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坏死性凋亡在奶牛乳房炎源性无乳链球菌诱导bMECs炎性反应中的机制研究 被引量:1
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作者 王月 陈莉 +1 位作者 邓昭举 韩博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期1-13,共13页
奶牛乳房炎是牧场最常见的疾病之一,无乳链球菌引发的奶牛乳房炎在发达国家和我国的流行率逐年上升。假激酶混合谱系激酶样蛋白(MLKL)是细胞坏死性凋亡的关键信号蛋白,当MLKL被磷酸化激活后,可易位至细胞膜并诱导膜透化,从而导致坏死性... 奶牛乳房炎是牧场最常见的疾病之一,无乳链球菌引发的奶牛乳房炎在发达国家和我国的流行率逐年上升。假激酶混合谱系激酶样蛋白(MLKL)是细胞坏死性凋亡的关键信号蛋白,当MLKL被磷酸化激活后,可易位至细胞膜并诱导膜透化,从而导致坏死性凋亡。为了探究MLKL介导的坏死性凋亡在无乳链球菌诱导奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)炎性反应中的分子机制,本试验通过构建无乳链球菌C28和B19菌株感染bMECs的体外模型,采用Annexin V-FITC/PI双染法、Western blot试验、免疫荧光和酶联免疫吸附试验对凋亡、坏死、坏死性凋亡和炎性指标进行检测。结果显示,与感染0 h相比,C28和B19菌株感染9 h时bMECs凋亡细胞数量开始下降,坏死细胞数量增多,丝氨酸/苏氨酸激酶3(RIPK3)和磷酸化假激酶混合谱系激酶样蛋白(p-MLKL)表达量显著升高(P<0.05或P<0.01),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)表达量显著降低(P<0.05),表明无乳链球菌诱导bMECs死亡的方式为程序性坏死。无乳链球菌诱导bMECs中大量MLKL定位至线粒体,p-MLKL向细胞膜转位。与C28和B19菌株感染组相比,沉默MLKL基因可显著降低p-MLKL表达量(P<0.05),表明MLKL参与无乳链球菌诱导的bMECs程序性坏死。与C28和B19菌株感染组相比,沉默MLKL基因可显著降低无乳链球菌诱导的bMECs中核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)和含半胱天冬酶募集结构域表达的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达量(P<0.05),极显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18的释放量(P<0.01,P<0.001或P<0.000 1)。结果表明,MLKL作为无乳链球菌诱导bMECs引发坏死性凋亡的执行蛋白,可激活bMECs中NLRP3炎性小体信号通路,最终促进炎性反应的发生。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 无乳链球菌 奶牛乳腺上皮细胞(bmecs) 坏死性凋亡 假激酶混合谱系激酶样蛋白(MLKL)
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冰片通过下调TLR4-NF-κB通路缓解LPS诱导的BMECs损伤 被引量:5
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作者 喻斌 梁涛 +3 位作者 卢金福 吕高虹 卞勇 阮鸣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期1-6,共6页
目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8... 目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8的生成,DCFH-DA探针检测ROS含量,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、p-p65、p65、p-IκBα和IκBα的表达。结果冰片剂量优化结果表明其在10 mg·L^(-1)和20 mg·L^(-1)具有良好的剂量-效应依赖性。以它们为低、高剂量,发现冰片可显著减少TNF-α、IL-6和IL-8的分泌和ROS的生成,降低凋亡细胞百分率,减少TLR4、p-p65和IκBα的表达,并增加p65和p-IκBα的表达。结论冰片可通过下调TLR4-NF-κB通路缓解BMECs的炎症反应,进而减少大脑损伤。 展开更多
关键词 冰片 脂多糖 bmecs TLR4-NF-κB通路
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通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs的保护作用 被引量:9
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作者 戴纪恒 吴思鹏 +2 位作者 汪宁 王艳 吴倩 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第14期42-52,共11页
