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去泛素化酶抑制剂b-AP15抑制马立克氏病病毒的复制 被引量：1
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作者 于翀 王文婧 +7 位作者 谢知航 周正轩 王婷 范青松 王梦涵 吕岩 许家翠 艾永兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1894-1901,共8页
为了探寻对马立克氏病病毒(MDV)增殖具有靶向抑制作用的药物,本研究以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,利用去泛素化反应体系,对2448个化合物进行筛选,应用泛素荧光底物分析抑制物对UL36的抑制动力学,并应用MDV致鸡胚成纤维细胞(CEF)病... 为了探寻对马立克氏病病毒(MDV)增殖具有靶向抑制作用的药物,本研究以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,利用去泛素化反应体系,对2448个化合物进行筛选,应用泛素荧光底物分析抑制物对UL36的抑制动力学,并应用MDV致鸡胚成纤维细胞(CEF)病变模型(CPE)和MDV致鸡马立克氏病(MD)模型分析抑制物对MDV在鸡细胞中复制的影响。结果发现,化合物b-AP15在高于5μmol/L浓度时可显著地非竞争性抑制3 nmol/L UL36的酶活性(P<0.01)。b-AP15对CEF的安全浓度小于1μmol/L,0.25,0.50μmol/L的b-AP15可以显著抑制MDV在CEF上的CPE形成以及在CEF细胞内的复制(P<0.01)。以2,5 mg/(kg·d)b-AP15对MDV攻毒雏鸡通过腹腔给药治疗,可显著抑制MDV在鸡T细胞内的复制(P<0.01)。这些结果说明,去泛素化酶抑制剂b-AP15可抑制MDV在鸡细胞内的复制。 展开更多
关键词 去泛素化酶UL36 马立克氏病病毒 抑制剂b-ap15
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26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究
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作者 周俊 曹江 +2 位作者 孟凡静 冯浩 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期185-191,共7页
目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;1... 目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;11细胞实验组;④RS4;11细胞对照组.其中,Jurkat细胞实验组与RS4;11细胞实验组采用浓度分别为0.05,0.10,0.50,1.00,5.00 μmol/L b-AP15处理24,48 h;Jurkat细胞对照组与RS4;11细胞对照组采用RPMI 1640培养基进行同步培养.采用CCK-8法绘制4组细胞增殖曲线;采用Annexin Ⅴ-别藻蓝蛋白（APC）/7-氨基放线菌素D（7-AAD）双标记流式细胞术检查4组细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞4组细胞周期分布情况;采用实时定量PCR检测4组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关Ⅹ蛋白（Bax）基因、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2基因、Ⅹ连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、周期素依赖性激酶（CDK）1基因及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3基因mRNA表达水平.结果 ①b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖均具有抑制作用,且该抑制效应呈时间与剂量依赖性;Jurkat细胞经b-AP15处理24,48 h后,半数抑制浓度（IC50）分别为（1.52±0.35）μmol/L与（0.54±0.01） μmol/L,RS4;11细胞经b-AP15处理24,48 h后IC50分别为（0.97±0.02）μmol/L与（0.08±0.03）μmol/L.②使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组后,其与Jurkat细胞对照组相比细胞凋亡率显著增高,且差异有统计学意义（P＜0.001）;使用浓度为1.0 μmol/Lb AP15处理RS4;11细胞实验组后,其与RS4;11细胞对照组相比细胞凋亡率亦显著增加,且差异亦有统计学意义（P＜0.001）;且Jurkat细胞与RS4;11细胞经b-AP15处理48 h后,与处理24 h后者相比细胞凋亡率增高,且差异均有统计学意义（t=11.887,7.449;P＜0.001）.③与Jurkat细胞对照组相比,使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组24 h后,Jurkat细胞周期明显被阻滞于G2/M期,且差异有统计学意义（t=10.672,P＜0.05）;同时伴S期细胞比例减低,且差异亦有统计学意义（t=19.053,P＜0.05）.与RS4;11细胞对照组相比,使用浓度为1.0 μmol/L b-AP15处理RS4;11细胞实验组24 h后,RS4;11细胞周期亦明显被阻滞于G2/M期,且差异有统计学意义（t=13.643,P＜0.05）;同时伴S期细胞比例减低,且差异亦有统计学意义（t=6.992,P＜0.05）.④使用b-AP15处理Jurkat细胞与RS4;11细胞24 h后,荧光定量PCR检测结果显示,凋亡相关基因Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平增高,Bcl-2、XIAP mRNA相对表达水平减低,同时伴细胞周期相关基因CDK1 mRNA相对表达水平减低,与各自细胞对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;且RS4;11细胞实验组caspase-3 mRNA相对表达水平较Jurkat细胞实验组相比,增高程度更为显著,且差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 b-AP15能有效抑制Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖,并促进其细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达水平、下调Bcl-2与XIAP基因表达水平相关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平减低相关. 展开更多
关键词 蛋白酶抑制药 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 JURKAT细胞 RS4 11细胞 b-ap15
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