大肠杆菌acrA基因的重组表达及其抗体的制备 被引量：2

1

作者 马红霞 王伟利 程培英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期403-407,共5页

以大肠杆菌E. coli ATCC25922株的染色体DNA为模板,PCR扩增AcrA蛋白部分基因,获得约691bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中测序,并进一步将acrA亚克隆于pET28a原核表达载体中,进行该基因的诱导表达。表达的产物经SDS-聚丙酰胺... 以大肠杆菌E. coli ATCC25922株的染色体DNA为模板,PCR扩增AcrA蛋白部分基因,获得约691bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中测序,并进一步将acrA亚克隆于pET28a原核表达载体中,进行该基因的诱导表达。表达的产物经SDS-聚丙酰胺凝胶电泳分析,可见一条约33ku的特异性蛋白条带。用纯化的acrA基因原核表达产物免疫獭兔,ELISA法检测不同时期獭兔抗体效价。蛋白质印迹结果表明,用表达的AcrA蛋白制备的acrA抗体能够用于检测大肠杆菌AcrA蛋白的表达水平。 展开更多

关键词 大肠杆菌 acra基因 克隆 原核表达 acra抗体的制备

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细菌AcrAB-TolC型外排泵中AcrA蛋白的进化分析 被引量：2

2

作者 沈秉正 宋金春 +2 位作者 马福旺 刘环香 喻研 《氨基酸和生物资源》 CAS 2013年第1期19-24,共6页

研究不同耐药细菌AcrAB-Tolc型外排泵中关键蛋白AcrA的序列,针对其保守及非保守氨基酸残基进行该类蛋白的进化分析,构建蛋白进化树。收集来源于不同细菌的已知序列的AcrA蛋白,去除冗余并进行序列比对之后,根据其序列比对结果的相似性、... 研究不同耐药细菌AcrAB-Tolc型外排泵中关键蛋白AcrA的序列,针对其保守及非保守氨基酸残基进行该类蛋白的进化分析,构建蛋白进化树。收集来源于不同细菌的已知序列的AcrA蛋白,去除冗余并进行序列比对之后,根据其序列比对结果的相似性、氨基酸残基的保守性研究其进化特征。结果表明,不同细菌的AcrA蛋白部分氨基酸残基具有高度的保守性,这与其实现生物学功能有关,非保守区域是主要的进化区域。可为不同菌株的进化提供参考,同时为以AcrAB-Tolc型外排泵为靶标的新药研究提供相关数据。 展开更多

关键词 耐药菌 acraB-TolC型外排泵 acra蛋白 进化分析

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新生儿科产NDM-1耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌主动外排泵基因acrA的研究 被引量：3

3

作者 李碰玲 王敏 +9 位作者 赵志丹 李先平 张晓煜 岳贺佳 吕少刚 曹伟 刘礼 周晓岚 谢益欣 唐爱国 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第5期405-410,共6页

目的研究主动外排泵基因arcA在耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌中抗生素转录水平,探讨主动外排机制在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的作用。方法收集2012年8月-2013年12月中南大学湘雅二医院新生儿科患者的痰及血液标本分离的7株耐碳青霉... 目的研究主动外排泵基因arcA在耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌中抗生素转录水平,探讨主动外排机制在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的作用。方法收集2012年8月-2013年12月中南大学湘雅二医院新生儿科患者的痰及血液标本分离的7株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株作为实验组,10株同一新生儿科碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌株作为对照组,采用Phoenix100全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏检测,采用K-B法和Etest进行表型确认,采用改良Hodge确证试验确定细菌耐药表型,采用RAPD技术检测细菌基因型,采用PCR扩增NDM-1、acrA基因,采用RT-PCR检测acrA mRNA表达。结果7株试验菌均产碳青霉烯酶。PCR扩增显示其染色体和质粒上均携带NDM-1基因;RAPD显示7株试验菌为同一ST17型;5株试验菌和8株敏感菌株检出外排泵基因acrA;RT-PCR显示试验组和对照组acrA mRNA表达水平平均值分别为0.545和1.899,两组arcA mRNA扩增产物电泳条带与16SrRNA扩增产物电泳条带的灰度比值分别为0.13和0.317,结果进行Fisher精确概率检验,P=0.317>0.05,差异无统计学意义。结论 acrA的表达可能不是产NDM-1耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药的必要原因。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 acraB外排泵 acra 碳青霉烯类抗生素 NDM-1 耐药性

