重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品的研制

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作者 曹莎莎 何鹏 +8 位作者 王先翔 刘晓雅 韦芬 李静静 刘宇 王婷婷 王辰飞 王佳霁 胡忠玉 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第10期1756-1764,共9页

目的:研制重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品,用于其体外相对效力及小鼠体内效力评价。方法:选取检定合格的重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)原液,经标定蛋白质含量后,加入佐剂制备的疫苗作为候选参考品;候选参考品... 目的:研制重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品,用于其体外相对效力及小鼠体内效力评价。方法:选取检定合格的重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)原液,经标定蛋白质含量后,加入佐剂制备的疫苗作为候选参考品;候选参考品经成品检验合格后,进行均一性检查;经5次独立试验使用Ⅲ期临床批疫苗制剂对候选参考品进行体外相对效力及小鼠体内效力检项标定;将候选参考品置(37±2)℃、(5±3)℃考察,分析其稳定性;分别应用Ⅲ期临床批疫苗制剂和候选参考品对6批待测疫苗制剂进行体外相对效力和小鼠体内效力适用性测试。结果:重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品成品检定项目均符合规定;装量不低于标示量且精确度在±1%以内,粒径大小与分布D10、D50、D90的RSD分别为0.45%、0.39%、0.54%,抗原含量RSD为2.7%;Ⅲ期临床批疫苗制剂标定候选参考品,体外相对效力和小鼠体内效力均不低于0.5,且几何均值均为1.0,体外相对效力和小鼠体内效力几何变异系数(GCV)分别为8.9%、31%;候选参考品在(37±2)℃放置28 d、(5±3)℃放置36个月,体外相对效力及小鼠体内效力无明显上升或下降趋势,表明候选参考品稳定性较好;6批待测疫苗制剂体外相对效力和小鼠体内效力检测结果分布范围分别在0.9~1.0和0.7~1.4,表明候选参考品与原参考品一致性较好。结论:重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品,可用于同质重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力及小鼠体内效力评价。 展开更多

关键词 重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞) 小鼠体内效力 体外相对效力 生物学活性参考品 抗原含量 稳定性考察

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重组肺炎球菌蛋白疫苗抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立、优化及验证

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作者 沙芳芳 隋秀文 +4 位作者 周朝东 朱婉玉 徐丽爽 韩强 朱涛 《中国生物制品学杂志》 2025年第1期80-88,共9页

目的建立基于肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA)的重组肺炎球菌蛋白疫苗中P3296、P5668和PRX13种抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行优化、验证和初步应用,以期为该疫苗的质量监测提供可靠的检测方法。方... 目的建立基于肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA)的重组肺炎球菌蛋白疫苗中P3296、P5668和PRX13种抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行优化、验证和初步应用,以期为该疫苗的质量监测提供可靠的检测方法。方法用P5668、P3296和PRX1纯化蛋白免疫雄性新西兰大白兔,免疫血清经Protein A-Sephaorse 4B亲和层析纯化后,获得P5668、P3296和PRX1多克隆抗体,以其为包被抗体,HRP标记的相应单克隆抗体为酶标抗体建立抗原双抗体夹心ELISA检测方法。优化包被抗体浓度(3种多克隆抗体均稀释为2、4、8μg/mL)及酶标抗体稀释度(HRP标记的P5668单克隆抗体按1∶4000和1∶8000稀释、HRP标记的P3296单克隆抗体按1∶40000和1∶60000稀释、HRP标记的PRX1单克隆抗体按1∶12000和1∶24000稀释)、封闭液种类(1%BSA、1%鱼皮明胶、1%脱脂乳粉和1%酪蛋白)、稀释液种类(纯化水、1×PBS、2×PBS)、稀释液pH(6.4、7.4、8.4),并验证方法的线性范围、特异性、准确性、精密性、耐用性。分别采用建立的方法及Lowry法检测P5668、P3296、PRX1纯化蛋白(各20批),并分析2种方法检测结果的相关性。将3批P5668、P3296和PRX1混合疫苗经丙磺酸内盐解吸附后,采用建立的方法检测P3296、P5668和PRX1抗原含量。结果纯化的P5668、P3296和PRX1多克隆抗体蛋白浓度分别为1.27、2.20和1.53 mg/mL。P3296、P5668、PRX1多克隆抗体最佳包被浓度均为4μg/mL,HRP标记的P5668、P3296、PRX1单克隆抗体最佳稀释度分别为1∶4000、1∶60000、1∶12000;最佳封闭液为1%BSA,稀释液为1×PBS,稀释液pH为7.4。P5668、P3296和PRX13种参考品在3.125~100 ng/mL范围内,与A_(450)呈良好的线性关系,且R^(2)均>0.99;3种抗原高、中、低浓度加标样本回收率均在80%~120%范围内;3种抗原检测方法均可检出相应的特异性抗原,对其他2种抗原检测结果远低于实际含量或未检出;重复性及中间精密性验证CV均<20%;同一样本在不同条件下检测结果的CV均<20%。ELISA法与Lowry法测定P5668、P3296和PRX1抗原含量的R分别为0.9846、0.9970和0.9909(P均<0.0001),两种方法呈显著正相关。用建立的方法检测3批P3296、P5668和PRX1混合疫苗抗原含量结果与理论值的符合率为87%~114%。结论建立的双抗体夹心ELISA法具有良好的特异性、精密性、准确性及耐用性,可用于重组肺炎球菌蛋白疫苗中P3296、P5668和PRX13种抗原含量的检测。 展开更多

