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重组抗菌肽Plectasin的原核表达高密度发酵条件优化及抑菌活性
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作者 苏琰 李融 《食品与机械》 北大核心 2025年第8期39-45,共7页
[目的]构建重组工程菌表达抗菌肽Plectasin,优化重组工程菌的高密度发酵条件,并对优化生产所得重组抗菌肽进行抑菌活性研究。[方法]为提高目的蛋白可溶性表达,依据原核表达系统的密码子偏爱性优化合成plectasin基因,切除信号肽部分,选择... [目的]构建重组工程菌表达抗菌肽Plectasin,优化重组工程菌的高密度发酵条件,并对优化生产所得重组抗菌肽进行抑菌活性研究。[方法]为提高目的蛋白可溶性表达,依据原核表达系统的密码子偏爱性优化合成plectasin基因,切除信号肽部分,选择pET32a(+)表达载体,构建重组质粒pET32a-plectasin,导入大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)/pLysS。设计单因素试验和正交试验对重组工程菌的20 L高密度发酵参数进行优化。对优化条件后生产获得Plectasin进行纯化鉴定并对其抑菌活性进行分析。[结果]研究成功构建E.coli BL21(DE3)pLysS/pET32aplectasin表达菌株,优化后20 L高密度发酵工艺条件为:诱导温度30℃,接种量2%。发酵时长15 h,纯化后重组蛋白质量浓度为(0.62±0.02) g/L。表达产物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,ATCC 25923)的最小抑菌质量浓度为32μg/mL。[结论]通过优化原核表达高密度发酵条件提高了重组Plectasin的可溶性表达产量,发酵产物对金黄色葡萄球菌表现出一定的抑菌活性。 展开更多
关键词 高密度发酵 可溶性表达 Plectasin 分批补料培养 抑菌活性
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流加培养与氧调控协同提高大肠杆菌产L⁃苏氨酸
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作者 王泽建 银肖剑 +4 位作者 郭文慧 吕莹 范晓光 栗波 梁剑光 《食品研究与开发》 2025年第5期160-166,共7页
以实验室1株大肠杆菌为出发菌株,首先将活化后的大肠杆菌菌液按照5%接种量接种至优化后的发酵罐培养基中进行培养,调节控制溶解量不低于15%,并实时流加葡萄糖酸钠、磷酸甜菜碱和玉米浆干粉混合溶液,控制细胞的氧消耗速率(oxygen uptake ... 以实验室1株大肠杆菌为出发菌株,首先将活化后的大肠杆菌菌液按照5%接种量接种至优化后的发酵罐培养基中进行培养,调节控制溶解量不低于15%,并实时流加葡萄糖酸钠、磷酸甜菜碱和玉米浆干粉混合溶液,控制细胞的氧消耗速率(oxygen uptake rate,OUR)为215 mmol/(L·h),通过在线氧消耗速率控制系统、补料控制与OUR调节的作用关系,获得最优流加补料方案:流加25%氨水控制pH值,调整转速和通气控制溶氧15%以上,当溶氧开始回升时流加质量浓度为65%的葡萄糖,起始流加速度1 g(/L·h),控制残糖浓度不超过1.0 g/L。结果表明:L⁃苏氨酸产量提高了35%,达到155 g/L。 展开更多
关键词 L⁃苏氨酸 氧消耗速率 优化调控 流加培养 大肠杆菌
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光及补氮诱导对三角褐指藻岩藻黄素合成积累的影响
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作者 李玉芹 钟亮 +1 位作者 孟醒 彭宗凡 《湘潭大学学报(自然科学版)》 2025年第1期1-10,共10页
该文探究了光及补氮诱导培养模式对三角褐指藻岩藻黄素合成积累的影响.研究结果显示,在光照色温4000 K、光照周期21 h(光照)∶3 h(黑暗)、初始光照强度4000 lux诱导培养192 h后光照强度降至3000 lux条件下,获得的三角褐指藻岩藻黄素含... 该文探究了光及补氮诱导培养模式对三角褐指藻岩藻黄素合成积累的影响.研究结果显示,在光照色温4000 K、光照周期21 h(光照)∶3 h(黑暗)、初始光照强度4000 lux诱导培养192 h后光照强度降至3000 lux条件下,获得的三角褐指藻岩藻黄素含量和产量分别为13.67 mg·g^(-1)和44.93 mg·L^(-1),分别为未进行光诱导培养模式的1.31倍和1.77倍.在此最佳光诱导条件下,流加补氮培养进一步提升了三角褐指藻生物量、岩藻黄素含量和产量,分别达到4.46 g·L^(-1)、15.77 mg·g^(-1)和70.62 mg·L^(-1),较未进行光及补氮诱导培养模式分别提高了1.89倍、1.51倍和2.78倍.实验证实了光优化及流加补氮培养可有效促进三角褐指藻生物量和岩藻黄素积累,且培养获得的岩藻黄素微生物和重金属含量均符合GB 26405—2011标准.研究结果为利用三角褐指藻规模化生产岩藻黄素及应用提供了新思路. 展开更多