目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NM... 目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NMDP)组(10μmol·L^-1),卡博替尼(BMS)组(1μmol·L^-1)和合用药组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺2 h后迅速复糖复氧24 h进行OGD/R造模并分组给药。采用细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs,观察OGD/R损伤大鼠BMECs的形态学和超微结构改变并检测细胞跨膜电阻(TEER)值变化。用试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)荧光强度和组织型纤溶酶原激活因子(tPA)含量。采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度及细胞凋亡,观察血管新生标记因子CD34的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中紧密连接蛋白(ZO-1),血管内皮生长因子(VEGF),黏着斑激酶(FAK)和桩蛋白(Paxillin)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,OGD/R组细胞皱缩、变圆,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著降低,细胞中NO,LDH及ROS水平显著升高,tPA含量显著降低,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著增加,细胞中CD34有所表达,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组比较,TQHXT组细胞损伤明显改善,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著升高,细胞中NO,LDH及ROS含量显著降低,tPA含量显著升高,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著减少,细胞中CD34表达增加,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用,该保护作用可能是通过VEGF/VEGF受体2(R2)/FAK/Paxillin信号通路促进血管生成来发挥作用。 展开更多
关键词 通窍活血汤 含药脑脊液 氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R) 脑微血管内皮细胞(bmecs) 血管新生因子
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几种药物对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分泌炎性因子的影响 被引量:5
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作者 冯峰 马维武 +1 位作者 管翠萍 周学章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2387-2391,共5页
通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立体外炎症模型,探究不同药物对炎症模型细胞分泌炎性因子的抑制作用,为阐明药物抗炎机制奠定基础。本研究通过CCK-8法筛选LPS的最... 通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立体外炎症模型,探究不同药物对炎症模型细胞分泌炎性因子的抑制作用,为阐明药物抗炎机制奠定基础。本研究通过CCK-8法筛选LPS的最佳致炎剂量,确定细胞炎症模型;将氟尼辛葡甲胺、亚硫酸氢钠穿心莲内酯、苦木、莲胆作用于炎症模型细胞,以地塞米松作为阳性对照,ELISA法检测各组细胞培养液上清中炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达变化情况。研究发现,经LPS(10mg/L)刺激BMECs 24h,炎症模型组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的含量显著高于空白对照组(P<0.05),IL-6的含量极显著高于空白对照组(P<0.01);氟尼辛葡甲胺(10mg/L)、亚硫酸氢钠穿心莲内酯(5mg/L)、苦木(5mg/L)、莲胆(5mg/L)在使用质量浓度下均能不同程度地抑制炎症模型组BMECs分泌TNF-α、IL-6和IL-1β,其中亚硫酸氢钠穿心莲内酯对炎症细胞具有很好的抗炎作用,为以后体内的抗炎作用研究奠定基础。 展开更多
关键词 亚硫酸氢钠穿心莲内酯 脂多糖 bmecs 炎性因子
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水牛Novel-miR-57对Bcap-37和BMECs细胞DOK4基因的调控作用 被引量:2
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作者 蔡小艳 李雅辉 +6 位作者 鲍正潘 陈秋萍 李胜 周宇 邓凯 石德顺 刘庆友 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期269-279,共11页
