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Secretase inhibition in Alzheimer's disease therapeutics reveals functional roles of amyloid-beta42
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作者 Timothy Daly Bruno P.Imbimbo 《Neural Regeneration Research》 2026年第5期2003-2004,共2页
In the words of the late Sir Colin Blakemore,neurologists have historically sought to infer brain functions in a manner akin to to king a hammer to a computeranalyzing localized anatomical lesions caused by trauma,tum... In the words of the late Sir Colin Blakemore,neurologists have historically sought to infer brain functions in a manner akin to to king a hammer to a computeranalyzing localized anatomical lesions caused by trauma,tumors,or strokes,noting deficits,and inferring what functions certain brain regions may be responsible for.This approach exemplifies a deletion heuristic,where the absence of a specific function reveals insights about the underlying structures or mechanisms responsible for it.By observing what is lost when a particular brain region is damaged,throughout the history of the field,neurologists have pieced together the intricate relationship between anatomy and function. 展开更多
关键词 infer brain functions secretase inhibition Alzheimers disease therapeutics king hammer deletion heuristic amyloid beta deletion heuristicwhere observing what l
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各大工业软件内置单位换算器的开源
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作者 姜嘉伟 农凯翔 殷亚军 《铸造工程》 2025年第4期61-66,共6页
目前很多工业软件在使用中会出现单位换算的需要,用户此前只能通过在软件外部进行换算,或者在软件内进行固定的单位换算,十分繁琐,本研究用于实现软件内置简便换算,并同时带有用户可自定义换算内容的功能。此次研究通过基于文件的动态... 目前很多工业软件在使用中会出现单位换算的需要,用户此前只能通过在软件外部进行换算,或者在软件内进行固定的单位换算,十分繁琐,本研究用于实现软件内置简便换算,并同时带有用户可自定义换算内容的功能。此次研究通过基于文件的动态编码规则和用户自定义记忆存储,解决了传统单位换算器扩展性不足的问题,利用MFC(微软基础类库)实现人机交互对话框,研究出了新款、自由度极高的单位换算器程序,最终实现了软件内部的单位换算系统。 展开更多
关键词 单位换算 自定义 可增删 记忆 动态可配置性
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人源RNA解旋酶DHX34基因功能结构域缺失载体的构建及鉴定
3
作者 黄立敏 张春丽 +2 位作者 李泽雨 孙晋 田红卫 《山西医科大学学报》 2025年第1期20-27,共8页
目的 分别构建人源RNA解旋酶DHX34基因不同功能结构域缺失的突变载体,测序分析和验证其在293T细胞中的蛋白表达。方法 以pECMV-hDHX34-3×FLAG-SV40-Puro(hDHX34)质粒为模板,根据同源重组克隆的技术原理设计不同功能结构域引物,通... 目的 分别构建人源RNA解旋酶DHX34基因不同功能结构域缺失的突变载体,测序分析和验证其在293T细胞中的蛋白表达。方法 以pECMV-hDHX34-3×FLAG-SV40-Puro(hDHX34)质粒为模板,根据同源重组克隆的技术原理设计不同功能结构域引物,通过聚合酶链式反应扩增片段,重组克隆到pECMV-MCS-3×FLAG-SV40-Puro空载上,经限制性酶切、重组、转化分别构建ΔNTD、ΔCTD、ΔRecA1、ΔRecA2、ΔHelicase、ΔOB、ΔWR载体。经测序验证后,利用脂质体转染293T细胞,Western blot检测各载体蛋白的表达。结果 测序结果与预期结果相符,证实人源RNA解旋酶DHX34基因不同功能结构域缺失的真核表达载体构建成功。核酸电泳结果显示,hDHX34及突变质粒ΔNTD、ΔCTD、ΔRecA1、ΔRecA2、ΔHelicase、ΔWR和ΔOB片段长度符合预期,证明质粒构建成功。Western blot结果显示,293T细胞分别转染ΔNTD、ΔCTD、ΔRecA1、ΔRecA2、ΔHelicase、ΔWR、ΔOB载体后,蛋白条带清晰可见且符合预期相对分子量,说明质粒转染成功,hDHX34及各突变质粒成功表达。结论成功构建人源RNA解旋酶DHX34基因不同功能结构域缺失的突变载体,并验证了各载体的表达情况,为研究人源DHX34基因的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 RNA解旋酶 DHX34基因 功能结构域缺失 载体构建 重组克隆 限制性内切酶