关键词 三角褐指藻 光诱导 流加补氮 生物量 岩藻黄素
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双酶偶联一锅法高效合成虎杖苷 被引量:2
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作者 戴景莉 闫子旭 +4 位作者 赵科学 李小利 臧永军 徐麒麟 朱富成 《生物工程学报》 北大核心 2025年第1期461-473,共13页
虎杖是传统中药之一,其主要活性成分虎杖苷具有调节糖代谢、脂代谢、镇咳平喘、抗菌抗炎等药理作用,但传统的虎杖苷制备方法不足以满足当下市场需求。本研究聚焦于绿色高效的虎杖苷制备方法,在已获得的糖基转移酶UGTBS三联突变体IGW(Y14... 虎杖是传统中药之一,其主要活性成分虎杖苷具有调节糖代谢、脂代谢、镇咳平喘、抗菌抗炎等药理作用,但传统的虎杖苷制备方法不足以满足当下市场需求。本研究聚焦于绿色高效的虎杖苷制备方法,在已获得的糖基转移酶UGTBS三联突变体IGW(Y14I/I62G/M315W)基础上,以白藜芦醇为底物,通过双酶偶联一锅法生物催化高效制备虎杖苷,同时实现尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate-glucose,UDPG)的循环再生。对双酶偶联催化体系进行条件优化,在35℃,pH为8.0,IGW:AtSuSy1酶活比3:4,二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)体积比5%,尿苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)浓度0.10 mmol/L,蔗糖浓度0.6 mol/L的条件下,1 h内2 mmol/L白藜芦醇的转化率可达80.6%,虎杖苷的产物占比可达90%以上。本研究通过双酶偶联体系实现了UDPG的循环再生,缩短了反应时间,同时探究了分批补料策略,在一锅法偶联反应中24 h虎杖苷产量可达到6.28 g/L。本研究为绿色高效制备虎杖苷提供了新的策略。 展开更多
关键词 糖基转移酶 虎杖苷 一锅法偶联反应 尿苷二磷酸葡萄糖的再生 分批补料策略
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基于温和预处理玉米秸秆的酶解糖化工艺研究
5
作者 张欢欢 林钰程 +4 位作者 王圆圆 赵世强 杜朝军 赵子高 常春 《可再生能源》 北大核心 2025年第2期143-151,共9页
秸秆类生物质的预处理和酶解是实现其高值化转化、利用的关键技术之一。文章以玉米秸秆为原料,对甲酸、亚氯酸钠和碱性过氧化氢预处理方法进行了研究和比较。采用扫描电镜、X射线衍射和傅里叶变换红外光谱等方法对预处理前后玉米秸秆的... 秸秆类生物质的预处理和酶解是实现其高值化转化、利用的关键技术之一。文章以玉米秸秆为原料,对甲酸、亚氯酸钠和碱性过氧化氢预处理方法进行了研究和比较。采用扫描电镜、X射线衍射和傅里叶变换红外光谱等方法对预处理前后玉米秸秆的组成、形貌、晶体结构和官能团进行了分析。经过甲酸、亚氯酸钠和碱性过氧化氢预处理后,木质素去除率分别为66.71%,97.12%和91.88%,酶解率分别达到63.26%,71.83%和95.14%。在纤维素酶添加量为19.6 FPU/g,木聚糖酶添加量为35.44 IU/g,吐温80添加量为20.96 mg/g的条件下,碱性过氧化氢预处理后玉米秸秆的预测酶解率为95.57%,实际酶解率为94.42%。高固体酶解的最佳补料策略是初始底物浓度为8%,在6,12,24 h分别添加4%的底物,酶解120 h后,酶解率达到87.57%。 展开更多
关键词 玉米秸秆 预处理 高固酶解 分批补料
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DL-丙氨酸不对称降解菌Penicillium levitum Slu-B的筛选及D-丙氨酸制备条件的优化
6