【目的】筛选Novel-miR-57调控靶基因,并明确其对靶基因的调控作用及生物功能,为揭示水牛乳腺上皮细胞(BMECs)的分化机理提供科学依据。【方法】利用MiRscan预测Novel-miR-57二级结构;以自编软件Ensembl(v80)注释的水牛mRNA截取3'-... 【目的】筛选Novel-miR-57调控靶基因,并明确其对靶基因的调控作用及生物功能,为揭示水牛乳腺上皮细胞(BMECs)的分化机理提供科学依据。【方法】利用MiRscan预测Novel-miR-57二级结构;以自编软件Ensembl(v80)注释的水牛mRNA截取3'-非翻译区(3'-UTR)作为预测数据库,采用Miranda(v3.3a)对Novel-miR-57进行靶基因预测;运用实时荧光定量PCR筛选重点靶基因。以化学合成的Novel-miR-57模拟物Mimics和抑制剂Inhibitor,分别转染人类乳腺癌细胞(Bcap-37)及BMECs细胞,以验证Novel-miR-57与靶基因的表达相关性。【结果】Novel-miR-57前体序列形成7个茎环结构,成熟序列位于第1、2和3个茎环结构间,其结合自由能为-53.70 kcal/mol。以结合自由能低于-20.00 kcal/mol为标准,最终筛选出34个可能的靶基因,共与42条KEGG信号通路存在关联,其富集的信号通路主要有代谢通路(ID:bta01100)、PI3K-Akt信号通路(ID:bta04151)、MAPK信号通路(ID:bta04010)和细胞因子—细胞因子受体相互作用(ID:bta04060)等;经实时荧光定量PCR检测分析发现DLX3、CANCNG3、DOK4、NFKBID、C17orf53、RTN1和FBXO10等7个靶基因在非泌乳期的相对表达量极显著高于泌乳期(P<0.01),二者间相差100.0倍以上,且与NovelmiR-57的相对表达量呈负相关。7个靶基因中仅DOK4基因与Novel-miR-57的表达具相关性,以200 nmol/L Inhibitor转染B-cap37细胞能显著提高DOK4基因表达(P<0.05,下同),添加100 nmol/L Mimics则显著抑制DOK4基因表达。以100 nmol/L Mimics转染BMECs细胞,Novel-miR-57和DOK4基因的相对表达量显著提高;而以200 nmol/L Inhibitor转染BMECs细胞,Novel-miR-57和DOK4基因的表达均受到显著抑制。【结论】Novel-miR-57含有7个茎环结构,且其成熟序列位于第1~3个茎环上。Novel-miR-57过表达可下调Bcap-37细胞DOK4基因表达或上调BMECs细胞DOK4基因表达,即Novel-miR-57对靶基因的调控作用因乳腺细胞生理状态不同而存在差异。 展开更多
关键词 水牛 Novel-miR-57 靶基因 bmecs细胞 Bcap-37细胞 调控作用
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复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及microRNA-503的调控机制研究 被引量:1
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作者 沈俊逸 方邦江 +4 位作者 赵智明 刘春丽 壮雨雯 徐文俊 蔡辉 《浙江中医杂志》 2018年第10期718-721,共4页
目的:在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从microRNA-503调控途径探索复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的具体作用靶点。方法:20只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为2组,每组10只,适应... 目的:在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从microRNA-503调控途径探索复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的具体作用靶点。方法:20只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为2组,每组10只,适应性饲养3天后,一组常规饲养,另一组常规饲养的基础上以复元醒脑汤10.4g/kg/d灌胃,连续3d,于末次给药1h后腹主动脉采血,制备空白血清和中药血清。对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织进行BMEC的分离培养,分别加入空白血清、中药血清,转染microR-503抑制剂,中药血清混合转染microR-503抑制剂,检测不同处理组含药血清对BMECs迁移、成管能力的影响,在细胞水平上利用实时荧光定量PCR检测脑组织microRNA-503,CCNE1、CDC25A的基因表达水平。结果:与空白血清组相比,复元醒脑汤中药血清以及microRNA-503抑制剂组都可以明显增强BMECs的迁移能力(P<0.01),联合用药效果最好。与空白血清组相比,microRNA-503抑制剂和复元醒脑汤含药血清都可以明显上调CCNE1和CDC25A的基因表达(P<0.05),从而抑制了microRNA-503的表达(P<0.05)。miR-503抑制剂和复元醒脑汤中药血清组都对小管形成有一定的促进作用;联合使用microRNA-503抑制剂和复元醒脑汤中药血清也能明显促进小管的形成。结论:复元醒脑汤通过促进CCNE1和CDC25A的表达,从而抑制microRNA-503的表达水平,间接提高了BMEC的成管和迁移能力,从而使得受损血管内皮修复功能得到改善,进而促进局部血管的再生和侧支循环的建立。 展开更多
关键词 复元醒脑汤 糖尿病脑梗死 bmecs microRNA-503大鼠
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复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及miRNA-320的调控机制研究 被引量:2
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作者 沈俊逸 赵智明 +3 位作者 刘春丽 壮雨雯 徐文俊 蔡辉 《天津中医药》 CAS 2019年第1期58-62,共5页