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Novel Deletion in Exon 7 of Betaine Aldehyde Dehydrogenase 2(BADH2) 被引量:1
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作者 VAN Quoc Giang HUYNH Ky +5 位作者 NGUYEN Chau Thanh Tung NGUYEN Loc Hien NGUYEN van Manh NGUYEN Nhut Thanh VO Cong Thanh SWEE Keong Yeap 《Rice science》 SCIE CSCD 2023年第2期104-112,I0020-I0030,共20页
The fragrance of rice is one of the premium characteristics that breeders want to include in rice varieties due to the higher market value. Nucleotide deletions in exons 2(7 bp) and 7(8 bp) of Betaine Aldehyde Dehydro... The fragrance of rice is one of the premium characteristics that breeders want to include in rice varieties due to the higher market value. Nucleotide deletions in exons 2(7 bp) and 7(8 bp) of Betaine Aldehyde Dehydrogenase 2(BADH2) are associated with fragrance in rice. In this study, a new 13 bp deletion in exon 7 of the BADH2 gene was discovered in the Nang Thom Cho Dao(NTCD) variety, and the mutation has been closely related to the genetic background of indica subspecies through the Bayesian phylogenetic approach and haplotype network analysis of the 3 000 Rice Genomes Project. In addition, a set of functional markers(EX07-13F, EX07-13RN, and EX07-13RM) identified the 13 bp deletion only within NTCD(no amplified band) compared with both non-aromatic and other aromatic rice varieties(110 bp band). The deletion of 13 bases instead of 8 bases in exon 7 of BADH2 caused a premature stop codon, which down-regulated the expression of the BADH2 transcript while associated with up-regulation of OsP5CS and the high amount of 2-acetyl-1-pyrroline. It is potential to use the deletion in exon 7 of the BADH2 gene as a novel marker for adulteration and breeding of fragrant rice varieties, particularly for NTCD. 展开更多
关键词 novel deletion BADH2 fragrant rice functional marker
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自身免疫性肝病患者血清PRDX1、PTEN水平及其与肝功能、疾病活动性的关系 被引量:3
5
作者 李青 周路艳 +1 位作者 谭智 刘灵芝 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第14期1682-1686,共5页
目的探讨过氧化物氧化还原蛋白(PRDX)1、第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)水平与自身免疫性肝病患者肝功能、疾病活动性的关系。方法选取2021年1月至2022年12月该院收治的83例自身免疫性肝病患者作为研究对象,根据入... 目的探讨过氧化物氧化还原蛋白(PRDX)1、第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)水平与自身免疫性肝病患者肝功能、疾病活动性的关系。方法选取2021年1月至2022年12月该院收治的83例自身免疫性肝病患者作为研究对象,根据入院时疾病活动性分为活动期组(37例)、缓解期组(46例),统计两组临床资料及入院时血清PRDX1、PTEN水平,同时对患者进行肝功能Child-Pugh分级并分组。选取同期体检的100例健康志愿者作为对照组。采用多因素Logistic逐步回归分析自身免疫性肝病患者疾病活动性的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析治疗后血清PRDX1、PTEN水平对自身免疫性肝病患者疾病活动性的评估价值。结果与A级组比较,B级组血清PRDX1、PTEN水平差异无统计学意义(P>0.05),而C级组血清PRDX1水平升高,PTEN水平降低(P<0.05);与B级组相比,C级组血清PRDX1水平升高、PTEN水平降低(P<0.05);与对照组比较,缓解期组血清PRDX1、PTEN水平差异无统计学意义(P>0.05),而活动期组血清PRDX1水平升高、PTEN水平降低(P<0.05);与缓解期组相比,活动期组血清PRDX1水平升高、PTEN水平降低(P<0.05)。血清PRDX1、PTEN判断自身免疫性肝病患者疾病活动性的AUC分别为0.750、0.854,二者联合预测的AUC为0.916。活动期组患者肝区不适、肝硬化占比高于缓解期组(P<0.05);多因素Logistic逐步回归分析显示,肝区不适(OR=3.487,95%CI:1.534~7.927),肝硬化(OR=4.289,95%CI:1.744~10.545),PRDX1≥5.22 ng/mL(OR=5.068,95%CI:1.951~13.164),PTEN≤0.31 pg/mL(OR=5.387,95%CI:2.099~13.829)是影响自身免疫性肝病疾病活动性的危险因素(P<0.05)。结论血清PRDX1水平升高、PTEN水平降低与自身免疫性肝病患者肝功能、疾病活动性密切相关,二者对自身免疫性肝病患者具有一定临床评估价值。 展开更多