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大肠杆菌耐药株的体外诱导及其acrA和marA基因分析 被引量：13

4

作者 张海旺 邓旭明 +4 位作者 韩春田 张煜 苏杰 胡仲明 曾凡勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期553-557,共5页

为检测大肠杆菌在某抗菌素的环境压力下耐药性的变化及其与acrA和marA基因突变的关系。分别用四环素、氯霉素和环丙沙星对大肠杆菌质控株ATCC25922进行体外诱导培养,测定诱导前后多种抗菌药的MIC的变化;对各菌株的acrA和marA基因进行克... 为检测大肠杆菌在某抗菌素的环境压力下耐药性的变化及其与acrA和marA基因突变的关系。分别用四环素、氯霉素和环丙沙星对大肠杆菌质控株ATCC25922进行体外诱导培养,测定诱导前后多种抗菌药的MIC的变化;对各菌株的acrA和marA基因进行克隆和测定。四环素诱导株产生重耐药,氯霉素和环丙沙星的诱导引起单药耐药;四环素诱导株、氯霉素诱导株和环丙沙星诱导株的acrA和marA基因序列均与ATCC25922的一致。四环素、氯霉素和环丙沙星的诱导培养并未引起ATCC25922的acrA和marA基因突变,诱导引起的大肠杆菌耐药性变化是由于其acrA和marA基因突变以外的其他原因所致。 展开更多

关键词 大肠杆菌 多重耐药 外输泵 acra marA

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大肠杆菌多重耐药基因AcrA、AcrB内标准DNA的构建 被引量：7

5

作者 马红霞 潘建民 +2 位作者 邓旭明 欧阳红生 阎继业 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期68-71,共4页

在克隆AcrA、AcrB部分基因片段并进行基因及编码蛋白的同源性分析的基础上,设计合成构建AcrA、AcrB的内标准DNA所需引物,经过3次(12个)PCR成功地合成了AcrA、AcrB的内标准DNA。合成法构建定量RT-PCR内标准DNA快捷、成功率高。

关键词 大肠杆菌 耐药基因 acra ACRB 内标准DNA 合成法 引物 动物

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中药提取物对耐药大肠杆菌MIC及acrA基因表达量的影响 被引量：12

6

作者 张静 张梦华 +3 位作者 刘晴晴 刘三侠 吴俊伟 杨成竹 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期728-732,共5页

通过亚抑菌浓度中药提取物处理大肠杆菌耐药菌,利用荧光定量PCR技术检测其外排泵基因acrA表达量的变化及试管二倍稀释法测定乳酸环丙沙星对处理前后细菌MIC的变化。结果显示,经亚抑菌浓度中药提取物处理后的耐药大肠杆菌其acrA基因表达... 通过亚抑菌浓度中药提取物处理大肠杆菌耐药菌,利用荧光定量PCR技术检测其外排泵基因acrA表达量的变化及试管二倍稀释法测定乳酸环丙沙星对处理前后细菌MIC的变化。结果显示,经亚抑菌浓度中药提取物处理后的耐药大肠杆菌其acrA基因表达量存在显著变化。其中经中药A,I,S,X处理过的大肠杆菌外排泵基因表达量分别降低到原来的0.20,0.16,0.05和0.24倍,表明亚抑菌浓度中药提取物对大肠杆菌耐药菌的外排泵基因表达量有明显的抑制作用,提示在中药提取物中寻找大肠杆菌耐药外排泵抑制剂有一定前景。 展开更多

关键词 中药 大肠杆菌 acra基因表达量 外排泵

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大肠杆菌acrA基因的克隆、表达、抗体制备及不同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平的检测 被引量：8

7

作者 张海旺 张丽云 +3 位作者 刘旭东 邓旭明 胡仲明 曾凡勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期279-284,共6页

检测不同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平,探讨耐药水平与AcrA蛋白表达水平之间的关系。对acrA基因进行克隆、表达、制备抗AcrA抗体,Westernblot方法比较同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平。结果表明,多重耐药株SEMR的AcrA表达明显高于单药... 检测不同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平,探讨耐药水平与AcrA蛋白表达水平之间的关系。对acrA基因进行克隆、表达、制备抗AcrA抗体,Westernblot方法比较同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平。结果表明,多重耐药株SEMR的AcrA表达明显高于单药耐药株SEICI和SEICH以及质控株ATCC25922。因此SEMR多重耐药性的产生与AcrA的高效表达直接有关。 展开更多