[目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。... [目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。对糖尿病脑梗死大鼠的缺血脑组织进行BMECs的分离培养,分别加入对照血清、含药血清、转染miRNA-320 inhibitor、中药血清混合转染miRNA-320 inhibitor;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各组BMECs的miRNA-320、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子受体-1(IGF-1R)基因表达水平,通过甲臜化合物(MTS)检测复元醒脑汤对BMECs增殖能力的影响;通过Transwell实验观察复元醒脑汤对BMECs迁移能力的影响;观察复元醒脑汤对BMECs小管形成能力的影响。[结果]与对照血清组相比,含药血清组、miRNA-320 inhibitor组、含药血清混合miRNA-320 inhibitor组均能使BMECs的增殖、迁移以及小管形成能力显著提高(P<0.01),同时显著降低了miRNA-320的表达水平,显著提高了IGF-1的表达水平。[结论]复元醒脑汤能够抑制糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织中miRNA-320表达,增加IGF-1的表达,进而促进BMECs的增殖、迁移及成管能力。 展开更多
关键词 复元醒脑汤 糖尿病 脑梗死 bmecs miRNA-320 IGF-1
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S100A9-RAGE/TLR4信号轴调控非小细胞肺癌脑转移和内皮黏附的作用
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作者 徐益多 周彦琪 +1 位作者 王健 龙江 《昆明医科大学学报》 2025年第9期23-36,共14页
目的探究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)来源S100A9调控侵袭转移及激活转移土壤脑微血管内皮的机制。方法使用R语言提取TCGA数据库RNAseq数据,采用配对样本T检验,分析S100A9在NSCLC组织和正常肺组织中的表达,用ggplot... 目的探究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)来源S100A9调控侵袭转移及激活转移土壤脑微血管内皮的机制。方法使用R语言提取TCGA数据库RNAseq数据,采用配对样本T检验,分析S100A9在NSCLC组织和正常肺组织中的表达,用ggplot2包进行可视化;用survival包进行比例风险假设检验和拟合生存回归,比较S100A9高/低表达组之间的预后情况,用survminer包和ggplot2包进行可视化。RTqPCR、Western Blot检测S100A9在NSCLC细胞系(A549、NCI-H1299)和正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中的表达差异,利用A549细胞与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)共培养构建血瘤屏障BTB模型,并构建siS100A9敲低的A549细胞株,划痕愈合、Transwell实验检测不同处理组A549细胞的迁移、侵袭能力变化,CCK-8、流式细胞术检测不同浓度S100A9处理HCMEC/D3细胞后的增殖活性和对细胞周期的影响,RT-qPCR、Western Blot检测不同浓度S100A9处理hCMEC/D3细胞后对土壤传感器受体RAGE、TLR4和肿瘤跨内皮迁移相关黏附分子ICAM-1、VCAM-1、ALCAM的表达变化,并通过CCK-8、RT-qPCR、Western Blot检测FPS-ZM1、TAK242预阻滞RAGE、TLR4通路后,对不同浓度S100A9刺激下hCMEC/D3细胞的增殖活性和黏附分子表达的回复情况。结果TCGA数据库RNAseq数据挖掘与分析显示,肺癌组织样本中S100A9表达显著高于正常肺组织样本(P=0.03),Kaplan-Meier生存曲线图显示,S100A9高表达组的生存概率低于S100A9低表达组,提示S100A9高表达与患者更差的总体生存期显著相关[HR=1.46(1.10~1.95),P=0.01]。在细胞实验中,S100A9在NSCLC细胞系中高表达(P<0.05),敲低S100A9能抑制A549细胞的迁移和侵袭(P<0.05),敲低组在6、12、24、36、48 h的平均迁移抑制率为80.61%、75.70%、73.78%、69.54%、56.96%,平均侵袭抑制率为57.38%(48 h),同时S100A9靶向正调控BTB模型中hCMEC/D3细胞的增殖活性和细胞周期(P<0.05)。在机制上,S100A9通过土壤传感器受体RAGE、TLR4促进A549与hCMEC/D3交互通讯,上调hCMEC/D3细胞的ICAM-1、VCAM-1、ALCAM表达(P<0.05),回复实验证实S100A9-RAGE/TLR4调控轴能够影响肺癌脑转移的内皮黏附过程(P<0.05)。结论S100A9-RAGE/TLR4与肺癌脑转移进展有关,敲低S100A9能抑制肺癌细胞的侵袭转移,阻滞下游土壤传感器受体RAGE、TLR4能减弱脑微血管内皮的增殖生长,并抑制肺癌细胞与脑微血管内皮之间形成预转移黏附微环境。 展开更多
关键词 S100A9 非小细胞肺癌 脑转移 脑微血管内皮细胞bmecs
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表没食子儿茶素没食子酸酯对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤和凋亡的干预作用 被引量:2
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作者 宝华 户春丽 +2 位作者 安彦昊 张春华 马燕芬 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2122-2131,共10页