作者 黄文英 吴冬杰 顾向阳 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1053-1059,共7页
[目的]本文旨在对1株新分离的青霉属菌株Slu-B进行菌种鉴定,研究其不对称降解DL-丙氨酸的特性及制备D-丙氨酸的可行性。[方法]从环境样中分离筛选高效不对称降解DL-丙氨酸的真菌菌株,通过显微形态观察及rDNA ITS基因序列同源性比对将分... [目的]本文旨在对1株新分离的青霉属菌株Slu-B进行菌种鉴定,研究其不对称降解DL-丙氨酸的特性及制备D-丙氨酸的可行性。[方法]从环境样中分离筛选高效不对称降解DL-丙氨酸的真菌菌株,通过显微形态观察及rDNA ITS基因序列同源性比对将分离菌株鉴定至相应的种;以DL-丙氨酸为唯一碳氮源,通过摇瓶试验研究培养温度、培养基pH、酵母粉添加量、摇床转速、装液量、接种量等对该菌株不对称降解活性的影响;探究分批补料发酵制备D-丙氨酸的可行性。[结果]分离到1株不对称降解指数(ADI)值为1的不对称降解DL-丙氨酸的真菌菌株Slu-B,依据其显微形态特征及ITS序列同源性将该菌株鉴定为Penicillium levitum(平滑青霉)。摇瓶试验得出菌株Slu-B不对称降解DL-丙氨酸的最适发酵条件:培养温度25~35℃、培养基pH 4~6、摇床转速140~200 r·min^(-1)、装液量50~100 mL·500 mL^(-1)、接种量2.32 g·100 mL^(-1),在此条件下分批补料发酵,当L-丙氨酸被完全降解时发酵液中积累的D-丙氨酸质量浓度达9.68 g·L^(-1),D-丙氨酸的理论回收率达96.75%。[结论]分离菌株Penicillium levitum Slu-B具有完全不对称降解DL-丙氨酸的特性,在分批补料发酵中D-丙氨酸的理论回收率高达96.75%,为生物法制备D-丙氨酸积累了新的菌种资源。 展开更多
关键词 不对称降解指数 DL-丙氨酸 D-丙氨酸 平滑青霉 分批补料发酵
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高产维生素B乳酸菌的筛选、鉴定及培养优化的研究
7
作者 许媛 韩建邦 +4 位作者 祝晨琳 王欣雨 孙颖盈 陈雨濛 金海如 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第2期15-22,共8页
为获得高产维生素B乳酸菌菌株,优化培养条件及发酵方式。从三种不同酸菜中分离纯化出乳酸菌,通过荧光分光光度法、HPLC法筛选出1株高产维生素B的菌株SC-65,对其进行形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析;运用单因素分析和正交实... 为获得高产维生素B乳酸菌菌株,优化培养条件及发酵方式。从三种不同酸菜中分离纯化出乳酸菌,通过荧光分光光度法、HPLC法筛选出1株高产维生素B的菌株SC-65,对其进行形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析;运用单因素分析和正交实验确定最佳培养条件和最佳培养基浓度;最后通过发酵罐扩大培养,分析其对菌株生物量及维生素B浓度的影响。结果显示,菌株SC-65为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。确定接种量5%(体积分数)、温度37℃、装液量50%、pH 6.0、葡萄糖20.0 g/L、蛋白胨10.0 g/L,磷酸盐体系0.35 g/L为最佳培养方案。补料分批发酵细胞生物量为11.94 g/L,维生素B浓度为15.50 mg/L,相比于分批发酵生物量(质量分数)提高117.10%,维生素B浓度(质量分数)提高40.91%。该研究结果为进一步优化菌株的生产工艺,开发乳酸菌发酵产维生素B的应用提供参考。 展开更多
关键词 维生素B 乳酸菌 生物量 培养优化 发酵方式 补料发酵
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基于双酶偶联高效合成红景天苷
8
作者 闫子旭 戴景莉 +4 位作者 赵科学 李小利 徐雅婷 马静波 朱富成 《生物学杂志》 北大核心 2025年第5期75-80,共6页