关键词 大肠杆菌 多重耐药 acra 基因表达

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不同源性大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB部分基因的同源性分析 被引量：7

8

作者 马红霞 邓旭明 +1 位作者 欧阳红生 阎继业 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期111-113,共3页

通过聚合酶链式反应从不同源性大肠杆菌的染色体DNA上扩增出大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB的部分片段 ,将该片段分别连接到克隆载体pMD_18T的BamHI、XhoI酶切位点中 ,测定插入片段的核苷酸序列 ,并分别推导出其氨基酸序列。序列分析表... 通过聚合酶链式反应从不同源性大肠杆菌的染色体DNA上扩增出大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB的部分片段 ,将该片段分别连接到克隆载体pMD_18T的BamHI、XhoI酶切位点中 ,测定插入片段的核苷酸序列 ,并分别推导出其氨基酸序列。序列分析表明 :不同源性大肠杆菌的AcrA的部分基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GeneBank中该基因序列的同源性较高 ;不同源性大肠杆菌的AcrB的部分基因的核苷酸序列的同源性较低 。 展开更多

关键词 大肠杆菌多药耐药基因 acra ACRB 测序 同源性分析

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实时荧光定量PCR检测多重耐药大肠杆菌AcrA基因mRNA表达水平 被引量：6

9

作者 尹秀玲 王玮 +4 位作者 邓旭明 郎需龙 张晶 王丽艳 柳巨雄 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期679-682,共4页

体外单一药物诱导标准大肠杆菌ATCC25922,获得了耐氯霉素(CHL,MIC≥256 mg/L)、耐环丙沙星(CIP,MIC≥256 mg/L)、耐水杨酸钠(SAL,MIC≥275 mg/L)、耐四环素(T,MIC≥512 mg/L)的菌株。选取ATCC25922株,4株中度耐药菌SAL(175)、CHL(64)、T... 体外单一药物诱导标准大肠杆菌ATCC25922,获得了耐氯霉素(CHL,MIC≥256 mg/L)、耐环丙沙星(CIP,MIC≥256 mg/L)、耐水杨酸钠(SAL,MIC≥275 mg/L)、耐四环素(T,MIC≥512 mg/L)的菌株。选取ATCC25922株,4株中度耐药菌SAL(175)、CHL(64)、T(64)、CIP(128),4株高度耐药菌SAL(275)、CHL(256)、T(512)、CIP(256),和临床分离的3株耐药大肠杆菌H1、H9、H10,通过实时荧光定量RT-PCR方法检测外输泵AcrA基因的mRNA表达水平。系统自动分析软件显示,Ct值与标准质粒浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.992。检测结果表明:H10、CHL(256)、CIP(256)拷贝数最高,达1015拷贝/μL;T(512)、H9、T(128)、SAL(275)、H1为1014拷贝/μL;CHL(128)、T(64)、CHL(64)为1013拷贝/μL;ATCC25922为1012拷贝/μL。不同程度耐药株AcrA基因的表达量不同,临床分离株和诱导的各高耐药菌株均比ATCC25922株表达量高,且差异极显著(P≤0.01)。这说明不同耐药程度的11株菌cDNA的量存在差异,AcrA基因转录水平与耐药水平成正相关。 展开更多

关键词 acra基因 实时荧光定量PCR 耐药大肠杆菌 MRNA

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中药复方制剂对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA-mRNA表达水平的影响 被引量：11

10

作者 任玲玲 鞠玉琳 +1 位作者 平家奇 张宇 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第2期257-259,共3页

研究中药复方制剂连黄(精提、粗提)对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的mRNA表达水平的影响,从而深入探讨中药复方制剂连黄(精提、粗提)抑制大肠埃希菌多重耐药性的作用机理。采用实时荧光定量PCR法,定量分析了中药复方制剂连黄(精提、粗提... 研究中药复方制剂连黄(精提、粗提)对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的mRNA表达水平的影响,从而深入探讨中药复方制剂连黄(精提、粗提)抑制大肠埃希菌多重耐药性的作用机理。采用实时荧光定量PCR法,定量分析了中药复方制剂连黄(精提、粗提)作用前后的大肠埃希菌耐药基因AcrA的mRNA表达水平。结果表明,精提和粗提的中药复方制剂均能降低AcrA基因的mRNA表达水平,且精提制剂较粗提制剂对AcrA基因的mRNA表达水平影响更大。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 中药复方制剂连黄 大肠埃希菌 acra—mRNA