【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症和凋亡的影响及其潜在的保护机制。【方法】利用LPS诱导BMECs构建细胞炎症模型。通过CCK-8检测细胞活力,筛选EGCG最佳浓度。将BMECs分为对... 【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症和凋亡的影响及其潜在的保护机制。【方法】利用LPS诱导BMECs构建细胞炎症模型。通过CCK-8检测细胞活力,筛选EGCG最佳浓度。将BMECs分为对照组、LPS处理组和EGCG+LPS共处理组,利用实时荧光定量PCR检测细胞中炎性因子、凋亡因子以及抗氧化相关基因mRNA表达水平;利用试剂盒检测BMECs的线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平;通过流式细胞术检测BMECs凋亡情况。【结果】使用LPS处理BMECs后,与0 h相比,各时间段细胞中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和IL-1β基因mRNA表达量均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),成功构建BMECs细胞炎性损伤模型。CCK-8检测细胞活力结果显示,EGCG最佳作用浓度为5μmol/L。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,LPS诱导的BMECs中IL-6、IL-8、丙二醛(MDA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)基因mRNA表达量均极显著升高(P<0.01),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)基因mRNA表达量极显著降低(P<0.01);与LPS组相比,EGCG+LPS组细胞中IL-6、IL-8、IL-1β、MDA、Bax和Caspase-3基因mRNA表达量均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),GSH-Px、超氧化物歧化酶(SOD)、Bcl-2基因mRNA表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。线粒体膜电位检测结果显示,与对照组相比,LPS组BMECs红色荧光明显减弱,绿色荧光有所增强,而EGCG和LPS共孵育后则对BMECs红色荧光没有明显影响,绿色荧光相对减弱;ROS水平检测结果显示,与对照组相比,LPS组细胞绿色荧光明显增强,而EGCG和LPS共孵育后,细胞绿色荧光有所减弱。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,LPS处理后死亡细胞和凋亡细胞明显增多,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),而EGCG和LPS共孵育后凋亡细胞则明显减少,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。【结论】EGCG可以通过抑制LPS诱导BMECs中ROS释放和缓解线粒体损伤等综合作用,缓解炎性反应并抑制细胞凋亡,研究结果为EGCG预防和治疗奶牛乳腺炎提供理论基础。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞(bmecs) 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 脂多糖(LPS) 炎性损伤 细胞凋亡
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丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制 被引量:20
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作者 周鹏 何昱 +5 位作者 杨洁红 张宇燕 周惠芬 赵涛 付巍 万海同 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期4844-4848,共5页
为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物... 为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,RT-PCR法检测细胞MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA表达水平,透射电镜观察细胞超显微结构变化。结果表明缺氧使原代培养的r BMECs受到明显损伤,与模型组比较,丹红注射液(50,100 m L·L-1)可显著对抗缺氧造成的损伤,增强SOD活性,降低MDA水平,明显下调MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA的表达,丹红注射液100 m L·L-1能够保护细胞正常的形态、显微结构、维持细胞间紧密连接,抑制缺氧诱导的细胞凋亡。从结果中可以得出丹红注射液对缺氧损伤r BMECs具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应及细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 丹红注射液 乳鼠脑微血管内皮细胞(r bmecs) 缺氧 抗氧化 炎症 细胞凋亡
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神经血管单元的体外神经模型构建 被引量:4