关键词 自身免疫性肝病 过氧化物氧化还原蛋白1 第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因 肝功能 疾病活动性
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2型猪链球菌pnp基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性的研究 被引量:6
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作者 杨文琳 许秋 +6 位作者 周龙玉 林龙华 柴霁芸 马彩萍 侯杰 祝瑶 张万江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期221-228,共8页
为研究2型猪链球菌(SS2) pnp基因的生物学功能,本研究通过基因无痕操作技术构建SS2 05ZYH33pnp基因缺失株Δpnp以及回补株CΔpnp,经PCR和测序鉴定结果表明,正确构建了pnp基因无痕缺失株和回补株。将05ZYH33、Δpnp以及CΔpnp分别在不同... 为研究2型猪链球菌(SS2) pnp基因的生物学功能,本研究通过基因无痕操作技术构建SS2 05ZYH33pnp基因缺失株Δpnp以及回补株CΔpnp,经PCR和测序鉴定结果表明,正确构建了pnp基因无痕缺失株和回补株。将05ZYH33、Δpnp以及CΔpnp分别在不同温度(28℃、37℃、42℃)培养后测定OD_(600nm)值,绘制各菌株的生长曲线;利用革兰氏染色后经镜检及透射电镜观察各菌株的形态结构;通过滴定微孔平板结晶紫法检测各菌株的生物被膜形成能力;采用接触法分析各菌株的溶血特性;于含不同抗生素的THB平板上培养各菌株,分析各菌株的药物敏感性;于氧化条件与酸性条件下培养各菌株,通过统计存活率评价各菌株的氧化耐受与酸耐受能力。结果显示,缺失株的生长速率明显低于野生株和回补株,且在冷应激条件下的生存能力下降;与野生株和回补株相比,缺失株细胞壁肽聚糖层的结构更加松散、溶血能力下降、生物被膜形成能力下降、对不同类型抗生素的敏感性增强、抗氧化与抗酸能力均下降。上述结果表明pnp基因是SS2的一个重要调节因子,参与调节细菌对外界环境变化的适应能力。本研究为科学防控猪链球菌病以及研发新型抗菌药物奠定基础。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 pnp基因 基因缺失 生物学功能
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基于基因敲除技术的非洲猪瘟病毒基因功能的研究进展 被引量:1
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作者 关雪 赵启祖 +1 位作者 邹兴启 彭国瑞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第21期93-99,共7页
非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是一种具有二十面体多层结构的大型双链DNA病毒,基因组庞大并编码多种蛋白质,其中多数基因的功能尚不完全清楚。通过敲除单个或多个基因研究基因功能及不同基因之间的相互作用关系是目前... 非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是一种具有二十面体多层结构的大型双链DNA病毒,基因组庞大并编码多种蛋白质,其中多数基因的功能尚不完全清楚。通过敲除单个或多个基因研究基因功能及不同基因之间的相互作用关系是目前常用的研究ASFV的方法之一。文章梳理了近年来不同基因敲除后ASFV的细胞适应性、体外复制能力、细胞因子表达的变化,以及不同基因缺失病毒与亲本毒株在侵染细胞和感染动物致病力方面的差异,接种动物后产生的免疫反应等,总结了各个缺失基因的功能,以期为ASFV基因的研究提供借鉴。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 基因缺失 功能 毒力 免疫
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口腔修复治疗对牙列缺失患者牙周功能与牙齿美观度的影响 被引量:7
8
作者 王俊红 张小松 《临床医学工程》 2024年第1期49-50,共2页
目的探讨口腔修复治疗对牙列缺失患者牙周功能与牙齿美观度的影响。方法选择2019年5月至2023年5月我院收治的60例牙列缺失患者随机分为两组,对照组应用常规口腔修复治疗,观察组采用口腔种植修复治疗。比较两组的牙齿功能、牙周状态、牙... 目的探讨口腔修复治疗对牙列缺失患者牙周功能与牙齿美观度的影响。方法选择2019年5月至2023年5月我院收治的60例牙列缺失患者随机分为两组,对照组应用常规口腔修复治疗,观察组采用口腔种植修复治疗。比较两组的牙齿功能、牙周状态、牙齿美观度。结果治疗后,观察组舒适功能、咀嚼功能、固位功能评分高于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组牙周探诊深度(PD)、探诊出血指数(PBI)、菌斑指数(PI)低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组牙体外形、牙体色泽评分高于对照组(P<0.05)。结论口腔种植修复治疗可显著提升牙列缺失患者的牙齿功能,改善其牙周状态,患者术后牙齿美观度更高,临床价值显著。 展开更多