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中药复方制剂对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的影响 被引量：7

11

作者 任玲玲 鞠玉琳 +1 位作者 高威 张宇 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第6期1284-1286,共3页

试验分别用精提和粗提的中药复方制剂"连黄"作用多重耐药的大肠埃希菌,提取其基因组DNA,并以大肠埃希菌AcrA的编码序列设计引物,成功扩增出AcrA基因中1 005bp大小的片段,与中药作用前的多重耐药基因AcrA的碱基序列进行对比分... 试验分别用精提和粗提的中药复方制剂"连黄"作用多重耐药的大肠埃希菌,提取其基因组DNA,并以大肠埃希菌AcrA的编码序列设计引物,成功扩增出AcrA基因中1 005bp大小的片段,与中药作用前的多重耐药基因AcrA的碱基序列进行对比分析,从分子生物学水平上探讨中药复方制剂对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的影响。结果表明,精提和粗提的中药复方制剂均能改变AcrA基因的编码序列,但精提制剂较粗提制剂对AcrA基因的影响更大。 展开更多

关键词 中药复方制剂 大肠埃希菌 多重耐药 acra基因

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外排泵acra/acrb基因与多药耐药大肠埃希菌关系的探讨 被引量：3

12

作者 王旭 吴志鹃 +4 位作者 陈枫 黄永茂 钟利 向成玉 陈庄 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期2878-2881,共4页

目的了解大肠埃希菌(ECO)对3类6种常用抗菌药物的耐药性以及外排泵acra/acrb基因在临床分离株中的存在,探讨acra/acrb与大肠埃希菌多药耐药性间的相关性。方法药物敏感试验采用美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散法(K-B法)进行6... 目的了解大肠埃希菌(ECO)对3类6种常用抗菌药物的耐药性以及外排泵acra/acrb基因在临床分离株中的存在,探讨acra/acrb与大肠埃希菌多药耐药性间的相关性。方法药物敏感试验采用美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散法(K-B法)进行6种抗菌药物的药物敏感性检测;PCR技术检测大肠埃希菌携带acra/acrb基因的情况。结果耐药模式中以多药耐药为主占52.11%,其表型以CTX+G+S+CIP+LEV为主,8株,占11.27%;acra/acrb阳性率在多耐药株与双耐药株、单耐药株、全敏感株比较差异均有统计学意义。结论大肠埃希菌对3类6种抗菌药物普遍耐药,并且存在明显的多药耐药和交叉耐药现象;外排泵基因acra/acrb是大肠埃希菌多药耐药的重要原因之一。 展开更多

关键词 多药耐药 大肠埃希菌 acra/acrb基因

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连翘对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的影响研究 被引量：21

13

作者 任玲玲 关立增 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期43-45,共3页

为了研究和开发理想的大肠埃希菌多重耐药抑制剂,用连翘作用于多重耐药大肠埃希菌,提取其基因组DNA,并以大肠埃希菌AcrA基因的编码序列设计引物,成功扩增出AcrA基因中1005bp的片段,与多重耐药菌种中的AcrA基因序列进行对比。结果表明,... 为了研究和开发理想的大肠埃希菌多重耐药抑制剂,用连翘作用于多重耐药大肠埃希菌,提取其基因组DNA,并以大肠埃希菌AcrA基因的编码序列设计引物,成功扩增出AcrA基因中1005bp的片段,与多重耐药菌种中的AcrA基因序列进行对比。结果表明,连翘改变AcrA基因的编码序列,并能有效抑制多重耐药大肠埃希菌的生长,减弱其耐药性。 展开更多

关键词 连翘 大肠埃希菌 多重耐药 acra基因

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加减三黄汤对耐药大肠杆菌acrA mRNA表达水平的影响 被引量：3

14

作者 尹秀玲 白迎春 +2 位作者 张立永 顾小龙 牛发良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第6期60-63,共4页