为实现红景天苷绿色高效制备,在前期分子改造获得糖基转移酶高效突变体TW(S129T/F168W)的基础上,构建双酶偶联一锅法催化酪醇合成红景天苷反应体系,对温度、pH、尿苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)、蔗糖、酪醇、金属离子和双酶比例... 为实现红景天苷绿色高效制备,在前期分子改造获得糖基转移酶高效突变体TW(S129T/F168W)的基础上,构建双酶偶联一锅法催化酪醇合成红景天苷反应体系,对温度、pH、尿苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)、蔗糖、酪醇、金属离子和双酶比例进行优化,在最优条件下进行分批补料反应,实现尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate-glucose,UDPG)的循环再生,提高红景天苷产量。结果表明:双酶偶联催化酪醇合成红景天苷最佳条件为温度35℃,pH 8.0,UDP浓度0.5 mmol/L,蔗糖浓度1 mol/L,酪醇浓度5 mmol/L,Ca^(2+)浓度5 mmol/L,突变体TW∶AtSuSy的酶活比0.5∶6;在10 mL反应体系中通过分批补料策略获得10.3 g/L的红景天苷。结合分子对接探究突变体催化酪醇合成红景天苷分子机制,为绿色高效制备红景天苷奠定基础。 展开更多
关键词 糖基转移酶 红景天苷 双酶偶联 UDPG再生 分批补料
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ARTP诱变选育高产DHA裂殖壶菌及其发酵条件优化
9
作者 张标城 陈淑贞 林玟静 《药物生物技术》 2025年第2期141-146,共6页
二十二碳六烯酸(DHA)是一种重要的ω-3脂肪酸,在支持人类健康方面发挥着重要作用,它能够促进大脑功能、心血管健康以及免疫系统的正常运行。在微生物合成的宿主中,裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)因其能够积累高水平的脂质而成为DHA生产... 二十二碳六烯酸(DHA)是一种重要的ω-3脂肪酸,在支持人类健康方面发挥着重要作用,它能够促进大脑功能、心血管健康以及免疫系统的正常运行。在微生物合成的宿主中,裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)因其能够积累高水平的脂质而成为DHA生产最具潜力的工业菌株之一。然而,裂殖壶菌的细胞生物量和DHA产量直接影响生产成本,提高其生产效率仍然是一个重要挑战。传统的菌株改良方法,如化学和物理诱变,通常存在效率低、精确性不足以及使用毒性诱变剂等缺点。本研究采用常温常压等离子体(ARTP)诱变技术,这是一种高效且环境友好的方法,开发了一种稳定的高DHA产量裂殖壶菌菌株。为了提高筛选效率,在筛选过程中使用丙二酸作为抑制剂,选择快速生长且高DHA产量的突变菌株。经过两轮严格筛选,成功分离出性能优异的突变菌株Schizochytrium sp.FN7-50。为了进一步提高DHA产量并降低生产成本,系统研究了常规及复合碳源和氮源对细胞生长、油脂积累及DHA合成的影响。通过发酵条件优化,在摇瓶培养条件下,该突变株的生物量、总油脂产量和DHA产量分别达到44.32、24.52和12.72 g/L。随后,为验证其工业应用潜力,在3 L发酵罐中进行了发酵试验,FN7-50突变株的DHA滴度达到28.17 g/L,相较于母株显著提升。脂肪酸组成分析显示,DHA在总脂质中的比例较高,进一步证实该菌株适合商业化DHA生产。本研究通过ARTP诱变及发酵优化,提供了一种有效的裂殖壶菌高DHA产量菌株构建策略,为工业化DHA生产提供了一种可持续且可扩展的解决方案。 展开更多
关键词 常温常压等离子体 裂殖壶菌 二十二碳六烯酸 碳氮源 发酵条件优化 补料分批发酵
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南荻纤维素分批补料同步糖化发酵产乙醇工艺优化及其结构表征
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作者 齐慧 彭志利 +5 位作者 陈亮 刘安 邓明 王克勤 苏小军 武小芬 《可再生能源》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1578-1586,共9页
文章以南荻纤维素为原料,采用分批补料同步糖化发酵工艺生产生物乙醇,分析了底物初始质量分数、底物最终质量分数、补料次数对乙醇产量的影响,并在此基础上采用正交试验进行工艺优化,获得最佳工艺参数:底物初始质量分数为17.5%,分批补料... 文章以南荻纤维素为原料,采用分批补料同步糖化发酵工艺生产生物乙醇,分析了底物初始质量分数、底物最终质量分数、补料次数对乙醇产量的影响,并在此基础上采用正交试验进行工艺优化,获得最佳工艺参数:底物初始质量分数为17.5%,分批补料2次至底物最终质量分数为32.5%。在此条件下,乙醇含量最高可达70.15 g/L,较未补料同步糖化发酵过程获得的最大乙醇含量提高23.36%。在分批补料同步糖化发酵最佳工艺的基础上,做了物料平衡分析,并采用扫描电镜、傅里叶变换红外光谱、X-衍射对发酵前、后的南荻纤维素结构进行表征,结果显示,酶解糖化及发酵过程会改变南荻纤维素的内部结构,使氢键或共价键断裂,底物结晶度提高。 展开更多
