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杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenserschrenckii♂)atp1α1与atp1β1基因的克隆、序列分析及碱胁迫下鳃的表达特征 被引量：2
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作者 杨合霖 刘霞飞 +5 位作者 张颖 吕伟华 王念民 丰超杰 徐伟 曹顶臣 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期17-26,共10页
为探究碳酸盐碱度胁迫下杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenser schrenckii♂)Na+/K+-ATP酶的分子响应机制,在水温(17±2)℃下,将体长(133.17±16.75)mm、体质量(12.43±3.99)g的30日龄“鲟龙1号”幼鱼饲养在... 为探究碳酸盐碱度胁迫下杂交鲟“鲟龙1号”(Huso dauricus♀×Acipenser schrenckii♂)Na+/K+-ATP酶的分子响应机制,在水温(17±2)℃下,将体长(133.17±16.75)mm、体质量(12.43±3.99)g的30日龄“鲟龙1号”幼鱼饲养在曝气自来水[测定碱度为(3.16±0.03)mmol·L^(-1)(对照组,C组)]和用99%纯度的食用小苏打配置的碱度分别为(7.61±0.12)mmol·L^(-1)(T1组)、(12.10±0.05)mmol·L^(-1)(T2组)和(15.30±0.85)mmol·L^(-1)(T3组)的曝气自来水中。养殖到第30 d时,采集对照组杂交鲟的鳃、皮肤、肌肉、心脏、肝脏、脾脏、头肾、肠道、眼、胃和肾脏和3个试验组的鳃,基于“鲟龙1号”的转录组数据,筛选差异表达基因atp1α1(Na+/K+-ATP酶α1亚基)与atp1β1(Na+/K+-ATP酶β1亚基),采用RACE技术克隆获得atp1α1基因与atp1β1基因的c DNA全长序列并分析其序列信息,采用荧光定量PCR技术分析了组织表达差异和碱度暴露鲟龙1号鳃的表达特征。结果显示,atp1α1基因的c DNA全长序列为3 407 bp,编码1 027个氨基酸(NKAα1),atp1β1基因的c DNA全长序列为2 170 bp,编码304个氨基酸(NKAβ1)。NKAα1和NKAβ1的二级结构主要为α-螺旋与无规则卷曲,有多个跨膜区,潜在磷酸化位点均为丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)。同源比对结果发现,“鲟龙1号”的NKAα1和NKAβ1均与小体鲟(Acipenser ruthenus)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,atp1α1基因在鳃中高表达,显著高于其他组织(P<0.05);atp1β1基因在心脏、肝脏、鳃和肠道中高表达;atp1α1基因在鳃的表达水平随碱度上升呈先上升后下降趋势,当碱度为7.61 mmol·L^(-1)时表达水平达最高;碱度高于12.10 mmol·L^(-1)时,atp1α1基因与atp1β1基因的表达水平均低于正常。综上所述,“鲟龙1号”的atp1α1基因与atp1β1基因分别编码NKA蛋白的重要亚基,参与了碳酸盐碱度应答,本研究为揭示鲟的耐盐碱分子调控机制提供理论基础。 展开更多
关键词 “鲟龙1号” atp1α1 atp1β1 碱胁迫 克隆 表达特征
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