关键词 重组肺炎球菌蛋白疫苗 肺炎球菌表面蛋白A 双抗体夹心ELISA法 抗原含量

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新型冠状病毒S蛋白抗体的制备及初步应用 被引量：5

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作者 徐康维 何蕊 +4 位作者 权娅茹 苏喆 王剑锋 赵慧 李长贵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期857-861,共5页

目的制备新型冠状病毒S蛋白抗体,初步建立检测新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量的方法。方法使用新型冠状病毒重组S蛋白分别免疫羊和兔,获得抗血清。采用间接ELISA法和微量中和试验检测抗血清效价,免疫印迹试验检测抗体特异性。采用蛋白G... 目的制备新型冠状病毒S蛋白抗体,初步建立检测新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量的方法。方法使用新型冠状病毒重组S蛋白分别免疫羊和兔,获得抗血清。采用间接ELISA法和微量中和试验检测抗血清效价,免疫印迹试验检测抗体特异性。采用蛋白G纯化树脂分别对羊和兔抗血清进行亲和层析纯化,获得抗体。以纯化后的羊抗体作为包被抗体,兔抗体作为显示抗体,建立新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测方法。结果对羊进行4次免疫后,抗血清ELISA效价达220000,中和抗体效价达1536。对兔进行3次免疫后,抗血清ELISA效价达220000,中和抗体效价达4096。羊和兔抗体均可与新型冠状病毒S蛋白特异性结合。应用纯化后的抗体,成功建立了检测抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,该方法线性良好,R^(2)>0.99,可用于新型冠状病毒灭活疫苗原液抗原含量的检测。结论成功制备了羊和兔抗新型冠状病毒S蛋白高效价抗体,并初步建立了新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 抗血清效价 酶联免疫吸附试验 抗原含量

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速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量 被引量：6

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作者 陈琼 李茂光 +4 位作者 李红 王春娥 石继春 陈翠萍 叶强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第7期718-722,共5页

目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量,并对方法进行验证。方法采用免疫化学系统（IMMAGE 800）,选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μl,血清20μl,反应缓冲液200μl,增益系数为4,反应时间为2.5 min;样品... 目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量,并对方法进行验证。方法采用免疫化学系统（IMMAGE 800）,选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μl,血清20μl,反应缓冲液200μl,增益系数为4,反应时间为2.5 min;样品离心沉淀后用缓冲溶液复溶,经Na OH解吸附法处理样品和标准品。对方法进行线性、重复性、准确性、专属性、适用性验证,并采用建立的方法检测3批13价肺炎球菌结合疫苗样品中的各型多糖抗原含量。结果在设定的条件下,各型多糖抗原浓度在1-6μg/ml范围内,线性良好（相关系数〉0.99）;各型多糖抗原含量重复检测的相对标准偏差（RSD）均低于8%;13型多糖结合抗原含量的回收率在70%-130%之间;6A与19A型特异性血清与其他12型多糖抗原有交叉反应,但与阳性对照的比值均较低（〈5%）,其他12种特异性血清特异性良好,无交叉反应;除1、3型抗原外,其余型别的游离多糖抗原基本不干扰结合抗原的检测结果。结论建立的速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量重复性、准确性良好,1、3型结合抗原不适用于直接离心沉淀获得。 展开更多

