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灰葡萄孢G-蛋白Gα亚基基因bcg2和bcg3的功能研究 被引量：3
1
作者 袁雪梅 王敏 +5 位作者 赵晓辉 周帆 刘鹏飞 张康 邢继红 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期63-68,共6页
为明确灰葡萄孢G-蛋白Gα亚基基因bcg2和bcg3在病菌生长、发育和致病过程中的功能,本研究构建了bcg2和bcg3基因的RNAi突变体,以野生型BC22菌株为对照,对bcg2和bcg3基因的RNAi突变体的表型和致病力进行分析,发现bcg2和bcg3基因的RNAi突... 为明确灰葡萄孢G-蛋白Gα亚基基因bcg2和bcg3在病菌生长、发育和致病过程中的功能,本研究构建了bcg2和bcg3基因的RNAi突变体,以野生型BC22菌株为对照,对bcg2和bcg3基因的RNAi突变体的表型和致病力进行分析,发现bcg2和bcg3基因的RNAi突变体的菌落形态、菌核的形成以及菌丝形态均与野生型BC22菌株没有明显差别;bcg2和bcg3基因的RNAi突变体的菌丝生长速率均有不同程度的减慢,分生孢子产量较野生型明显降低;突变体在寄主植物上不能产生明显的致病症状,且丧失穿透能力。结果表明,灰葡萄孢bcg2和bcg3基因正调控病菌的菌丝生长、分生孢子的产量、致病力和穿透能力。 展开更多
关键词 灰葡萄孢 bcg2 bcg3 生长发育 致病力
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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率 被引量：26
2
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期490-493,共4页
目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体p... 目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG，构建重组质粒pBCG—EmⅡ／3；电穿孔法转化BCG，构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗。免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ／3疫苗的表达产物。结果 RT-PCR成功扩增出1680bp的EmⅡ／3抗原编码基因；双酶切证实EmⅡ／3抗原编码基因成功插入pBCG中；PCR证实rBCG—EmⅡ／3疫苗构建成功；免疫印迹分析发现重组BCG—EmⅡ／3疫苗的表达产物在相对分子质量（Mr）约为65×10^3处有明显的目的蛋白表达条带，且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论 成功构建了多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗，为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG—EmⅡ/3疫苗 构建 表达效率
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多房棘球绦虫混合重组BCG—EmⅡ／3和BCG-Em14—3—3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察 被引量：3
3
作者 李文桂 王鸿 +1 位作者 朱佑明 杨梅 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期280-282,共3页
目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG—EmⅡ／3和BCG—Em14—3—3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法12～14周龄、体质量20～25g的雌性Balb／c小鼠40只，鼻腔内接种上述疫苗，在0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周按体质量... 目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG—EmⅡ／3和BCG—Em14—3—3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法12～14周龄、体质量20～25g的雌性Balb／c小鼠40只，鼻腔内接种上述疫苗，在0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周按体质量随机剖杀4只小鼠，经眼球取血，常规酶联免疫吸附试验法测定血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果Balb／c小鼠的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后第2～18周升高，并分别在免疫后第10、4和4周达到最高水平，其值分别为0．095±0．033、0．022±0．001和0．023±0．003，与0周（0．030±0．013、0．012．4-0．004和0．013±0．004）比较，差异有统计学意义（q值分别为2．95、4．87和2．81，P〈0．05或〈0．01）；血清IgG1、IgG3和IgE水平均在免疫后2～18周降低，并分别在免疫后4、2和6周达较低水平，其值分别为0．03±1．004、0．136±0．002和0．114±0．002，与0周（0．192±0．007、0．175±0．013和0．024±0．003）比较，差异有统计学意义（q值分别为5．16、4．93和5．32，P〈0．05或〈0．01）。结论多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG--Em14—3—3疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生辅助性T细胞（TH）Ⅰ型保护性免疫反应。 展开更多
关键词 棘球蚴病 肝 BCG—EmⅡ//3疫苗 BCG—Em14—3—3疫苗 受体 IgG 受体 IGE
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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗促进小鼠脾细胞因子的分泌 被引量：3
4
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第9期966-969,共4页
目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB／C鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB／C鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测脾细胞培养上清液中的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平，同时设有PBS对照。结果疫苗接种组中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～6、2～6、2—10和8～10周升高，分别在免疫后4、4、8和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗在免疫早期（2～8周）即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG—EmⅡ/3疫苗 细胞因子
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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗不同接种途径诱导小鼠细胞因子的研究 被引量：2
5
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期130-132,共3页