关键词 南荻纤维素 分批补料 同步糖化发酵产乙醇 工艺优化 物料平衡 结构表征
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批式流加发酵中的鲁棒脉冲时滞最优控制
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作者 宫召华 时郭庆 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第3期376-382,共7页
本文研究了批式流加发酵中的鲁棒脉冲时滞最优控制问题。首先,提出一个非线性状态依赖的脉冲时滞系统描述批式流加发酵甘油生产1,3-丙二醇(1,3-PD)过程。由于批式流加发酵过程中的动力学参数难以准确估计,本文建立了一个具有连续状态不... 本文研究了批式流加发酵中的鲁棒脉冲时滞最优控制问题。首先,提出一个非线性状态依赖的脉冲时滞系统描述批式流加发酵甘油生产1,3-丙二醇(1,3-PD)过程。由于批式流加发酵过程中的动力学参数难以准确估计,本文建立了一个具有连续状态不等式约束的鲁棒脉冲时滞最优控制模型。这里,目标函数为终端时刻1,3-PD浓度及其关于动力学参数的灵敏性的加权和,控制向量为流加发生时甘油的临界浓度及每次流加时甘油的流加体积。然后,通过引入辅助脉冲系统,将该鲁棒最优控制问题转化为等价的标准最优控制问题。进一步,通过约束转换技术,将等价的最优控制问题转化为仅具有盒式约束的罚问题。最后,设计了一种并行差分进化算法求解转化后的罚问题。数值结果表明:当参数受到微小扰动时,尽管牺牲了少量的1,3-PD浓度,但是明显提高了系统的鲁棒性。 展开更多
关键词 非线性脉冲系统 最优控制 约束转换 差分进化算法 批式流加发酵
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补料分批发酵优化氧化葡糖杆菌UZ209发酵产酸工艺 被引量:2
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作者 魏颖 张珂 +2 位作者 李静 陈勇 谭海刚 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第6期93-99,共7页
醋酸菌作为氧化乙醇生成乙酸的主要菌种,其产酸能力备受关注。氧化葡糖杆菌具有不完全氧化糖和糖醇的特性,可以产生多种类的有机酸,提升食醋风味,但相较于醋酸杆菌属,其产酸能力和乙醇耐受能力较低,限制了其在食醋工业中的应用。本研究... 醋酸菌作为氧化乙醇生成乙酸的主要菌种,其产酸能力备受关注。氧化葡糖杆菌具有不完全氧化糖和糖醇的特性,可以产生多种类的有机酸,提升食醋风味,但相较于醋酸杆菌属,其产酸能力和乙醇耐受能力较低,限制了其在食醋工业中的应用。本研究通过优化氧化葡糖杆菌UZ209的培养基成分和补料分批发酵方式提高其发酵液总酸含量。结果表明,最佳发酵培养基为:2%葡萄糖、1%酵母浸粉、8%乙醇。补料分批发酵可以显著提高氧化葡糖杆菌UZ209的生长和发酵特性,在乙醇含量为3%的液体发酵培养基中补料分批发酵的最佳方式为按照吸光值补料,最佳补料吸光值为OD6000.8±0.025。在此条件下,5%和6%乙醇补料分批发酵8 d的总酸含量分别为(7.42±0.16)和(6.95±0.45)g/100mL,分别比对照组提高了18.91%和15.04%。 展开更多
关键词 氧化葡糖杆菌 补料分批发酵 总酸
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重组Ⅰ型人源化胶原蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化 被引量:2
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作者 滕飞 柯博文 +3 位作者 全冰华 王勇 易祥 韩双艳 《现代食品科技》 北大核心 2024年第12期41-48,共8页