为了解加减三黄汤对大肠杆菌耐药性的影响,采用实时荧光定量方法检测了外输泵acrA mRNA表达水平的变化。将100只昆明系小鼠分为阳性组(感染耐药性大肠杆菌2 751株和2 952株),阴性组,攻毒治疗组(2 751株+加减三黄汤,2 952株+加减三黄汤)... 为了解加减三黄汤对大肠杆菌耐药性的影响,采用实时荧光定量方法检测了外输泵acrA mRNA表达水平的变化。将100只昆明系小鼠分为阳性组(感染耐药性大肠杆菌2 751株和2 952株),阴性组,攻毒治疗组(2 751株+加减三黄汤,2 952株+加减三黄汤),8d后将鼠随机剖杀,取肝组织抹片培养大肠杆菌,做药敏试验,同时提取质粒,检测大肠杆菌外输泵基因acrA的mRNA表达量。结果显示,经加减三黄汤在体治疗后的大肠杆菌耐药性下降了,每μL中mRNA拷贝数为2 751株最高达1016,2 952株1015;用药后各菌株均有下降;相差极显著(P≤0.01),耐药性越大的拷贝数越多。表明加减三黄汤对耐药大肠杆菌外输泵基因acrA的mRNA表达水平影响与耐药性有一定的相关性。 展开更多

关键词 加减三黄汤 大肠杆菌 实时荧光定量 acra 表达水平

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不同耐药水平大肠杆菌acrA和marA基因转录水平的比较 被引量：2

15

作者 柳巨雄 吉淑娟 +6 位作者 杨斌 张海旺 王玮 胡仲明 曾凡勤 邓旭明 韩春田 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期326-328,332,共4页

为阐明大肠杆菌耐药菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系,用定量RT-PCR方法比较了多重耐药菌株、单药耐药菌株以及质控株ATCC25922的acrA和marA的mRNA水平。结果,acrAmRNA水平,多重耐药菌株SEMR是单药耐药菌株SEICI、SE... 为阐明大肠杆菌耐药菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系,用定量RT-PCR方法比较了多重耐药菌株、单药耐药菌株以及质控株ATCC25922的acrA和marA的mRNA水平。结果,acrAmRNA水平,多重耐药菌株SEMR是单药耐药菌株SEICI、SEICH和质控株ATCC25922的16倍;marAmRNA水平,SEMR是SEICH的4倍、SEICI和ATCC25922的8倍;SEICI和SEICH的acrAmRNA、marAmRNA水平与ATCC25922的无明显差异;同一菌株acrAmRNA和marAmRNA水平的变化保持了较为稳定的一致性。结论大肠杆菌多重耐药菌株的acrAmRNA和marAmRNA水平与其耐药水平存在相关性。 展开更多

关键词 大肠杆菌 acra基因 marA基因 转录水平

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福氏志贺菌主动外排基因acrA的克隆及原核表达 被引量：2

16

作者 王松泰 张继瑜 +3 位作者 魏小娟 付元芳 曹小安 邱昌庆 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期933-936,共4页

目的对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础。方法参考福氏志贺菌2aacrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列。以福氏志贺... 目的对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础。方法参考福氏志贺菌2aacrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列。以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增acrA基因并与pMD18-T载体连接,然后转化DH5α。提取重组质粒pMD18-acrA,经BamHI/SalI双酶切并与载体pET30a连接后转化宿主菌BL21(DE3)pLys,通过IPTG诱导表达目的蛋白。结果克隆的acrA基因长度为1122bp,核苷酸序列与GenBank上公布的序列完全相同。原核表达经SDS-PAGE及WesternBlotting检测和鉴定,结果表明重组载体pET-30a-acrA可成功地在大肠杆菌中表达AcrA蛋白。结论成功构建了福氏志贺菌acrA基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,该研究为了解AcrA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 福氏志贺菌 acra基因 克隆 原核表达

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不同耐药水平大肠杆菌acrA和marA基因转录水平的比较 被引量：1

17

作者 邓旭明 吉淑娟 +3 位作者 李喜旺 张海旺 胡仲明 曾凡勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期185-190,共6页