关键词 口腔种植修复 牙列缺失 牙周功能 牙齿美观度
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凉膈白虎汤加减治疗重症肺炎的临床疗效及HMGB1、sTREM-1、IFN-γ表达变化 被引量:8
9
作者 车启富 何丽杰 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期177-181,共5页
目的分析凉膈白虎汤加减治疗重症肺炎的疗效及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、干扰素-γ(IFN-γ)水平变化。方法选取2021年1月—2023年1月佳木斯市中医医院收治的重症肺炎患者80例,随机数字表法分为对照组... 目的分析凉膈白虎汤加减治疗重症肺炎的疗效及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、干扰素-γ(IFN-γ)水平变化。方法选取2021年1月—2023年1月佳木斯市中医医院收治的重症肺炎患者80例,随机数字表法分为对照组与试验组,每组各40例,对照组在西医常规对症支持治疗基础上,给予盐酸氨溴索注射液静脉滴注进行祛痰;试验组予以凉膈白虎汤加减治疗祛痰,两组均治疗14 d,比较两组治疗疗效及HMGB1、sTREM-1、IFN-γ水平。结果治疗14 d后,试验组和对照组治疗有效率分别为92.50%和72.50%,比较有统计学差异(χ~2=5.541,P=0.019);试验组中医证候积分(发热、咳嗽、气促、痰壅)评分均低于对照组(P<0.05),呼吸功能指标[用力肺活量(FVC)、呼气中段流量(MMF)、呼吸峰流速(PEF)]优于对照组(P<0.05),CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+免疫功能指标水平优于对照组(P<0.05),炎症指标HMGB1、sTREM-1、IFN-γ水平低于对照组(P<0.05)。结论凉膈白虎汤加减治疗重症肺炎的疗效确切,可改善中医证候积分,降低血清HMGB1、sTREM-1、IFN-γ水平,改善患者呼吸功能,调节机体免疫功能水平。 展开更多
关键词 凉膈白虎汤加减 重症肺炎 呼吸功能 高迁移率族蛋白B1 溶性髓样细胞触发受体-1 干扰素-γ 中医证候积分
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Cloning and functional analysis of the sequences flanking mini-Tn5 in the magnetosomes deleted mutant NM4 of Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1 被引量:2
10
作者 LI Feng1,2, LI Ying1, JIANG Wei1, WANG Zhenfang1 & LI Jilun1 1. State Key Laboratory for Agro-biotechnology and Department of Microbiology, China Agricultural University, Beijing 100094, China 2. Department of Biology, Huaibei Coal Industry Teachers’ College, Huaibei 235000, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2005年第6期574-584,共11页
A magnetosome deleted mutant NM4 of Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1 was generated by mini-Tn5 transposon mutagenesis, and a 5045-bp fragment flanking mini-Tn5 in NM4 was cloned by Anchored PCR. Sequencing analy... A magnetosome deleted mutant NM4 of Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1 was generated by mini-Tn5 transposon mutagenesis, and a 5045-bp fragment flanking mini-Tn5 in NM4 was cloned by Anchored PCR. Sequencing analysis showed that this fragment involved six putative open reading frames (ORFs); the mini-Tn5 was inserted into ORF4. Functional complementary test indicated that the 5045-bp fragment was required for biosynthesis of mag-netosomes in M. gryphiswaldense MSR-1. The protein encoded by ORF4 had 25% of identity with the chemotaxis protein CheYIII of Caulobacter crescentus CB15, and the protein encoded by ORF4 contained a conserved signal receiver domain that can receive the signal from the sensor partner of the bacterial two-component systems. It was suggested that the protein en-coded by ORF4 may take part in the signal transduction relating to biosynthesis of magneto-somes. 展开更多
关键词 MAGNETOSPIRILLUM gryphiswaldense MAGNETOSOME deleted mutant gene cloning functional analysis.