胶原蛋白(Collagen)目前广泛应用于食品、医疗、美容等领域,然而,重组胶原蛋白存在包涵体形式表达及纯度较低等问题,限制了其规模化生产及制备应用。该研究在Ⅰ型人源化胶原蛋白hCOL1A1的基础上,在其N末端融合了小分子泛素样修饰蛋白(SU... 胶原蛋白(Collagen)目前广泛应用于食品、医疗、美容等领域,然而,重组胶原蛋白存在包涵体形式表达及纯度较低等问题,限制了其规模化生产及制备应用。该研究在Ⅰ型人源化胶原蛋白hCOL1A1的基础上,在其N末端融合了小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)和6×His标签,构建了重组表达载体pET21a(+)-SUMO-hCOL1A1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。通过对工程菌BL21(DE3)/pET21a(+)-SUMO-hCOL1A1进行IPTG诱导表达、培养条件的优化及蛋白的分离纯化,实现了重组Ⅰ型人源化胶原蛋白hCOL1A1在大肠杆菌中的可溶性表达及有效纯化。工程菌破碎上清经Ni-NTA亲和层析、TEV酶切、离子交换层析纯化,可收获纯度95%以上的hCOL1A1蛋白。所确定的25℃诱导培养温度,添加0.4 mmol/L IPTG的最佳诱导培养条件,进一步在5 L发酵罐进行分批补料发酵放大,最终蛋白产量达到1.43 g/L。该研究实现了hCOL1A1蛋白的可溶表达、5 L发酵罐生产及纯化,为重组胶原蛋白大规模生物合成及纯化提供了参考。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原蛋白 重组人源化胶原蛋白 融合表达 蛋白纯化 分批补料发酵
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高温产2,3-丁二醇甲基芽孢杆菌的筛选及其发酵优化
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作者 林燕环 陈飞雪 +3 位作者 魏宸鑫 李润志 张燎原 林辉 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期98-106,共9页
2,3-丁二醇是一种典型的大宗化学品,广泛应用于化工、食品、医药、燃料等领域。生物法发酵制备2,3-丁二醇是当下的主要方法,然而,大多数报道的菌株为条件致病菌且发酵条件严格,限制了生物法制备2,3-丁二醇的发展。该研究以温泉底土壤为... 2,3-丁二醇是一种典型的大宗化学品,广泛应用于化工、食品、医药、燃料等领域。生物法发酵制备2,3-丁二醇是当下的主要方法,然而,大多数报道的菌株为条件致病菌且发酵条件严格,限制了生物法制备2,3-丁二醇的发展。该研究以温泉底土壤为试验材料,经过分离、筛选与鉴定获得了1株高温条件下产2,3-丁二醇的甲基芽孢杆菌。通过摇瓶实验优化发酵工艺,确定最适发酵条件与最优培养基组成,利用优化后的发酵工艺甲基芽孢杆菌发酵24 h产物产量达到32.57 g/L。进一步进行上罐试验,基于不同发酵罐转速条件下甲基芽孢杆菌的产量积累情况,理性设计两阶段发酵策略,并以最优策略分批补料发酵制备2,3-丁二醇,2,3-丁二醇的产量在甲基芽孢杆菌发酵45 h时达到73.19 g/L,转化率达到90.25%。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 甲基芽孢杆菌 高温发酵 发酵优化 分批补料发酵
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热带假丝酵母β-紫罗兰酮工程菌的构建及其发酵优化
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作者 徐洁 夏媛媛 +2 位作者 沈微 杨海泉 陈献忠 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第13期9-15,共7页
β-紫罗兰酮是一种来源于植物的不规则单萜化合物,具有良好的驱虫、抗菌、抗癌和抗氧化等生物活性,广泛应用于农业、食品、医药和香精香料等行业。热带假丝酵母是潜在的萜类高效合成底盘细胞。为了提高β-紫罗兰酮产量,该研究在课题组... β-紫罗兰酮是一种来源于植物的不规则单萜化合物,具有良好的驱虫、抗菌、抗癌和抗氧化等生物活性,广泛应用于农业、食品、医药和香精香料等行业。热带假丝酵母是潜在的萜类高效合成底盘细胞。为了提高β-紫罗兰酮产量,该研究在课题组前期构建的β-紫罗兰酮工程菌的基础上,通过酶的亚细胞区室组合,构建了一株β-紫罗兰酮合成关键基因PhCCD1,同时在其胞质、过氧化物酶体和脂滴表达的β-紫罗兰酮工程菌PCL-01;然后,对其摇瓶发酵培养基装液量、培养基碳氮比、发酵温度和辅因子Fe^(2+)浓度等条件进行优化;最后进行5 L发酵罐小试。工程菌PCL-01的β-紫罗兰酮摇瓶产量为152.4 mg/L,较出发菌株增加50%;经过摇瓶发酵优化,β-紫罗兰酮产量为185.8 mg/L,提升22%;最后,在5 L发酵罐上可达403.9 mg/L。该研究对于其他萜类物质合成的菌株代谢改造具有借鉴意义,亦可为其他菌种发酵性能的研究提供参考价值。 展开更多
