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细粒棘球蚴重组蛋白EgG1Y162诱导表达条件的优化及其蛋白结构预测
1
作者 陈娜菲 李小坡 +3 位作者 马西智 彭学臻 曹春宝 周晓涛 《新疆医科大学学报》 2025年第4期426-431,共6页
目的探索优化重组质粒pET30a-EgG1Y162表达条件并预测其蛋白结构模型。方法通过使用EgG1Y162原始菌种进行诱导表达,探索不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,sopropylβ-D-Thiogalactoside)、孵育时间对EgG1Y162蛋白诱导表达水平的影响。... 目的探索优化重组质粒pET30a-EgG1Y162表达条件并预测其蛋白结构模型。方法通过使用EgG1Y162原始菌种进行诱导表达,探索不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,sopropylβ-D-Thiogalactoside)、孵育时间对EgG1Y162蛋白诱导表达水平的影响。原始菌种经诱导表达后,通过超声处理离心得到细菌裂解液上清与沉淀,利用SDS-PAGE分析上清和沉淀中EgG1Y162重组蛋白的表达情况,分析最佳诱导表达条件;纯化蛋白,且通过Western blot鉴定抗原蛋白的表达;利用生物信息学技术预测EgG1Y162蛋白的空间结构模型。结果EgG1Y162蛋白在28℃,IPTG终浓度为0.2 mmoL/L,诱导6 h条件下的表达量较高,蛋白相对分子质量约为25 kDa;用HisTrap纯化柱纯化蛋白,EgG1Y162蛋白在20 mmol/L咪唑浓度的洗脱下,洗脱效果较佳,可获取大量纯化蛋白;纯化蛋白能被鼠抗His-Tag抗体识别,与预期结果相符;生物信息学预测结果显示该蛋白中β折叠占5.00%,无规则卷曲占50.83%,成功构建出EgG1Y162蛋白三级结构模型。结论通过统计学方法获得了重组蛋白EgG1Y162的最佳诱导表达及纯化条件,预测了该蛋白的空间结构,为后续大量获得细粒棘球蚴疫苗抗原蛋白EgG1Y162,进而用于研究其免疫效果与免疫机制创造了条件。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 EgG1Y162 原核表达条件优化 生物信息学
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蔷薇科植物MLO蛋白家族的生物信息学分析 被引量：15
2
作者 向贵生 王开锦 +4 位作者 晏慧君 李淑斌 周宁宁 唐开学 邱显钦 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期2043-2059,共17页
MLO基因家族是一类重要的植物抗病基因,MLO蛋白的突变体对白粉病真菌表现出广谱抗性,且能特异性调控细胞死亡,利用自发的细胞死亡来应答发育或非生物刺激。为了分析蔷薇科植物MLO蛋白的结构特征、系统进化及潜在功能,本研究利用生物信... MLO基因家族是一类重要的植物抗病基因,MLO蛋白的突变体对白粉病真菌表现出广谱抗性,且能特异性调控细胞死亡,利用自发的细胞死亡来应答发育或非生物刺激。为了分析蔷薇科植物MLO蛋白的结构特征、系统进化及潜在功能,本研究利用生物信息学方法对在Gen Bank中已登录的来自于蔷薇科的7个物种共计82条具有完整ORF的MLO基因进行了分析。分析显示这82条蛋白的氨基酸数量、碱基数、分子量差异较小,平均亲水系数为-0.191～0.253,绝大多数具有内含子结构;亚细胞定位主要分布于质膜中,包含5～8个跨膜结构;共有15个保守基序,长度在15～50个氨基酸之间。其中,等电点小于7的仅有1条,6条蛋白具有信号肽。系统进化关系揭示了这些物种间具有较高的同源性和保守性;将其与其它物种中已鉴定的MLO基因进行聚类分析,筛选出32个可能与抗白粉病相关的候选基因;进一步序列比对分析,发现仅有17条基因具有MLO型白粉病基因所有的典型结构。因此,本研究表明,所选用的82条蔷薇科MLO基因中,仅有17条基因可能参与寄主-白粉病菌的互作过程。本研究为进一步研究蔷薇科及其他植物MLO基因的抗病遗传机制提供了一些参考依据。 展开更多
关键词 蔷薇科 MLO基因 抗白粉病 系统进化 生物信息学
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不同米曲霉降解草甘膦能力及其甘氨酸氧化酶的生物信息学分析 被引量：2
3
作者 李浩 高斌 +4 位作者 袁小强 胡明 刘成梅 万茵 付桂明 《南昌大学学报（工科版）》 CAS 2014年第4期328-334,共7页
采用高效液相色谱法测定6株米曲霉菌株发酵液中的草甘膦降解情况,结果表明米曲霉(Aspergillus oryzae)A-FEC04的草甘膦降解率最高,为12.5%。提取6株米曲霉菌株的基因组DNA,PCR扩增后得到甘氨酸氧化酶序列,测序结果发现只有米曲霉A-FEC0... 采用高效液相色谱法测定6株米曲霉菌株发酵液中的草甘膦降解情况,结果表明米曲霉(Aspergillus oryzae)A-FEC04的草甘膦降解率最高,为12.5%。提取6株米曲霉菌株的基因组DNA,PCR扩增后得到甘氨酸氧化酶序列,测序结果发现只有米曲霉A-FEC04发生部分基因突变。米曲霉(Aspergillus oryzae)A-FEC04的ORF DNA序列全长1 263 bp,编码一个由420个氨基酸组成的蛋白质,其理论分子量为46 965.5 Da,理论等电点为5.85,为弱酸性蛋白。对该氨基酸序列进行结构域架构分析,结果表明该序列具有明显的D-氨基酸氧化酶结构域。 展开更多
关键词 米曲霉 草甘膦 生物信息学 降解
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