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益肠散结颗粒对结肠癌小鼠肠道菌群及免疫功能的调节作用及机制研究 被引量:1
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作者 侯爱画 戴玲玲 +4 位作者 孟鹏 张晓妮 谭松 刘泽 赵啸虎 《广州中医药大学学报》 CAS 2024年第3期719-728,共10页
【目的】观察益肠散结颗粒对结肠癌小鼠肠道菌群及免疫功能的调节作用及机制。【方法】将60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,益肠散结颗粒低、中、高剂量组,过表达黑色素瘤缺失基因2(AIM2)质粒(pcDNA-AIM2)干预组,每组10只。除正常组... 【目的】观察益肠散结颗粒对结肠癌小鼠肠道菌群及免疫功能的调节作用及机制。【方法】将60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,益肠散结颗粒低、中、高剂量组,过表达黑色素瘤缺失基因2(AIM2)质粒(pcDNA-AIM2)干预组,每组10只。除正常组,其他各组采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导法制备结肠癌模型。给药后,绘制各组小鼠生存曲线,计算肿瘤体积;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中免疫球蛋白(Ig)G、IgM、白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平;流式细胞仪检测外周血T细胞CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)水平;测定脾指数;苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理学变化;16S-rDNA肠道菌群测序检测肠道菌群α多样性及肠道菌群群落结构;蛋白免疫印迹(Wetsern Blot)法检测结肠组织中AIM2、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)蛋白表达。【结果】与正常组比较,模型组小鼠生存率,血清中IgG、IgM水平,外周血中CD3^(+)、CD4^(+)水平和CD4^(+)/CD8^(+)比值,结肠组织AIM2、ASC、caspase-1蛋白表达水平显著降低,肿瘤体积,血清中IL-1β、IL-18水平,外周血CD8^(+)水平,脾指数显著增加(均P<0.05),HE染色结果可见结肠癌组织特征表现;与模型组比较,益肠散结颗粒低、中、高剂量组和pcDNA-AIM2组小鼠生存率,血清中IgG、IgM水平,外周血中T细胞CD3^(+)、CD4^(+)水平和CD4^(+)/CD8^(+)比值,结肠组织AIM2、ASC、caspase-1蛋白表达水平显著升高,肿瘤体积,血清中IL-1β、IL-18水平,外周血CD8^(+)水平,脾指数显著降低(均P<0.05),HE染色结果可见结肠癌组织病理改变减轻。与正常组比较,模型组小鼠Observed指数、Chao1指数、Shannon指数,拟杆菌门、变形菌门、杆菌科、毛螺菌属、瘤胃梭菌属菌落相对丰度显著降低,厚壁菌门、放线菌门和Patescibateria、乳杆菌属、臭杆菌属、别样杆菌属、未培养的瘤胃球菌科和拟杆菌属菌落相对丰度升高(P<0.05);与模型组比较,益肠散结颗粒低、中、高剂量组和pcDNA-AIM2组小鼠Observed指数、Chao1指数和Shannon指数,拟杆菌门、变形菌门、杆菌科、毛螺菌属、瘤胃梭菌属菌落相对丰度显著升高,厚壁菌门、放线菌门和Patescibateria、乳杆菌属、臭杆菌属、别样杆菌属、未培养的瘤胃球菌科和拟杆菌属菌落相对丰度降低(均P<0.05)。【结论】益肠散结颗粒可增强结肠癌小鼠自身免疫力,改善肠道菌群结构,其作用机制与激活AIM2炎性小体有关。 展开更多
关键词 益肠散结颗粒 结肠癌 肠道菌群 免疫功能 黑色素瘤缺失基因2(AIM2) 小鼠
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Cloning and functional analysis of the sequences flanking mini-Tn5 in the magnetosome-deleted mutant NM21 of Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1 被引量:1
12
作者 LI Feng LI Ying +2 位作者 JIANG Wei WANG ZhenFang LI JiLun 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2009年第9期1522-1528,共7页
A magnetosome-deleted mutant NM21 of Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1 was generated by mini-Tn5 lacZ2 transposon mutagenesis, and a 3073-bp fragment flanking mini-Tn5 lacZ2 in NM21 was cloned by Anchored PCR. Se... A magnetosome-deleted mutant NM21 of Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1 was generated by mini-Tn5 lacZ2 transposon mutagenesis, and a 3073-bp fragment flanking mini-Tn5 lacZ2 in NM21 was cloned