关键词 速率比浊法 13价肺炎球菌结合疫苗 结合多糖抗原含量

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第二代肠道病毒71型(EV71)抗原国家标准品的建立 被引量：5

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作者 高帆 卞莲莲 +4 位作者 吴星 么山山 王一平 毛群颖 梁争论 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1069-1075,共7页

目的建立第二代肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原国家标准品,用于体外效力(EV71抗原含量)质量控制。方法选取与第一代EV71抗原国家标准品相同来源的原料和冻干方法制备候选标准品(CS),经均匀性和稳定性考核合格后,分发给4个实验室... 目的建立第二代肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原国家标准品,用于体外效力(EV71抗原含量)质量控制。方法选取与第一代EV71抗原国家标准品相同来源的原料和冻干方法制备候选标准品(CS),经均匀性和稳定性考核合格后,分发给4个实验室,以EV71抗原国际标准品(WHO IS)和第一代EV71抗原国家标准品(NS)为标准进行协作标定及适用性研究。结果 CS与WHO IS及CS与NS均具有良好的平行性和线性。以WHO IS为标准时,CS检测的平均值为2 316 IU/mL,实验室内CV为4.3%~9.3%,实验室间CV为7.1%,95%置信区间为2 229~2 403 IU/mL;以NS为标准时,CS检测平均值为2 437 U/mL,实验室内CV为3.9%~10.7%,实验室间CV为5.3%,95%置信区间为2 355~2 519 U/mL。以CS为标准检测各企业生产的EV71收获液、原液和疫苗均具有较好的平行性和线性,且准确率均位于90%~110%之间。在2~8和37℃放置56 d,CS抗原含量稳定;CS复溶后置2~8℃保存7 d或-20℃反复冻融5次,抗原含量残留率均未超过90%~110%。结论建立了第二代EV71抗原国家标准品,赋值2 320 IU/mL(相当于2 440 U/mL)。 展开更多

关键词 手足口病 肠道病毒71型 抗原含量 国家标准品

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检测狂犬病疫苗抗原含量的竞争ELISA的建立及初步应用 被引量：4

6

作者 周志军 孙文 +3 位作者 施金荣 朱华松 陈雪婷 王平 《微生物学免疫学进展》 2007年第4期28-31,共4页

为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助... 为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助检测手段。 展开更多

关键词 竞争ELISA 狂犬病毒 抗原含量

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仔猪大肠杆菌·C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺 被引量：2

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作者 刘泽文 袁芳艳 +5 位作者 周丹娜 梁望旺 段正赢 杨克礼 徐涤平 田永祥 《安徽农业科学》 CAS 2012年第17期9276-9277,9279,共3页

[目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可... [目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可产生较高含量的纤毛抗原;当接种剂量为1%～2%,C型产气荚膜梭菌C59-2菌株在35℃条件下培养16～20 h,可产生大量致死性毒素。[结论]该研究为研制具有较好效果的仔猪红痢、黄痢预防疫苗提供了依据。 展开更多

关键词 大肠杆菌 C型产气荚膜梭菌 培养工艺 抗原含量 仔猪红痢 仔猪黄痢

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口蹄疫疫苗中免疫原含量和中和抗体滴度的关系 被引量：1

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作者 李乐 苗海生 +4 位作者 廖德芳 胡骑 信爱国 朱明旺 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第1期88-90,共3页

为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免... 为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免疫和加强免疫的血清,用细胞微量中和试验检测中和抗体滴度,研究免疫效果。结果表明,当免疫的口蹄疫病毒颗粒含量大于1.5μg时,增加免疫量不能增加中和抗体滴度,当免疫量大于7.5μg时,中和抗体滴度有所下降。该研究结果对于开发口蹄疫疫苗具有指导意义。 展开更多

