目的 探讨转录因子ZXDC基因敲减对脊髓神经元(SCNs)氧化应激损伤后的保护作用及机制。方法 应用不同浓度H_(2)O_(2)诱导SCNs氧化应激损伤,CCK8检测细胞活性筛选H_(2)O_(2)诱导最佳浓度;实验细胞分为:Control组、H_(2)O_(2)+AAV-NC组和H_...目的 探讨转录因子ZXDC基因敲减对脊髓神经元(SCNs)氧化应激损伤后的保护作用及机制。方法 应用不同浓度H_(2)O_(2)诱导SCNs氧化应激损伤,CCK8检测细胞活性筛选H_(2)O_(2)诱导最佳浓度;实验细胞分为:Control组、H_(2)O_(2)+AAV-NC组和H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC siRNA组,免疫荧光染色鉴定原代SCNs,检测各组ZXDC表达和神经突起平均长度;Western bolt检测各组细胞中ZXDC、CCL2、CCR2表达,qRT-PCR检测细胞中炎症因子TNF-α和IL-1β m RNA表达,应用EdU荧光染色、CCK8检测ZXDC对SCNs增殖和活性的影响。结果 筛选600μmol/L H_(2)O_(2)适用于SCNs氧化应激模型制备。β-Ⅲ-tubulin免疫荧光染色鉴定原代SCNs培养成功;与Control组比较,H_(2)O_(2)+AAV-NC组神经突起平均长度显著降低,ZXDC、CCL2和CCR2表达显著增高,而H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC siRNA组较H_(2)O_(2)+AAV-NC组神经突起平均长度显著增高,ZXDC、CCL2和CCR2蛋白表达显著降低(P<0.05);与Control组比较,H_(2)O_(2)诱导组TNF-α和IL-1β m RNA相对表达显著增高,细胞增殖和细胞活力显著降低。与H_(2)O_(2)+AAV-NC组比较,H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC si RNA组TNF-α和IL-1β m RNA相对表达显著降低,细胞增殖和细胞活力显著增高(P<0.05)。结论 ZXDC基因敲减通过调控CCL2/CCR2信号通路促进氧化应激损伤SCNs细胞增殖、细胞活力和神经突生长。展开更多
文摘目的 探讨转录因子ZXDC基因敲减对脊髓神经元(SCNs)氧化应激损伤后的保护作用及机制。方法 应用不同浓度H_(2)O_(2)诱导SCNs氧化应激损伤,CCK8检测细胞活性筛选H_(2)O_(2)诱导最佳浓度;实验细胞分为:Control组、H_(2)O_(2)+AAV-NC组和H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC siRNA组,免疫荧光染色鉴定原代SCNs,检测各组ZXDC表达和神经突起平均长度;Western bolt检测各组细胞中ZXDC、CCL2、CCR2表达,qRT-PCR检测细胞中炎症因子TNF-α和IL-1β m RNA表达,应用EdU荧光染色、CCK8检测ZXDC对SCNs增殖和活性的影响。结果 筛选600μmol/L H_(2)O_(2)适用于SCNs氧化应激模型制备。β-Ⅲ-tubulin免疫荧光染色鉴定原代SCNs培养成功;与Control组比较,H_(2)O_(2)+AAV-NC组神经突起平均长度显著降低,ZXDC、CCL2和CCR2表达显著增高,而H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC siRNA组较H_(2)O_(2)+AAV-NC组神经突起平均长度显著增高,ZXDC、CCL2和CCR2蛋白表达显著降低(P<0.05);与Control组比较,H_(2)O_(2)诱导组TNF-α和IL-1β m RNA相对表达显著增高,细胞增殖和细胞活力显著降低。与H_(2)O_(2)+AAV-NC组比较,H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC si RNA组TNF-α和IL-1β m RNA相对表达显著降低,细胞增殖和细胞活力显著增高(P<0.05)。结论 ZXDC基因敲减通过调控CCL2/CCR2信号通路促进氧化应激损伤SCNs细胞增殖、细胞活力和神经突生长。