by Anchored PCR. Sequencing analysis showed that this fragment involved three putative ORFs; the mini-Tn5 lacZ2 was inserted into ORF1. Functional complementary test indicated that the 3073-bp fragment was required for biosynthesis of magnetosomes in M. gryphiswaldense MSR-1. The majority of proteins, which had homology with the protein encoded by ORF1, were the cation transporter. Transmembrane domain analysis showed that the protein encoded by ORF1 contained four trans-membrane domains. It may be a transmembrane protein. The protein encoded by ORF1 contained two putative conserved domains: COG0053 and PRK09509. The MMT1 and FieF, containing conserved do-mains COG0053 and PRK09509 too, were Fe2+ transporter (cation diffusion facilitator superfamily). It was suggested that the protein encoded by ORF1 might take part in the magnetosomes biosynthesis as Fe2+ transporter. 展开更多
关键词 Tn5诱变 科学研究 缺失突变 序列分析 磁小体 海洋 迷你 克隆
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中棉(Gossypium arboreum)光诱导基因Gacab启动子在转基因烟草中的功能缺失分析 被引量:17
13
作者 王旭静 李为民 +2 位作者 唐巧玲 贾士荣 王志兴 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1006-1012,共7页
分离了金华中棉(Gossypiun arboreum var.jinhua)光诱导基因cab 5′上游的调控序列1 009 bp,并对其功能进行了分析,证明获得的这一DNA片段具有驱动光诱导表达的功能。为了进一步分离具有最大转录活性的最小光诱导启动子,根据光诱导表达... 分离了金华中棉(Gossypiun arboreum var.jinhua)光诱导基因cab 5′上游的调控序列1 009 bp,并对其功能进行了分析,证明获得的这一DNA片段具有驱动光诱导表达的功能。为了进一步分离具有最大转录活性的最小光诱导启动子,根据光诱导表达调控元件所在的位置,构建了Gacab P和197 bp、504 bp、779 bp的5′端缺失体,并将这些缺失体分别与gus(uid A)基因融合,构建植物表达载体。用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因烟草。GUS组织化学分析表明,转基因烟草的T1代种子在光下培养时,只有Gacab P驱动gus基因在转基因烟草的叶片表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达;当转基因烟草的T1代种子在暗中萌发及培养时,GacabP驱动gus基因在转基因烟草中无表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达。GUS定量分析表明,-504~-1 bp的启动子缺失体启动活性最高,比CaMV35S启动子高0.6倍。上述结果表明只有全长的Gacab启动子具有光诱导和绿色组织特异表达特性,且?504~?1 bp的启动子缺失体启动活性最高。 展开更多
关键词 Gacab启动子 功能缺失分析 转基因烟草
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GmMYB042基因对类黄酮生物合成的调控作用 被引量:7
14
作者 杜海 冉凤 +4 位作者 马珊珊 柯蕴倬 孙丽萍 李加纳 唐益雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-10,共10页
MYB类转录因子是植物中最大的转录因子基因家族之一,广泛参与植物生长发育全过程,对植物次生代谢等具有重要的调控作用。本研究对大豆GmMYB042基因的表达特性和功能进行了系统研究,针对该基因C端的保守氨基酸基序(PDLNLELTIS)和锌指结... MYB类转录因子是植物中最大的转录因子基因家族之一,广泛参与植物生长发育全过程,对植物次生代谢等具有重要的调控作用。本研究对大豆GmMYB042基因的表达特性和功能进行了系统研究,针对该基因C端的保守氨基酸基序(PDLNLELTIS)和锌指结构进行了一系列的序列删除突变,并将各缺失突变体在烟草中进行了过表达,以验证目的基因及其特殊基序的功能。表达特性分析结果表明,GmMYB042基因在大豆的根瘤、根、茎、叶、花、荚果皮和种子中均有表达,且在茎、种子和花中的表达量相对较高;GmMYB042基因在大豆中的表达受PEG、高盐、低温和UV-B辐射的诱导。过表达分析结果表明,GmMYB042基因的过表达使转基因烟草类黄酮代谢途径部分关键酶基因(如PAL、CHS和FLS)的表达量明显上升,转基因烟草总黄酮的含量明显高于对照;各缺失突变体的转基因烟草类黄酮代谢途径相应酶基因的表达量发生了相应的变化,进一步证明目的基因对类黄酮生物合成的调控作用;各缺失突变体的转基因烟草的叶缘有明显皱褶,说明目的基因可能还参与调控叶的形态建成。 展开更多