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作者 王翀 顾雯 +3 位作者 赵康峰 张宏伟 李毅民 白雪涛 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期448-450,共3页
目的建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型。方法体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,最终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU)。结果本试验成功培养... 目的建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型。方法体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,最终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU)。结果本试验成功培养了了体外神经血管单元并进行相关的细胞学鉴定,同时对模型的完整性和通透性进行了验证。结论此模型的成功建立不仅可以用于替代体内血脑屏障(BBB),同时对于药物研发及化学物神经毒性的筛选及研究具有重要的意义。 展开更多
关键词 神经血管单元(NVU) 神经胶质细胞 微血管内皮细胞(bmecs) 海马神经元 免疫荧光试验 4h渗漏试验 跨内皮电阻试验(TEER)
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脑微血管内皮细胞与脑卒中关系的研究进展 被引量:7
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作者 余奇劲 陶红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第19期3259-3261,共3页
血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)是脑的毛细血管与神经组织之间存在的一个调节界面,其结构主要有3层:脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialceils,BMECs)、基膜和胶质细胞足突,其中BMECs发挥主要作用。近几年逐步... 血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)是脑的毛细血管与神经组织之间存在的一个调节界面,其结构主要有3层:脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialceils,BMECs)、基膜和胶质细胞足突,其中BMECs发挥主要作用。近几年逐步认识到BMECs不仅是生物学上的结构与功能屏障,还能合成多种物质,调节血管舒缩和营养神经,当其功能发生障碍时,一系列脑血管疾病随之发生。 展开更多
关键词 脑微血管内皮细胞 脑卒中 bmecs 血脑屏障 脑血管疾病 神经组织 毛细血管 胶质细胞
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HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制探讨 被引量:2
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作者 黄丹 丛喆 +3 位作者 徐珮 金光 高锡强 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期81-85,共5页
HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内... HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内皮细胞或破坏内皮细胞间的紧密连接穿透血脑屏障进入CNS,但其机制尚不明确。目前有几种比较公认的假说,包括病毒直接入侵假说、单核/巨噬细胞入侵假说、T细胞诱导假说和液相入胞假说。本文将就HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制作一综述。 展开更多
关键词 bmecs 血脑屏障 趋化因子受体
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梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用 被引量:1
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作者 尚远宏 田金凤 +2 位作者 王敏 李松青 徐晓玉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期358-360,373,共4页
探讨梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用。取新生10 d的SD大鼠乳鼠,分离、培养脑皮层微血管原代内皮细胞,并利用DMEM无糖培养基、三气培养箱缺氧容器(缺糖缺氧2 h)及5%CO2培养箱复氧培养24 h复制缺氧/复氧模... 探讨梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用。取新生10 d的SD大鼠乳鼠,分离、培养脑皮层微血管原代内皮细胞,并利用DMEM无糖培养基、三气培养箱缺氧容器(缺糖缺氧2 h)及5%CO2培养箱复氧培养24 h复制缺氧/复氧模型,MTT法BMECs细胞活力,Western blot法检测MMP-9的蛋白表达。结果显示,与模型组相比,梓葛冻干粉针(49.00、98.00μg·m L^(-1))能促进缺氧/复氧模型中BMECs增殖;梓葛冻干粉针(24.50、49.00、98.00μg·m L^(-1))能显著抑制BMECs细胞中MMP-9蛋白表达升高(p<0.05);提示梓葛冻干粉针对脑微血管内皮细胞损伤的保护作用可能与降低MMP-9蛋白表达有关。 展开更多
