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应用多重PCR在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因 被引量:3
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作者 李虹玲 刘文恩 +3 位作者 张运丽 陈腊梅 梁湘辉 吴清阳 《中国感染控制杂志》 CAS 2008年第6期377-380,共4页
目的应用多重聚合酶链反应(PCR)法在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。方法收集2004年10月—2005年7月湖南地区中南大学3所附属医院临床标本分离的多重耐药肠杆菌科细菌171株,以美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规定... 目的应用多重聚合酶链反应(PCR)法在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。方法收集2004年10月—2005年7月湖南地区中南大学3所附属医院临床标本分离的多重耐药肠杆菌科细菌171株,以美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规定的方法进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型确证试验,多重PCR进一步进行blaTEM、blaSHV、blaOXA-1三种耐药基因的检测。结果171株多重耐药的肠杆菌科细菌中,142株(83.04%)ESBLs表型检测阳性,经多重PCR扩增,105株获得阳性结果。根据扩增片段大小判断:检出携带blaTEM菌株85株,携带blaSHV菌株26株,携带blaOXA-1菌株10株,其中15株菌同时携带多种耐药基因。结论多重PCR可以快速、准确地检测出ESBLs表型阳性肠杆菌科细菌是否携带blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。 展开更多
关键词 多重聚合酶链反应 肠杆菌科 blaTEM blashv blaOXA-1 耐药基因 抗药性 微生物
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超广谱-内酰胺酶SHV-5的基因重组表达及酶活性鉴定
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作者 谢勇恩 凌保东 +2 位作者 张翔 张效良 李苌青 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期482-484,共3页
目的对blaSHV-5进行基因重组表达,为建立SHV类β-内酰胺酶抑制剂筛选模型研究奠定基础。方法以产blaSHV-5肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板,自行设计一对寡核苷酸引物,通过PCR扩增获得blaSHV-5基因片断,定向克隆入质粒载体pBK-CM V构建重组... 目的对blaSHV-5进行基因重组表达,为建立SHV类β-内酰胺酶抑制剂筛选模型研究奠定基础。方法以产blaSHV-5肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板,自行设计一对寡核苷酸引物,通过PCR扩增获得blaSHV-5基因片断,定向克隆入质粒载体pBK-CM V构建重组质粒,对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序鉴定,重组质粒转化大肠埃希菌XL 1-B lue M RF′后,N itrocefin显色结合SDS-PAGE分析目的基因在大肠埃希菌中的表达及其酶活性。结果PCR扩增获得了大小约为900bp的DNA条带,定向克隆入质粒载体pBK-CM V后筛选到大小约为5.4kb的重组质粒,S acⅠ和E coRⅠ双酶切后可切下大小约900bp的插入片段,DNA测序发现插入片断的基因序列与G enB ank中肺炎克雷伯菌基因序列完全一致,重组质粒转化大肠埃希菌XL 1-B lue M RF′后可表达分子量约为31500的重组蛋白。重组菌裂解液对n itrocefin显示出较强水解活性。结论超广谱β-内酰胺酶SHV-5在大肠埃希菌XL 1-B lue M RF′中实现了基因重组表达。为进一步进行酶的纯化等相关后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 blashv-5基因 克隆 表达 酶活性
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SHVβ-内酰胺酶的研究进展 被引量:2
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作者 潘红 黄静芳 杜文娇 《江苏预防医学》 CAS 2018年第5期564-567,共4页
SHVβ-内酰胺酶是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类耐药的主要机制之一。通过不断的点突变,SHVβ-内酰胺酶拓宽了酶作用的底物范围或增加了对酶抑制剂的耐受能力。本文概述了SHVβ-内酰胺酶的起源和多样性、酶特性及检测有关的研究进展。
关键词 Β-内酰胺酶 blashv 超广谱β-内酰胺酶(ESBL) 肠杆菌科
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产碳青霉烯酶KPC-2的肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌的分离与耐药性研究 被引量:2
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作者 胡南霞 殷喆 +5 位作者 李艳君 杨慧盈 杨文慧 王洁 周冬生 马聪 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期123-127,共5页
目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌(KPN)和1株铜绿假单胞菌(PAE)对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法利用种属特异基因PCR扩增、MALDI-TOF质谱技术及细菌16S r DNA测序鉴定细菌种属;采用VITEK 2 Compact系统检测细菌对各类抗生素的最... 目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌(KPN)和1株铜绿假单胞菌(PAE)对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法利用种属特异基因PCR扩增、MALDI-TOF质谱技术及细菌16S r DNA测序鉴定细菌种属;采用VITEK 2 Compact系统检测细菌对各类抗生素的最低抑菌浓度(MIC);应用改良型Carba NP法、质粒抽提、电转化实验、耐药基因PCR扩增及测序,分析细菌编码的β-内酰胺酶基因。结果临床分离的1株KPN和1株PAE及其相应的转化子均产A类酶,PCR扩增测序显示PAE含有blaKPC-2型碳青霉烯酶编码基因,KPN含有blaKPC-2型碳青霉烯酶编码基因和blaSHV型超广谱β-内酰胺酶编码基因。二者的转化子只有blaKPC-2编码基因。结论临床分离的耐碳青霉烯类抗生素的KPN和PAE均携带A类2f组型碳青霉烯酶blaKPC-2编码基因且位于质粒上,而KPN所含的超广谱β-内酰胺酶blaSHV编码基因可能位于不同质粒上,或存在于该菌的染色体上。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 铜绿假单胞菌 blaKPC-2 blashv 质粒
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