关键词 口蹄疫 免疫原含量 抗体滴度 完全病毒颗粒

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乳腺囊性增生病癌变过程中部分因素变化的意义 被引量：5

9

作者 姜军 詹新恩 +2 位作者 谷成明 黄朴厚 柳凤轩 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期334-339,共6页

检测乳腺囊性增生病（ＦＣＤ）经不典型增生到癌变部分因素的变化。结果提示：从因明显ＦＣＤ症状活检至癌变为２～１０年；从Ⅱ级以上不典型增生到临床癌变需２～７年；癌变率为３．１％。ＦＣＤ患者存在性激素分泌调控失常，血浆雌激... 检测乳腺囊性增生病（ＦＣＤ）经不典型增生到癌变部分因素的变化。结果提示：从因明显ＦＣＤ症状活检至癌变为２～１０年；从Ⅱ级以上不典型增生到临床癌变需２～７年；癌变率为３．１％。ＦＣＤ患者存在性激素分泌调控失常，血浆雌激素和催乳素含量增加，导致上皮细胞增生。乳腺一般性增生细胞的ＤＮＡ含量和超微结构与正常乳腺上皮细胞相似；无肿瘤相关抗原及异常基因产物表达。而发生在一般性增生基础上的不典型增生则呈现细胞基因物质ＤＮＡ含量增加，部分为超４Ｃ的多倍体细胞；同时出现细胞膜和细胞核超微结构异常；雌激素受体含量增加，对性激素的依赖性和敏感性增强；部分不典型增生细胞出现胚胎性肿瘤相关抗原和异常基因产物表达。随不典型增生程度加重至乳腺癌，上述诸因素的变化趋势具有明显规律性。提示ＦＣＤ上皮细胞从一般性增生经不典型增生至乳腺癌为细胞生物学连续逐渐变化的过程。部分不典型增生细胞中具有癌倾向的细胞生物学行为异常和表型变化与乳腺癌发生密切相关。 展开更多

关键词 乳腺囊性增生病 乳腺肿瘤 雌激素类 催乳素 DNA

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增殖细胞核抗原表达及细胞核DNA含量在胃癌早期诊断中的意义 被引量：5

10

作者 梁雨荣 郑泽霖 何尔斯泰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1998年第11期810-812,共3页

应用免疫组化ＬＳＡＢ法及流式细胞分析技术（ＦＣＭ），对１２例早期胃癌，１５例胃癌前病变（８例胃粘膜中～重度不典型增生，７例轻度不典型增生）及６例正常胃粘膜增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及细胞核ＤＮＡ含量进行了测定。... 应用免疫组化ＬＳＡＢ法及流式细胞分析技术（ＦＣＭ），对１２例早期胃癌，１５例胃癌前病变（８例胃粘膜中～重度不典型增生，７例轻度不典型增生）及６例正常胃粘膜增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及细胞核ＤＮＡ含量进行了测定。着重探讨了胃粘膜癌变过程中ＰＣＮＡ的表达及ＤＮＡ含量变化的意义，试图为胃癌的早期诊断提供客观依据。结果表明：ＰＣＮＡ标记指数（ＬＩ）随胃粘膜病变程度的加重呈递增趋势。中～重度不典型增生与早期胃癌之间无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ＤＮＡ非整倍体检出率比较，早期胃癌明显高于胃粘膜轻度不典型增生组（Ｐ＜０．０１）。 展开更多

关键词 胃癌 增殖细胞核抗原 DNA含量 诊断

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DF-1细胞替代CEF细胞测定IBDV液抗原含量和血清中和抗体效价的研究 被引量：1

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作者 李林 沈佳 +5 位作者 史爱华 赵蕾 习硕 姜北宇 张建伟 章振华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第15期90-92,97,共4页

为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定... 为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定了6批次IBDV BJQ902株病毒液抗原含量和用不同剂量ND、IB、IBD三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+BJQ902株)免疫SPF鸡血清和未免疫SPF鸡血清的中和抗体效价。结果表明:6批次病毒液病毒含量为1×10^(7.7)~1×10^(8.1)TCID50/0.1 mL,两种细胞对同一批次病毒样品的测定结果一致,重复测定无差异;IBDV阳性血清样品中和抗体效价为8~17 lb,两种细胞对同一血清样品中和抗体效价的检测结果无差异。说明DF-1细胞可以替代CEF细胞作为培养基质,用于IBDV液抗原含量及血清中和抗体效价的测定。 展开更多