关键词 MYB转录因子 类黄酮 缺失突变 功能研究
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革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用 被引量:11
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作者 王景 穆媛嫒 +3 位作者 黎庶 陈志瑾 熊坤 丛延广 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第23期2299-2301,共3页
目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ... 目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。 展开更多
关键词 敲除 载体构建 突变株 基因功能
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纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域 被引量:6
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作者 李朝阳 蔡卫斌 +6 位作者 杨中汉 杨霞 宋志宏 周世豪 李明友 刘祖国 高国全 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期17-23,共7页
根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型... 根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和生物活性测定.K5 mut1蛋白特异性抑制人视网膜微血管内皮细胞增殖,且活性强度是完整的K5蛋白2倍;K5mut2对人视网膜微血管内皮细胞无显著抑制作用.结果提示,完整的Kringle结构(包含3个二硫键)是维持人纤溶酶原K5抗血管增生活性的必需结构域,而K5分子中Kringle结构域外的N端和C端氨基酸臂则并非其活性所必需. 展开更多
关键词 纤溶酶原 KRINGLE 5 血管增生抑制因子 缺失突变体 结构与功能
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大豆rbcS基因启动子的克隆及在转基因烟草中的功能缺失分析 被引量:6
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作者 崔喜艳 陈众峰 +4 位作者 范贝 韩琳 刘晓庆 董雅致 张治安 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2015年第5期114-121 128,共9页
【目的】进一步验证栽培大豆rbcS基因启动子功能,为植物基因工程相关研究提供启动子资源。【方法】从栽培大豆中克隆了rbcS基因5′端上游1 538bp的DNA序列,根据光诱导表达调控元件及顺式作用功能元件所在的位置,设计含1 089,712和190bp ... 【目的】进一步验证栽培大豆rbcS基因启动子功能,为植物基因工程相关研究提供启动子资源。【方法】从栽培大豆中克隆了rbcS基因5′端上游1 538bp的DNA序列,根据光诱导表达调控元件及顺式作用功能元件所在的位置,设计含1 089,712和190bp 3个5′端缺失体,并将rbcS基因启动子(1 538bp)及3个5′端系列缺失体序列分别与gus基因融合,构建植物表达载体并命名为pGmrbcS、pA、pB和pC,用农杆菌介导法转化烟草,通过gus基因活性变化检测不同缺失体的表达特性。【结果】克隆了1 538bp的大豆rbcS基因启动子序列及1 089,712和190bp的5′端缺失体启动子片段。GUS活性检测表明,在pGmrbcS转基因烟草的叶中GUS活性最高,且与pCAMBIA1301转基因烟草叶片中CaMV35S启动子驱使gus基因的表达量相当,而茎、根中GUS活性较低。GUS定量分析表明,T1代转基因烟草光下培养时,3种缺失体启动子叶片中的GUS表达活性均与CaMV35S启动子相当,其中pB活性最高,是CaMV35S启动子活性的1.4倍,pA、pC活性低于pB,分别为pB活性的84%和71%;含pA的转基因烟草于黑暗中萌发的幼苗叶片gus基因不表达,光下萌发幼苗叶片有gus基因表达,而含有pB、pC的转基因烟草,在黑暗和光下萌发的幼苗叶片中均有gus基因表达,且表达量以pB最高。【结论】含有长度为1 089bp(pA)光诱导元件的rbcS基因缺失体启动子具有光诱导和组织特异表达特性,长度为712bp(pB)的缺失体启动子的启动活性最高。 展开更多
关键词 栽培大豆 rbcS基因启动子 转基因烟草 功能缺失
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志贺氏菌福氏2a 301株ipaH4.5突变株的构建及生物学功能分析 被引量:6
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作者 王芳 赵江丽 +5 位作者 何湘 姜铮 刘大伟 陈宣楠 袁静 黄留玉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期714-720,共7页