关键词 梓葛冻干粉针 bmecs MMP-9 缺氧/复氧损伤
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基于神经血管单元的硫酸锰体外神经毒性研究
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作者 王翀 赵康峰 +1 位作者 顾雯 张宏伟 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期1-4,共4页
目的探讨硫酸锰对三种离体培养脑细胞及两种细胞模型的毒性损伤。方法体外分离培养神经胶质细胞、脑微血管内皮细胞(BMECs)及海马神经元并建立神经血管单元模型(NVU)和单层BMECs模型。分别以125、250、500、1000、2000和4000μmol/L硫... 目的探讨硫酸锰对三种离体培养脑细胞及两种细胞模型的毒性损伤。方法体外分离培养神经胶质细胞、脑微血管内皮细胞(BMECs)及海马神经元并建立神经血管单元模型(NVU)和单层BMECs模型。分别以125、250、500、1000、2000和4000μmol/L硫酸锰进行细胞毒性试验,观察125、250、500和1000μmol/L硫酸锰对细胞内钙离子浓度影响。结果与对照组比较,离体培养的三种脑细胞的细胞活性随染毒剂量的升高而降低,差异具有统计学意义(P<0.05);两种细胞模型海马神经元细胞活性无明显变化(P>0.05)。随染毒剂量的升高,海马神经元从500μmol/L开始,神经胶质细胞和BMECs从125μmol/L开始细胞内Ca^2+浓度高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);250和1000μmol/L硫酸锰染毒组BMECs模型海马神经元Ca^2+浓度高于对照组(P<0.05),而NVU模型无明显变化。结论硫酸锰对本次体外培养的三种脑细胞具有损伤作用。锰能够激活钙离子流,可能进而激活相关的细胞转导通路。BMECs与NVU的屏障作用可以降低锰对海马神经元的细胞毒性作用,NVU的屏障作用更显著。 展开更多
关键词 硫酸锰 体外神经毒性 神经胶质细胞 脑微血管内皮细胞(bmecs) 海马神经元 神经血管单元(NVU) 细胞内CA^2+
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血脑屏障的物质转运与调节机制 被引量:1
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作者 石向群 《国外医学(脑血管疾病分册)》 1997年第2期74-77,共4页
血脑屏障(BBB)是脑的一个保护性装置。文章就构成BBB的主要成分BMECs的物质转运机制及影响因素加以讨论。
关键词 血脑屏障 物质转运 内皮细胞 bmecs
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梓醇对高糖致大鼠脑微血管内皮细胞间紧密连接破坏的保护作用研究 被引量:7
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作者 邹利 刘珂 +1 位作者 祝慧凤 俸珊 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期4118-4124,共7页
梓醇为地黄的主要有效成分,具有缓解脑微血管内皮细胞水肿,促进内皮细胞存活与增殖作用。而其是否对高血糖引发的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)间紧密连接损伤具保护作用还未知。该文评价了梓醇对高... 梓醇为地黄的主要有效成分,具有缓解脑微血管内皮细胞水肿,促进内皮细胞存活与增殖作用。而其是否对高血糖引发的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)间紧密连接损伤具保护作用还未知。该文评价了梓醇对高糖致大鼠BMECs紧密连接破坏的保护作用,并对其机制进行了初步研究。原代分离715 d SD大鼠BMECs,经30 mmol·L-1高糖损伤后,观察梓醇对其存活率、内皮素-1分泌、跨膜电阻、紧密连接超微结构、骨架蛋白F-actin重构、紧密连接蛋白和黏附连接蛋白表达的影响。结果表明梓醇(0. 3,3. 0,30. 0μmol·L-1)呈剂量依赖性提高BMECs存活率、降低内皮素-1的分泌、提高BMECs间跨膜电阻;透射电镜结果显示其还能增强BMECs间紧密连接;免疫荧光染色证实梓醇上调紧密连接蛋白claudin-5,ZO-1的表达,逆转高糖所致F-actin细胞骨架重排;q-PCR结果也进一步证实梓醇呈剂量依赖性上调紧密连接蛋白claudin-5,occludin,ZO-1,ZO-2,ZO-3和黏附连接蛋白α-actintin,vinculin,cateinins的mRNA表达(P <0. 05)。该研究表明梓醇对高糖致BMECs的损伤具有保护作用,其机制可能与上调细胞间紧密连接与黏附连接表达,逆转细胞骨架蛋白F-actin重构有关。 展开更多
关键词 梓醇 高糖 bmecs 紧密连接 黏附连接 细胞骨架蛋白
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辣木叶多糖对过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 被引量:16
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作者 马广明 刘骥 +1 位作者 姜鑫 张永根 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期350-358,共9页
奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)在奶牛泌乳期代谢旺盛,导致活性氧(ROS)大量产生,从而诱发氧化应激。辣木叶多糖(MLP)能有效清除ROS和自由基,但其是否具有缓解BMECs氧化损伤的潜力尚不清楚。因此,本文以MLP为添加剂,探究其对过氧化氢(H2O2)诱导... 奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)在奶牛泌乳期代谢旺盛,导致活性氧(ROS)大量产生,从而诱发氧化应激。辣木叶多糖(MLP)能有效清除ROS和自由基,但其是否具有缓解BMECs氧化损伤的潜力尚不清楚。因此,本文以MLP为添加剂,探究其对过氧化氢(H2O2)诱导BMECs氧化损伤的保护作用。本试验首先将分离的BMECs置于含有不同浓度H2O2的培养基中培养2 h建立氧化损伤模型,以确定H2O2的适宜浓度;随后在培养基中加入不同浓度MLP溶液培养BMECs 2 h,以确定MLP适宜浓度;最终选用浓度为500μmol/L的H2O2和4 mg/mL的MLP用于本试验。试验设置4个组,分别为对照组1(BMECs)、对照组2(BMECs+MLP)、损伤组(BMECs+H2O2)、保护组(BMECs+MLP+H2O2),每组3个重复。试验对BMECs中ROS数量、BMECs凋亡以及BMECs中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量进行检测。结果表明:1)ROS检测结果显示,MLP抑制了细胞内ROS的生成。2)Hochest33258染色结果与透射电镜观察结果显示,MLP降低了BMECs的凋亡率,同时保持了细胞膜和细胞结构完整性。3)试剂盒检测结果显示,MLP提高了BMECs中CAT、GSH-Px和SOD活性,同时降低了MDA含量。综上所述,MLP可有效减缓BMECs凋亡,提高其抗氧化能力。 展开更多
关键词 bmecs 氧化应激 辣木叶多糖 活性氧
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SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用 被引量:2
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作者 祁昊 孟春雨 +1 位作者 高学军 甄贞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2516-2525,共10页
钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2)是一种氨基酸转运蛋白,可转运中性氨基酸,广泛分布于多种细胞中。氨基酸既可作为蛋白质合成的底物,也是调节细胞新陈代谢的关键信号分子,但SNAT2是否介导氨基酸调节BMECs增殖和自噬尚未见报道。本... 钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2)是一种氨基酸转运蛋白,可转运中性氨基酸,广泛分布于多种细胞中。氨基酸既可作为蛋白质合成的底物,也是调节细胞新陈代谢的关键信号分子,但SNAT2是否介导氨基酸调节BMECs增殖和自噬尚未见报道。本研究利用CASY细胞计数和Western blotting技术检测SNAT2过表达和siRNA干扰后牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖情况以及SNAT2对自噬标志蛋白LC3-Ⅰ/Ⅱ表达量的影响,并利用免疫荧光检测细胞自噬斑点(LC3-Ⅱ)变化。结果显示,SNAT2过表达时,p-PI3K、p-mTOR和Cyclin D1表达量增加,反之,p-PI3K、p-mTOR和Cyclin D1表达量下降。SNAT2抑制时,LC3-Ⅱ表达量增加,免疫荧光检测自噬斑点增多。添加自噬增强剂海藻糖(trehalose,Tre)和蛋氨酸(methionine,Met)后,与单一添加Tre组相比,Met+Tre组p-mTOR表达量增加,LC3-Ⅱ表达量降低,胞浆内绿色自噬斑点减少;添加Tre和Met并抑制SNAT2时,p-mTOR表达量下降,LC3-Ⅱ表达量增多,胞浆内绿色自噬斑点增加。以上结果表明,SNAT2可介导Met通过调控PI3K-mTOR/Cyclin D1信号通路调节BMECs的增殖与自噬。 展开更多
关键词 钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2) 牛乳腺上皮细胞(bmecs) MTOR 增殖 自噬
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牛乳腺上皮细胞体外分离培养模式、方法及其应用进展 被引量:1
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作者 母童 虎红红 +1 位作者 顾亚玲 张娟 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期56-67,共12页
乳腺由具有泌乳功能的腺泡组成,乳腺上皮细胞(MEC)以单层方式排列在腺泡外围,是乳腺对外界病原进行免疫保护的重要组分,负责将血液中的营养物质通过一系列复杂生化过程转化为乳汁。牛乳腺上皮细胞(BMECs)的体外分离培养在很大程度上解... 乳腺由具有泌乳功能的腺泡组成,乳腺上皮细胞(MEC)以单层方式排列在腺泡外围,是乳腺对外界病原进行免疫保护的重要组分,负责将血液中的营养物质通过一系列复杂生化过程转化为乳汁。牛乳腺上皮细胞(BMECs)的体外分离培养在很大程度上解决了活体试验条件不可控、操作困难、成本高及个体差异大等诸多问题,还可以为体外研究乳腺组织生长发育规律、泌乳机制、乳房疾病等提供良好的细胞模型。本文总结了BMECs的分类和作用、培养方法、模式及其在基因表达机理研究和组学中的应用进展,以期为BMECs体外培养及相关研究提供有价值的参考和新思路。 展开更多
关键词 bmecs 体外培养 模式 应用
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