关键词 热带假丝酵母 Β-紫罗兰酮 亚细胞器工程 过氧化物酶体 脂滴 发酵优化 补料分批发酵
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重组大肠杆菌合成L-甲硫氨酸的发酵过程优化 被引量:2
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作者 牛坤 梅子龙 +4 位作者 管安奇 蔡文斌 陈懋钦 柳志强 郑裕国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期895-907,共13页
L-甲硫氨酸作为唯一含有硫元素的必需氨基酸,在生物体内具有非常重要的生理和生化功能,而微生物发酵法合成L-甲硫氨酸因其发酵水平较低仍未达到工业化生产要求。本文在实验室前期构建的L-甲硫氨酸高产菌株大肠杆菌(Escherichia coli)W3... L-甲硫氨酸作为唯一含有硫元素的必需氨基酸,在生物体内具有非常重要的生理和生化功能,而微生物发酵法合成L-甲硫氨酸因其发酵水平较低仍未达到工业化生产要求。本文在实验室前期构建的L-甲硫氨酸高产菌株大肠杆菌(Escherichia coli)W3110ΔIJAHFEBC trc-fliY trc-malY/PAM glyA-22 metF的基础上系统优化了其发酵过程,在优化初始葡萄糖浓度的基础上,比较了DO-Stat、pH-Stat、控残糖浓度和恒速补料等不同补料工艺对L-甲硫氨酸发酵生产的影响,发现葡萄糖的控制对发酵过程有较大影响。在上述研究的基础上,进一步开发了最优的分批补料发酵工艺,使L-甲硫氨酸发酵产量提高到31.71 g/L,发酵时间缩短为68 h,是目前报道的最高产量。同时,建立了最优分批补料工艺下的发酵动力学模型,较好地拟合了L-甲硫氨酸发酵生产过程,为L-甲硫氨酸的发酵法生产提供了一定的数据参考。 展开更多
关键词 L-甲硫氨酸 发酵法生产 分批补料发酵 过程优化
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HIP1过表达对酿酒酵母工程菌麦角硫因产量的影响
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作者 王文欣 王文悦 +5 位作者 刘子雄 上官玲玲 张辉燕 安斐然 陈雄 代俊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期8-15,共8页
麦角硫因是一种普遍存在于高等动植物体内的天然抗氧化剂,具有减少细胞氧化损伤、抗炎和治疗相关疾病的能力,被广泛应用于食品、化妆品和医药行业。与传统的植物提取法及化学合成法相比,通过微生物合成法制备麦角硫因具有周期短、成本... 麦角硫因是一种普遍存在于高等动植物体内的天然抗氧化剂,具有减少细胞氧化损伤、抗炎和治疗相关疾病的能力,被广泛应用于食品、化妆品和医药行业。与传统的植物提取法及化学合成法相比,通过微生物合成法制备麦角硫因具有周期短、成本低和产量高等优势。该研究以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CEN.PK113-5D为出发菌株,利用CRISPR/Cas9系统向其基因组中引入异源酶基因,构建具有完整麦角硫因生物合成途径的酿酒酵母工程菌。为进一步提高其产量,过表达组氨酸特异性转运蛋白Hip1p后,在仅有0.5 mmol/L组氨酸供给条件下,菌株胞内游离组氨酸水平显著提高,且麦角硫因产量提高10%。最终经摇瓶发酵72 h产量达(6.88±0.11)mg/L,而在5 L罐补料分批发酵策略下,培养72 h后麦角硫因产量达237.34 mg/L。该研究为后续代谢工程改造产麦角硫因酿酒酵母工程菌株提供靶基因参考。 展开更多
关键词 酿酒酵母 麦角硫因 异源表达 生物合成 组氨酸转运 补料分批发酵
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一株法夫酵母虾青素高产菌株的生产性能 被引量:15
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作者 倪辉 洪清林 +3 位作者 肖安风 李利君 蔡慧农 苏文金 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1065-1075,共11页