关键词 DF-1细胞 CEF细胞 鸡传染性法氏囊病毒 抗原含量 中和抗体效价

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胃癌淋巴结转移与c-erbB-2蛋白、PCNA、DNA含量间关系的研究 被引量：3

12

作者 陈至善 徐建军 熊显华 《临床肿瘤学杂志》 CAS 1997年第3期14-16,共3页

目的:为探索胃癌淋巴结转移与c-erbB-2、PCNA(增殖细胞核抗原)、DNA含量间的关系。方法:应用免疫组化ABC法和流式细胞术DNA分析技术,检测胃癌标本64例,其中淋巴结转移组40例,淋巴结未转移组24例,结果:c-erbB-2蛋白表达两组阳性率分别为4... 目的:为探索胃癌淋巴结转移与c-erbB-2、PCNA(增殖细胞核抗原)、DNA含量间的关系。方法:应用免疫组化ABC法和流式细胞术DNA分析技术,检测胃癌标本64例,其中淋巴结转移组40例,淋巴结未转移组24例,结果:c-erbB-2蛋白表达两组阳性率分别为45％、20.8％(P<0.05);PCNA表达阳性率分别为51.1±18.7％、31.6±19.6％(P<0.01);DNA异倍体率分别为55％、20.8％(P<0.05)。结论:以上结果表明淋巴结转移组胃癌的c-erbB-2表达过度,产生大量生长因子或生长因子受体,促进细胞有丝分裂,处于增殖状态的细胞增多,致PCNA阳性率高,DNA异倍体率高,细胞间粘着力降低,致淋巴结易发生转移,生物学恶性度大,预后差。 展开更多

关键词 胃癌 PCNA 淋巴结转移 DNA含量 阳性率 C-ERBB-2蛋白 DNA异倍体 细胞 免疫组化ABC法 CERBB-2

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喉癌细胞PCNA表达和DNA含量与临床预后的关系 被引量：1

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作者 凌玲 周敏妤 +1 位作者 王辉萼 丁伟 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期112-113,共2页

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达和DNA含量对喉癌临床生物学特征及预后的关系。方法　用免疫组化SP方法和自动图像分析仪检测正常喉粘膜、喉鳞癌的PCNA和DNA指数 (DI) ,结合临床随访资料进行分析。结果　喉鳞癌PCNA的阳性表达率... 目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达和DNA含量对喉癌临床生物学特征及预后的关系。方法　用免疫组化SP方法和自动图像分析仪检测正常喉粘膜、喉鳞癌的PCNA和DNA指数 (DI) ,结合临床随访资料进行分析。结果　喉鳞癌PCNA的阳性表达率为 10 0 % ,与正常喉组织有显著差异 (P <0 0 1) ,PCNA阳性表达强度和DNA指数随肿瘤分化程度的降低而相应增高 (P<0 0 5 )。两指标较高者生存时间较短 ,预后较差 (P <0 0 5 )。 展开更多

关键词 喉肿瘤 鳞状细胞癌 增殖细胞核抗原 DNA指数

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乳腺癌雌激素受体、孕激素受体和癌胚抗原及其与DNA含量关系的研究 被引量：1

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作者 孔庆兖 张佩瑜 周镇 《徐州医学院学报》 CAS 1992年第3期187-190,共4页