为检测不同耐药水平大肠杆菌的acrA和marA基因转录水平,阐明耐药大肠杆菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT-PCR的方法比较多重耐药菌株SEMR、单药耐药菌株SEICI和SEICH以及质控株ATCC25922的acrA和marA的mRN... 为检测不同耐药水平大肠杆菌的acrA和marA基因转录水平,阐明耐药大肠杆菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT-PCR的方法比较多重耐药菌株SEMR、单药耐药菌株SEICI和SEICH以及质控株ATCC25922的acrA和marA的mRNA水平。结果表明,acrAmRNA水平,SEMR均是SEICI、SEICH和ATCC25922的16倍;marAmRNA水平,SEMR是SEICH的4倍、SEICI和ATCC25922的8倍;SEICI和SEICH的acrAmRNA和marAmRNA水平与ATCC25922无明显差异;同一菌株acrAmRNA和marAmRNA水平的变化保持了较为稳定的一致性。因此认为,大肠杆菌多重耐药菌株SEMR的acrAmRNA和marAmRNA水平与其耐药水平存在相关性。 展开更多

关键词 大肠杆菌 acra marA 转录水平

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竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究 被引量：3

18

作者 陈爱美 陈仪本 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期235-239,共5页

建立了用于检测大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922的acrA基因mRNA表达水平的定量竞争性RT-PCR(QC-RT-PCR)体系。PCR合成目标片段的突变型片段(321bp)作为内标准模板(Internal standard,IS),与目标片段一致的片段(389bp)作为目标模板(... 建立了用于检测大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922的acrA基因mRNA表达水平的定量竞争性RT-PCR(QC-RT-PCR)体系。PCR合成目标片段的突变型片段(321bp)作为内标准模板(Internal standard,IS),与目标片段一致的片段(389bp)作为目标模板(Target standard,TS),优化两种模板共扩增体系;梯度稀释IS与等量大肠杆菌cDNA样本共扩增,扫描电泳条带,软件分析数据。结果表明,引物设计合适,以IS和TS为模板实现共扩增,产物(321bp和389bp)通过1.5%琼脂糖凝胶电泳有效分离;梯度稀释IS与cDNA共扩增产物出现亮度梯度电泳条带;获得一元回归曲线y=-0.345+0.097x(相关系数r=0.959,标准差s=0.05997)。该研究成功构建内标准模板,优化的共扩增PCR体系实现了对大肠杆菌ATCC25922中acrA基因mRNA表达水平的检测,具有简便、高效、敏感度高等优点。 展开更多

关键词 acra 定量竞争性RT-PCR 外排系统

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溶藻弧菌HY9901 AcrA基因克隆与序列分析(英文) 被引量：1

19

作者 蔡双虎 吴灶和 +1 位作者 简纪常 鲁义善 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期67-72,共6页

Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列,得一460 bp片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由1101 nt组成,共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与创伤弧菌YJ016、... Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列,得一460 bp片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由1101 nt组成,共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与创伤弧菌YJ016、副溶血弧菌RIMD 2210633、灿烂弧菌12B01、霍乱弧菌O1 N16961同源性分别为76%、73%、71%和70%。 展开更多

关键词 溶藻弧菌 acra基因 基因克隆

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鸡沙门菌环丙沙星耐药株acrA基因突变特征分析 被引量：1

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作者 曲鹏 刘芳萍 +4 位作者 刘长军 李昌文 佟恒敏 刘文周 张秀英 《中国家禽》 北大核心 2008年第17期15-17,21,共4页

提取体外诱导的3株不同耐药水平鸡源性沙门菌环丙沙星耐药株的染色体DNA(分别为16×MIC、64×MIC、128×MIC)。设计引物acrAF和acrAR,对耐药菌株acrA全基因序列进行克隆及序列分析。与质控菌株C79-13相比,菌株16×MIC的... 提取体外诱导的3株不同耐药水平鸡源性沙门菌环丙沙星耐药株的染色体DNA(分别为16×MIC、64×MIC、128×MIC)。设计引物acrAF和acrAR,对耐药菌株acrA全基因序列进行克隆及序列分析。与质控菌株C79-13相比,菌株16×MIC的acrA基因第121位碱基发生T→C突变;菌株64×MIC的acrA基因第393位碱基发生C→T突变,第1109位碱基发生A→G突变;菌株128×MIC的acrA基因第1121位碱基发生C→T突变。菌株16×MIC的碱基突变导致acrA基因的第40位氨基酸发生M→T取代,即Met→Thr;菌株64×MIC的碱基突变导致acrA基因的第131位氨基酸发生A→C取代,即Arg→Cys;而菌株128×MIC碱基突变并没有导致相应氨基酸的改变。上述结果提示,acrA基因的突变可能并非鸡源性沙门菌耐药性产生的主要原因。 展开更多

关键词 沙门菌 环丙沙星 耐药性 acra基因

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