为了评价虾青素高产菌株-法夫酵母JMU-MVP14的生产性能及建立虾青素高产发酵技术,通过测定糖、生物量、虾青素产量、总类胡萝卜素产量等发酵参数,用摇瓶试验对比了法夫酵母JMU-MVP14和出发菌株的差异,用7 L罐试验对比了pH值调控方式及... 为了评价虾青素高产菌株-法夫酵母JMU-MVP14的生产性能及建立虾青素高产发酵技术,通过测定糖、生物量、虾青素产量、总类胡萝卜素产量等发酵参数,用摇瓶试验对比了法夫酵母JMU-MVP14和出发菌株的差异,用7 L罐试验对比了pH值调控方式及补料培养基成分对发酵的影响,用1 m3罐试验评估了法夫酵母JMU-MVP14高密度发酵虾青素的产量水平。摇瓶发酵结果表明,法夫酵母JMU-MVP14虾青素及总类胡萝卜素的细胞产率分别达到6.01 mg/g及10.38 mg/g;7 L罐分批发酵试验结果表明,自动流加调控pH值比间歇调控pH更有利于该法夫酵母的生长及虾青素合成;法夫酵母JMU-MVP14的μmax和Ks分别为0.20 h?1及21.73 g/L,其虾青素合成的模型为部分生长关联型。7 L罐补料分批发酵试验表明,在发酵过程中只补充糖液而不补充酵母膏及玉米浆有利于高密度、高产发酵虾青素;7 L罐补料分批发酵的生物量、虾青素和总类胡萝卜素的体积产率、虾青素和总类胡萝卜素的细胞产率分别达到了32.81 g/L、155.99 mg/L、399.99 mg/L、4.94 mg/g、12.19 mg/g。1 m3罐中试补料分批发酵的生物量、虾青素和总类胡萝卜素的体积产率、虾青素和总类胡萝卜素的细胞产率分别达到85.11 g/L、279.96 mg/L、618.01 mg/L、3.29 mg/g和7.26 mg/g;法夫酵母JMV-MVP14细胞中的蛋白质、总糖、脂肪含量分别为21.54%、41.34%和34.31%。该菌株具有很强的虾青素生产能力及良好的综合利用价值,能大幅度提高虾青素的发酵生产水平。 展开更多
关键词 法夫酵母 虾青素 高产菌株 动力学 补料分批发酵
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间歇补料分批发酵提高纳他霉素产量 被引量:23
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作者 何艳玲 邬建国 +1 位作者 路福平 杜连祥 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期224-226,共3页
对间歇补料分批发酵提高纳他霉素产量的工艺进行了研究,结果表明,在5L自动发酵罐条件下,初始葡萄糖浓度40g/L,以发酵液中的还原糖为控制指标,当还原糖降至2%以下时开始间歇补糖使葡萄糖浓度维持在2%,葡萄糖流加总量为20-25g/L,在最佳... 对间歇补料分批发酵提高纳他霉素产量的工艺进行了研究,结果表明,在5L自动发酵罐条件下,初始葡萄糖浓度40g/L,以发酵液中的还原糖为控制指标,当还原糖降至2%以下时开始间歇补糖使葡萄糖浓度维持在2%,葡萄糖流加总量为20-25g/L,在最佳的间歇补料分批发酵工艺下,使纳他霉素的产量从1.5g/L提高到2.3g/L,提高率为35%。 展开更多
关键词 间歇补料 发酵 纳他霉素 产量
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rCHO细胞在葡萄糖限制流加培养过程中的生长与代谢特性 被引量:14
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作者 高量 游磊 +1 位作者 朱明龙 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期74-78,共5页
以调控rCHO细胞的葡萄糖代谢为主要研究目标,通过在2L生物反应器中进行的批培养和葡萄糖限制恒速流加培养的方法,考察了在培养过程中葡萄糖浓度对rCHO细胞生长、葡萄糖和谷氨酰胺消耗,以及副产物乳酸、氨和丙氨酸生成的影响。结果表明:... 以调控rCHO细胞的葡萄糖代谢为主要研究目标,通过在2L生物反应器中进行的批培养和葡萄糖限制恒速流加培养的方法,考察了在培养过程中葡萄糖浓度对rCHO细胞生长、葡萄糖和谷氨酰胺消耗,以及副产物乳酸、氨和丙氨酸生成的影响。结果表明:葡萄糖限制的流加培养过程中,活细胞密度XV达到2.35×106cells·mL-1,较批培养提高一倍;而乳酸生成大幅减少。在葡萄糖限制培养阶段,qLac和YLac/Gluc持续降低至零,而qo2/qGluc由0.7mmol·mmol-1上升至4.3mmol·mmol-1,说明更多葡萄糖进入高效释能代谢途径。同时谷氨酰胺的消耗增加,YAmm/Gln增大,YAla/Gln下降,证明谷氨酰胺的能量利用率也有所提高。 展开更多
关键词 批培养 流加培养 葡萄糖限制 CHO细胞
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