利用λ-Red重组系统对福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因缺失突变株?ipaH4.5,利用低拷贝质粒构建ipaH4.5缺失突变株的回复突变株△ipaH4.5HF。PCR方法证实了ipaH4.5基因的缺失和回复。... 利用λ-Red重组系统对福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因缺失突变株?ipaH4.5,利用低拷贝质粒构建ipaH4.5缺失突变株的回复突变株△ipaH4.5HF。PCR方法证实了ipaH4.5基因的缺失和回复。对野生株、突变株和回复突变株的生长代谢及细胞侵袭能力进行比较;ELISA方法检测3株菌侵袭鼠J774巨噬细胞后培养上清中炎性因子的水平。生长代谢实验表明缺失和回复ipaH4.5不影响志贺氏菌的生长速度,侵袭实验表明缺失和回复ipaH4.5也不影响志贺氏菌对HeLa细胞和鼠J774巨噬细胞的侵袭能力,表明ipaH4.5基因与志贺氏菌的生长代谢和侵袭能力无关;鼠J774巨噬细胞培养上清中细胞因子水平的改变提示该基因在志贺氏菌侵入细胞后抑制宿主细胞炎症反应。 展开更多
关键词 福氏志贺氏菌 ipaH4.5 基因缺失 生物学功能 侵袭实验
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青花菜花蕾转录组测序分析及蜡粉合成相关基因挖掘 被引量:7
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作者 张振超 陶美奇 +2 位作者 潘永飞 戴忠良 姚悦梅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期607-617,共11页
【目的】对青花菜花蕾进行转录组测序分析,并挖掘与蜡粉合成相关基因,为探明青花菜花球表面蜡粉形成的分子机制提供理论参考。【方法】分别提取野生型和蜡粉缺失型青花菜花球总RNA,采用Illumina HiSeq^(TM) 2500平台进行转录组测序,获... 【目的】对青花菜花蕾进行转录组测序分析,并挖掘与蜡粉合成相关基因,为探明青花菜花球表面蜡粉形成的分子机制提供理论参考。【方法】分别提取野生型和蜡粉缺失型青花菜花球总RNA,采用Illumina HiSeq^(TM) 2500平台进行转录组测序,获得高质量Clean reads,采用Trinity进行序列组装后获得青花菜Unigene库,将获得的Unigene序列与Nr、Nt、KEGG、Pfam、KOG/COG、Swiss-Prot和GO数据库比对,获得基因功能注释信息;使用DESeq2进行差异表达分析。【结果】共获得44.68 Gb Clean data,De novo组装得到41244条Unigenes,N50长度为1847 bp。从所获得的Unigenes中筛选出8685个差异表达基因(DEGs)(上调基因5747个,下调基因2938个),共有8038个基因被注释到不同数据库,其中,5220个基因注释到Pfam数据库;2066个基因注释到COG数据库,3866个基因注释到KOG数据库;2580个差异表达基因被注释到75个转录因子家族中,注释最多的是MYB家族(235个);GO数据库中6095个差异表达基因注释到细胞组分、分子功能和生物学过程三大类的52个功能分类;KEGG数据库中,1671个差异表达基因富集到138条代谢通路,其中13个差异表达基因与脂肪酸合成有关,7个差异表达基因与蜡粉生物合成途径有关。【结论】转录因子MYB家族在调控青花菜蜡粉合成中发挥重要作用。蜡粉合成过程中相关酶基因的差异表达是调控青花菜蜡粉合成的关键,尤其是野生型和蜡粉缺失突变体中特异性表达的差异表达基因,可作为后续研究青花菜花球表面蜡粉形成分子机制的对象。 展开更多
关键词 青花菜 花蕾 蜡粉缺失突变体 转录组 基因功能注释
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儿童青少年精神分裂症中22q11缺失综合征对精神症状与认知功能的影响 被引量:4
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作者 王丽娜 谷景阳 +1 位作者 李玉玲 张燕 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期640-644,共5页
目的探讨22q11缺失综合征在儿童青少年精神分裂症中的表达,以及对精神症状与认知功能的影响。方法采用病例-对照的研究方法,选取2016年4月至2018年12月新乡医学院第二附属医院所有确诊为精神分裂症的儿童青少年患者134例作为病例组,并... 目的探讨22q11缺失综合征在儿童青少年精神分裂症中的表达,以及对精神症状与认知功能的影响。方法采用病例-对照的研究方法,选取2016年4月至2018年12月新乡医学院第二附属医院所有确诊为精神分裂症的儿童青少年患者134例作为病例组,并将病例组患者分为存在22q11缺失组和未缺失组,对照组为无精神病史和家族史的健康体检儿童418例。采用原位杂交实验诊断22q11微缺失综合征,并用阳性和阴性症状量表及中文版精神分裂症认知功能成套测验对病例组患者进行评分。结果22q11染色体微缺失状态在患精神分裂症的儿童青少年中表达更显著(χ^2=33.52,P<0.0001)。22q11缺失组患者中阴性症状(P=0.034)、一般状况(P=0.005)、总分(P=0.001)均显著升高。22q11缺失组患者连线测验、言语记忆、空间广度、情绪管理、持续操作五项指标及总分均显著低于未缺失组(P<0.05)。儿童青少年精神分裂症患者中22q11缺失组较未缺失组存在显著各向异性分数(fractional anisotropy,FA)值减低,主要分布在胼胝体体部、膝部和扣带束(P<0.05),其余脑区均未见FA值升高。22q11缺失组患者中胼胝体体部脑白质FA值与视觉记忆、语言流畅呈正相关;胼胝体膝部FA值与语言流畅呈正相关;扣带束FA值与空间广度呈正相关(P<0.05)。结论儿童青少年精神分裂症患者中22q11染色体微缺失状态更为常见,可能通过降低胼胝体体部、膝部和扣带束FA值影响患者视觉记忆、语言流畅和空间广度。 展开更多
关键词 儿童青少年精神分裂症 22q11 缺失综合征 精神症状 认知功能
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