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β-葡聚糖酶杂合基因bglHAM的克隆及在P.pastoris中的表达 被引量：2
1
作者 苏华波 韦宇拓 +2 位作者 黄鲲 赵颖怡 黄日波 《广西大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2002年第1期10-13,共4页
采用 PCR的方法 ,以 Bacillus macerans总 DNA为模板 ,构建出β 1 ,3 1 ,4葡聚糖酶杂合基因bgl HAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体 p PIC9K重组 ,得到重组质粒 p PIC9K HAM,电脉冲转化法转化酵母菌 GS1 1 5 ,KM71 .在 MM,MD平板上筛选表型 ,... 采用 PCR的方法 ,以 Bacillus macerans总 DNA为模板 ,构建出β 1 ,3 1 ,4葡聚糖酶杂合基因bgl HAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体 p PIC9K重组 ,得到重组质粒 p PIC9K HAM,电脉冲转化法转化酵母菌 GS1 1 5 ,KM71 .在 MM,MD平板上筛选表型 ,YPD G41 8平板上筛选多拷贝重组子 .重组菌株经甲醇诱导后 ,刚果红平板染色法检测到β葡聚糖酶活性 ,SDS PAGE证明表达产物的分子量约为 2 4k D,摇瓶诱导培养筛选到的重组菌株 ,胞外每 m L发酵液最高酶活达 2 40 U. 展开更多
关键词 bglham P.PASTORIS β-1 3-1 4葡聚糖酶 巴斯德毕赤酵母 杂合基因 基因克降 基因表达 PCR扩增
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