目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或Con... 目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组。结论多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个TH1型反应,从而对抗Em原头节攻击感染;疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG—Em14—3—3 疫苗 细胞因子
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多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究 被引量：5
6
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期408-410,共3页
目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫和多房棘球绦虫（Em）原头节攻击后小鼠脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化。方法 Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（... 目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫和多房棘球绦虫（Em）原头节攻击后小鼠脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化。方法 Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。疫苗免疫8周时用Em原头节进行攻击，感染后18周杀鼠取脾，分离脾细胞，流式细胞仪检测脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的百分比。结果 疫苗皮下注射组和鼻腔接种组的脾CD4^＋T细胞亚群比值分别为0．345±0．018、0．314±0．014，与PBS对照组（0．216±0．027）比较明显增高（q值分别为3．93、3．76，P〈0．01）；CD8^＋T细胞亚群比值分别为0．091±0．005、0．083±0．007，与PBS对照组（0．085±0．018）比较无明显变化（q值分别为0．92、0．89，P〉0．05）；CD4^＋／CD8^＋亚群比值分别为3．81±0．30、3．80±0．44，与PBS对照组（2．75±1．08）比较明显增高（q值分别为3.25、3．06，P〈0．01）。皮下注射组的CD4^＋和CD8^＋T细胞亚群数目显著高于鼻腔内接种组（q值分别为3．52、2．63，P〈0．01或〈0．05）。结论 CD4^＋T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用。 展开更多
关键词 棘球蚴病 肝 重组BCG—EmⅡ/3疫苗 T淋巴细胞亚群
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子的变化 被引量：6
7
作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期911-913,共3页
目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫后再以Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠后8周,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染。感染后18周杀鼠取脾,... 目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫后再以Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠后8周,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染。感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,并收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;皮下注射组的TNF-α水平高于鼻腔内接种组。结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可诱导小鼠产生Th1型细胞应答,抵抗Em原头节的攻击感染。疫苗皮下注射途径优于鼻腔内接种。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG—Em II/3疫苗 重组BCG.Eml4-3—3疫苗 细胞因子
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多房棘球绦虫重组BCG—Em14—3—3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响 被引量：4
8
作者 曾莉蓉 李文桂 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期481-483,共3页
目的 检测多房棘球绦虫（Em）重组BCG—Em14—3—3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法 用重组BCG—Em14—3—3疫苗免疫Balb／c小鼠8周后，用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击，攻击感染后18周剖杀小鼠．分离脾细胞，用... 目的 检测多房棘球绦虫（Em）重组BCG—Em14—3—3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法 用重组BCG—Em14—3—3疫苗免疫Balb／c小鼠8周后，用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击，攻击感染后18周剖杀小鼠．分离脾细胞，用刀豆素A（ConA）刺激培养16～18h，然后用Annexin V—FITC染色法检测脾细胞凋亡。结果 小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于磷酸缓冲液（PBS）对照组（P〈0．05或〈0．01）：鼻腔黏膜接种组脾细胞凋亡率显著低于皮下注射组（P〈0．01）；重组BCG疫苗组脾细胞凋亡率显著低于pCD—Em10 DNA疫苗肌肉注射组（P〈0．01）。结论 多房棘球绦虫重组BCG—Em14—3—3疫苗可抑制感染鼠脾细胞发生凋亡．增加CD4^＋细胞亚群的数量，加强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。 展开更多
关键词 棘球蚴病 重组BCG—Em14—3—3疫苗 脾 细胞凋广
暂未订购
多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导的保护力观察 被引量：2
9
作者 蒋光琼 李文桂 +1 位作者 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第7期780-783,共4页
目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦... 目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:混合疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低。结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 重组BCG—EmⅡ/3疫苗 重组BCG—Em14—3—3疫苗 保护力
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