应用PAP方法对50例乳腺癌、10例乳腺纤维瘤和10例乳腺小叶增生症石蜡切片进行雌激素受体、孕激素受体和癌胚抗原检测,其中30例乳腺癌应用JX-1医用图象分析系统测定了细胞核DNA含量。结果表明:(1)三种生物学标志物在乳腺癌的表达率分别... 应用PAP方法对50例乳腺癌、10例乳腺纤维瘤和10例乳腺小叶增生症石蜡切片进行雌激素受体、孕激素受体和癌胚抗原检测,其中30例乳腺癌应用JX-1医用图象分析系统测定了细胞核DNA含量。结果表明:(1)三种生物学标志物在乳腺癌的表达率分别为68％、66％和64％;(2)三种生物学标志物的表达与乳腺癌分化程度密切相关;(3)三种生物学标志物与乳腺癌细胞核DNA含量具有良好的相关性。提示:癌胚抗原在乳腺癌有较高的表达率,可望作为乳腺癌早期诊断和鉴别诊断的辅助手段;三种生物学标志物和D-NA含量能够反映乳腺癌的分化程度,均可作为评估预后的指标。 展开更多

关键词 乳腺癌 雌激素 孕激素 受体

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鼻咽癌细胞增殖活性与放射敏感性相关关系的研究 被引量：2

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作者 黄阗 陈茂怀 +1 位作者 吴名耀 吴贤英 《中国临床医学》 北大核心 2007年第1期122-124,共3页

目的:探讨鼻咽癌细胞增殖活性指标有丝分裂指数(mitotic index,MI)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti—gen,PCNA)、p53蛋白、DNA含量和癌细胞核形态参数与放射敏感性的关系。方法:收集51例放疗前鼻咽癌组织标本,HE染色... 目的:探讨鼻咽癌细胞增殖活性指标有丝分裂指数(mitotic index,MI)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti—gen,PCNA)、p53蛋白、DNA含量和癌细胞核形态参数与放射敏感性的关系。方法:收集51例放疗前鼻咽癌组织标本,HE染色作病理组织学诊断和MI计数;免疫组化法检测PCNA和p53蛋白表达情况;Feulgen染色和图像分析法检测鼻咽癌DNA含量和细胞核的形态定量参数。结果:51例鼻咽癌组织中,完全消退组MI高于残留组(P＜0．05);PCNA和p53蛋白表达阳性音分别有50例(98．0%)和46例(90．2%),高表达者分别有16例(31．4%)和22例(43．1%);PCNA和p53蛋白的阳性表达水平越高,则鼻咽癌对放射治疗越敏感,放疗后鼻咽局部癌肿完全消退率越高(P＜0．05);PCNA和p53蛋白同时高表达者比单一指标高表达者,对其放射敏感性更高(P＜0．05);鼻咽癌完全消退组DI、DNA异倍体细胞所占百分率、细胞核形态参数面积、周长和直径均比残留组高。结论:MI、PCNA、p53蛋白、DNA含量和癌细胞核形态参数是反映鼻咽癌放射敏感性和预测其近期疗效的重要指标。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 增殖细胞核抗原 P53蛋白 DNA含量 形态学 形态定量学 放射敏感性

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重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液性质研究

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作者 胡丽娜 常娅莉 +4 位作者 万艳 张轶 吴智远 卜培英 王秉翔 《微生物学免疫学进展》 2012年第3期19-25,共7页

目的进行重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液二聚体含量及性质研究,确定LcrV原液的相关质控标准。方法在不同缓冲体系(0.85%NaCl(NS)、20 mmol/L PBS),不同蛋白浓度(2.0、1.5、1.0、0.5、0.1 mg/mL)及不同保存温度(4℃、-20℃、-70℃)条件下... 目的进行重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液二聚体含量及性质研究,确定LcrV原液的相关质控标准。方法在不同缓冲体系(0.85%NaCl(NS)、20 mmol/L PBS),不同蛋白浓度(2.0、1.5、1.0、0.5、0.1 mg/mL)及不同保存温度(4℃、-20℃、-70℃)条件下保存LcrV抗原,采用SDS-PAGE和HPSEC方法定期检测LcrV二聚体含量及纯度。将连续三批检定合格的LcrV抗原原液进行质谱相对分子质量测定、等电点测定、N末端氨基酸序列测定、圆二色(CD)谱、HPLC肽谱及氨基酸组成分析,研究LcrV抗原的相关性质。结果随着保存时间的延长LcrV抗原二聚体含量增加,低温保存时二聚体不易大量形成。在-20℃和-70℃条件下,NS保存的LcrV抗原比PBS体系保存稳定,而在4℃条件下NS保存的LcrV抗原容易降解。LcrV抗原高浓度保存容易发生聚合。LcrV抗原在低质量浓度(0.1 mg/mL)保存时免疫学活性明显下降。质谱检测到LcrV单体和二聚体共同存在,且与理论相对分子质量一致。LcrV原液检测等电点范围为4.6～6.3。N末端测序、CD谱、HPLC肽谱图及氨基酸组成分析与理论结果一致。结论 LcrV抗原原液保存条件确定为:NS体系,蛋白质量浓度1.0～2.0 mg/mL,-20℃以下冻存。制备的LcrV抗原各项检测结果与理论结果一致,抗原性质稳定。 展开更多

