCK-8法评估异戊酸(30~3000μmol/L)对BHK-21、Vero细胞活力的影响;PI染色结合流式细胞术分析异戊酸(10~100μmol/L)对细胞周期的干预作用。利用流式细胞术定量异戊酸处理细胞中VACV-GFP的增殖水平;采用Western blotting检测VACV结构蛋白A27L、GFP表达变化;采用实时荧光定量PCR分析病毒关键基因F17R、E9L的mRNA转录水平。结果表明,异戊酸显著抑制VACV增殖,且在30~3000μmol/L浓度下对细胞活力无显著影响,在10~100μmol/L浓度时未干扰细胞周期;West⁃ern blotting结果显示,异戊酸剂量依赖性抑制A27L、GFP蛋白表达;qPCR证实,其显著下调F17R、E9L的mRNA水平。综上,异戊酸通过抑制病毒蛋白合成及基因转录,有效阻断VACV体外增殖。 展开更多
关键词 短链脂肪酸 异戊酸 痘苗病毒 Western blotting 流式细胞术 抗病毒
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基于qPCR技术的甘薯基因拷贝数分析中最适内参基因的筛选 被引量:1
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作者 姚佳雯 《数字农业与智能农机》 2025年第8期104-107,共4页
甘薯的分子生物学研究长期受限于基因组复杂性及次生代谢物干扰。基于SYBR Green实时荧光定量PCR技术,筛选了适用于甘薯基因表达分析的内参基因,并构建了外源基因拷贝数检测体系。以转基因甘薯、不同基因组倍性(2×、4×、6... 甘薯的分子生物学研究长期受限于基因组复杂性及次生代谢物干扰。基于SYBR Green实时荧光定量PCR技术,筛选了适用于甘薯基因表达分析的内参基因,并构建了外源基因拷贝数检测体系。以转基因甘薯、不同基因组倍性(2×、4×、6×)的近缘野生种及栽培品种为材料,通过Hpt基因标准曲线(相关系数R2=0.999)验证了检测体系的可靠性(误差小于1%)、稳定性和灵敏性。利用NormFinder、BestKeeper软件结合拷贝数分析评估候选内参基因,发现IbActin和IbTUA在不同遗传背景下的表达稳定性最佳,建立的检测体系可应用于转基因甘薯的分子鉴定。 展开更多
关键词 southern blot qPCR 拷贝数 内参基因
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