关键词 重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原 二聚体含量 性质

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用火箭电泳法检测人用狂犬病疫苗半成品抗原含量初探

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作者 卓金蓉 黄凤琼 《微生物学免疫学进展》 1998年第1期29-32,共4页

用火箭电泳法（ＲＩＥ）检测了５批ａＧ株地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗半成品（未加吸附剂）的抗原含量。结果表明，ＲＩＥ法快速、简便、准确。峰高与浓度的线性相关系数ｒ〉０．９９５０，待检疫苗与标准品的剂量反应曲线高度一致，试验... 用火箭电泳法（ＲＩＥ）检测了５批ａＧ株地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗半成品（未加吸附剂）的抗原含量。结果表明，ＲＩＥ法快速、简便、准确。峰高与浓度的线性相关系数ｒ〉０．９９５０，待检疫苗与标准品的剂量反应曲线高度一致，试验的灵敏度为０．１５ＩＵ／ｍｌ，重复性好，５次结果的变异系统ＣＶ％≤５．７４％。因此。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗 抗原 火箭电泳

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鼻咽泡状核细胞癌DNA含量与PCNA计数的研究 被引量：2

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作者 陈茂怀 沈健 +2 位作者 吴贤英 吴名耀 梅品超 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期221-223,共3页

应用流式细胞仪和免疫组化技术对１２例鼻咽泡状核细胞癌和３３例低分化鳞癌的ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行分析。结果显示：泡状核细胞癌的ＤＮＡ指数、非整倍体率和ＰＣＮＡ阳性率均高于低分化鳞癌，表明泡状核细胞癌... 应用流式细胞仪和免疫组化技术对１２例鼻咽泡状核细胞癌和３３例低分化鳞癌的ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行分析。结果显示：泡状核细胞癌的ＤＮＡ指数、非整倍体率和ＰＣＮＡ阳性率均高于低分化鳞癌，表明泡状核细胞癌分化程度低于后者。并初步探讨ＤＮＡ与ＰＣＮＡ所反映的泡状核细胞癌生长生物学特征与预后的联系。Ｐ＜０．０１２．３鼻咽泡状核细胞癌和低分化鳞癌的ＤＮＡ倍体测定见表２。表２泡状核细胞癌和低分化鳞癌ＤＮＡ倍体的测定与低分化鳞癌相比Ｐ＜０．０１３讨论众所周知，ＤＮＡ异倍体是恶性肿瘤的特征，而ＰＣＮＡ可作为细胞增殖状态的一个指标［３］。本文采用流式细胞仪和ＰＣＮＡ免疫组化技术同时对鼻咽泡状核细胞癌的ＤＮＡ含量和ＰＣＮＡ计数进行研究，发现泡状核细胞癌的异倍体发生率为９１．７％，呈现非整倍体或四倍体核型，明显高于低分化鳞癌，后者在ＤＮＡ二倍体／近二倍体核型和非整倍体／四倍体核型的分布大致相等，其ＤＩ值和ＰＣＮＡ阳性率远低于泡状核细胞癌。宗永生等［４］曾报道泡状核癌细胞群体１２例中７例癌细胞众数的ＤＮＡ大于二倍体含量，８例泡状核细胞癌癌细胞总数中其众数癌细胞位于二倍体和四倍体之间，也说明其ＤＮＡ含量大于二倍体，本? 展开更多

关键词 鼻咽癌 DNA含量 流式细胞仪 增殖细胞核抗原

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慢性乙型肝炎肝组织学分级与血清HBV DNA及HBeAg定量的关系 被引量：3

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作者 柴艳峰 高玉玺 刘学键 《临沂医学专科学校学报》 2003年第1期5-7,共3页

目的　 探讨慢性乙型肝炎肝内炎性变化与HBVDNA定量及HBeAg定量的关系 ,为临床正确判断病期和治疗提供依据。方法　 应用荧光定量PCR法和放免法 ,分别对 10 2例慢性乙肝患者血清中HBVDNA和HBeAg含量进行定量检测 ,同时采用常规 1s肝穿... 目的　 探讨慢性乙型肝炎肝内炎性变化与HBVDNA定量及HBeAg定量的关系 ,为临床正确判断病期和治疗提供依据。方法　 应用荧光定量PCR法和放免法 ,分别对 10 2例慢性乙肝患者血清中HBVDNA和HBeAg含量进行定量检测 ,同时采用常规 1s肝穿刺活检法行肝穿病理组织学检查。结果　10 2例乙型肝炎患者肝内炎症组织学分级与HBVDNA定量无相关性。 4 5例HBeAb阳性患者的肝内炎症组织学分级与HBVDNA定量呈明显的相关。 5 7例HBeAg阳性患者肝内炎症组织学分级与HBVDNA无明显的相关 ,但有降低的趋势 ,肝内炎症组织学分级与HBeAg定量显著相关。结论　 在非免疫耐受期的慢性乙肝患者 ,血清HBVDNA复制水平与肝内炎症活动程度相关 ,肝内炎症患者与血清HBeAg含量密切相关 ,提示检测慢性乙型肝炎患者血清HBV 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 组织学分级 血清 HBV DNA HBeAg 荧光定量PCR法 放射免疫法

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重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒的研制 被引量：3

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作者 安超强 刘东 +10 位作者 卞莲莲 刘明琛 么山山 徐康维 李长贵 吴星 毛群颖 高帆 徐苗 姜崴 梁争论 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期411-418,共8页

目的制备重组严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒,并进行验证。方法选用中国食品药品检定研究院(简称中检院)制备的羊抗S蛋白多克隆抗体作为包... 目的制备重组严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒,并进行验证。方法选用中国食品药品检定研究院(简称中检院)制备的羊抗S蛋白多克隆抗体作为包被抗体,从4株单克隆抗体(14C8、15F9、17A7和20D8)中筛选出1株具有受体结合域(receptor-binding domain,RBD)结合活性高,且广谱抗主要突变株的单克隆抗体作为酶标抗体(用HRP标记),制备重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量的双抗体夹心ELISA法通用检测试剂盒,并采用棋盘滴定法对包被抗体稀释度(1∶125~1∶4000)和酶标抗体稀释度(1∶250~1∶32000)进行优化。验证试剂盒的专属性、线性范围、准确性、精密性及耐用性。将制备的通用检测试剂盒分发给12个实验室,检测各实验室自制的不同表达系统(CHO细胞、毕赤酵母、Sf9细胞或大肠埃希菌)和目的蛋白(RBD或S蛋白)的15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液(包括11批以WT株为参考序列设计的原液及4批以Beta、Gamma和Delta变异株设计的原液)。结果确定包被抗体最佳稀释度为1∶500,单克隆抗体20D8作为酶标抗体,最佳稀释度为1∶4000。通用检测试剂盒与严重急性呼吸综合征(SARS)和中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)病毒的重组S蛋白无交叉反应;第1代重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原国家标准品(简称国家标准品)浓度在0.16~2.50 U/mL范围内,与A450/630呈良好的线性关系,线性方程为:y=0.791 x-0.1004,R2=0.9937;0.16~2.50 U/mL国家标准品重复6次检测结果回收率均在95%~104%之间,变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;2名实验员在不同时间重复3次检测结果的CV为4.4%~6.6%;在不同温度及时间条件下检测结果回收率均在80%~120%范围内。15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液抗原含量的检测结果与国家标准品均具有良好的平行性。结论本研究建立的抗原含量通用检测试剂盒具有良好的专属性、准确性、精密性及耐用性,可用于重组SARSCoV-2蛋白疫苗抗原含量的检测。 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 重组蛋白疫苗 抗原含量 通用试剂盒

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