鼠透明带3(ZP3)融合蛋白表达以及抗血清制备 被引量：4

1

作者 张富春 钱东 +3 位作者 林仁勇 马纪 马正海 钟哲 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期11-13,共3页

鼠透明带 3(mZP3)作为精子的初级受体 ,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白 ,抗鼠透明带 3抗体能够阻断精卵的结合 ,达到不育的效果 ,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA ,分离mRNA ,反转录获得cDNA ,将cDNA连接... 鼠透明带 3(mZP3)作为精子的初级受体 ,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白 ,抗鼠透明带 3抗体能够阻断精卵的结合 ,达到不育的效果 ,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA ,分离mRNA ,反转录获得cDNA ,将cDNA连接到测序载体pUCm -T质粒上 ,通过序列测定和分析得到正确的mZP3cDNA。经内切酶EcoRI和XhoI处理 ,将mZP3cDNA克隆至融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1中 ,在T4DNA连接酶的作用下构建出融合表达载体pGEX -mZP3,转化大肠杆菌BL - 2 1菌株 ,利用IPTG诱导后获得可溶性的蛋白质产物 ,经过SDS -PAGE鉴定 ,表达的融合蛋白GST -mZP3分子质量约为 72kD左右 ,纯化的融合蛋白免疫兔子 ,获得效价为1∶1 0 0 0的抗血清 ,Westernblot检测抗血清具有针对mZP3融合蛋白的专一性 。 展开更多

关键词 mzp3 CDNA 质粒GST-mzp3 原核表达 融合蛋白 抗血清

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猪ZP3α和ZP3βcDNA 5′端非编码顺序的甄别

2

作者 徐万祥 谢毅 肖谷田 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期223-225,共3页

透明带(Zona Pellucida,ZP)是哺乳动物卵子外一层丝状体酸性糖蛋白,在精卵识别、结合、穿透和阻止多精入卵等一系列受精过程中起着十分重要的作用.现已证实猪ZP包含ZP1、ZP3α(55kDa)和ZP3β(55kDa)等糖蛋白组分,并克隆了编码这些蛋白... 透明带(Zona Pellucida,ZP)是哺乳动物卵子外一层丝状体酸性糖蛋白,在精卵识别、结合、穿透和阻止多精入卵等一系列受精过程中起着十分重要的作用.现已证实猪ZP包含ZP1、ZP3α(55kDa)和ZP3β(55kDa)等糖蛋白组分,并克隆了编码这些蛋白质的基因.猪ZP3α和ZP3β蛋白质的多克隆抗体都能在体外阻断人精卵结合,所以作为免疫避孕的潜在免疫原,近年来它们一直受到相关科研人员的普遍关注.由于用常规生化方法提取猪ZP3α和ZP3β蛋白质步骤多得率低,而且产物纯度难以完全排除相互之间的交叉等缺陷,所以在已获得这些ZP基因克隆的今天,用遗传工程方法拓展猪ZP蛋白质组分的新来源极具吸引力. 展开更多

关键词 透明带 zp3α zp3βC DNA 编码 遗传工程

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重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量：12

3

作者 唐键 谢琪璇 +4 位作者 潘善培 肖銮娟 董鲁 张春雪 孙彩军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期758-762,共5页

利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris... 利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris中 ,用高浓度G4 18筛选高拷贝菌株 ,然后甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果发现P .pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中 ,并且可溶性好。纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体发生交叉反应 ,证实表达的目的蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 人卵透明带zp3蛋白 表达 毕赤酵母 表达载体

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人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免疫原性及其抗血清体外抑制人精子-半透明带结合 被引量：6

4

作者 宋力雯 汪玉宝 +8 位作者 倪崖 何亚萍 洪爱真 Elvira Hinsch Klaus-Dieter Hinsch 周思畅 袁玉英 石其贤 徐万祥 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期682-688,共7页

分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原, 主动免... 分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原, 主动免疫新西兰兔产生抗huZP3a22-176及huZP3b177-348抗血清;通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平:以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、天然人卵ZP以及卵巢组织的反应性;通过竞争性半透明带结合试验 (hemizona assay,HZA)观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力。结果显示:未与大分子蛋白载体耦联的r-huZP3a22-176 和r-huZP3b177-348抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度,而且它们的抗血清可识别大肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP,两者抗血清也都能在体外抑制人精子-ZP结合。由此可见,r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348蛋白具有良好免疫原性,所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性。因此,单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒,另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的最小B-细胞表位基序。 展开更多

关键词 人卵透明带 重组zp3肽 抗血清 卯母细胞:半透明带结合试验

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草兔卵透明带3(ZP3)基因的克隆及序列分析 被引量：6

5

作者 张浩 韩崇选 +2 位作者 郑雪莉 吴景龙 隋丹丹 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期63-68,共6页

根据GenBank中欧洲兔ZP3mRNA序列设计特异性引物,以草兔卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3cDNA编码区,命名为hZP3(GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260bp,编码419个氨基... 根据GenBank中欧洲兔ZP3mRNA序列设计特异性引物,以草兔卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3cDNA编码区,命名为hZP3(GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260bp,编码419个氨基酸,包含一个完整的开放阅读框(ORF)。与欧洲兔ZP3基因核苷酸一致性高达96%。预测的ZP3蛋白具有ZP家族典型特征。系统进化树显示其与欧洲兔亲缘关系最近,其次是啮齿目动物,符合物种进化规律。hZP3基因编码区的成功克隆,为进一步利用该基因通过免疫不育手段防治森林草兔危害提供了基础。 展开更多

关键词 草兔 卵透明带3(zp3) 克隆 序列分析

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牦牛ZP3基因的克隆及蛋白质结构的预测 被引量：5

6

作者 徐华伟 字向东 +3 位作者 黄磊 陈达文 穆晓琨 王红梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期156-161,167,共7页

本研究对牦牛ZP3基因的编码区进行了克隆,在此基础上对ZP3蛋白的分子结构预测,为研究牦牛受精生物学提供基础。根据GenBank中普通牛的ZP3核苷酸序列设计特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增牦牛ZP3基因cDNA序列(Ge... 本研究对牦牛ZP3基因的编码区进行了克隆,在此基础上对ZP3蛋白的分子结构预测,为研究牦牛受精生物学提供基础。根据GenBank中普通牛的ZP3核苷酸序列设计特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增牦牛ZP3基因cDNA序列(GenBank登录号为GQ856646),利用DNAMAN生物软件进行核苷酸和氨基酸序列分析、蛋白质专家系统ExPASy进行ZP3蛋白质分子结构预测。结果表明,扩增出的牦牛ZP3基因编码序列长1 266 bp,编码421个氨基酸。牦牛与牛、猪、狗、人、鼠和鸡ZP3基因核苷酸相应序列的同源性分别为98.42%、96.73%、79.67%、78.71%、69.15%和56.61%,氨基酸同源性分别为98.10%、83.85%、74.24%、70.26%、62.62%和46.12%,符合物种进化规律。预测的ZP3蛋白二级和三级结构显示它是一个具有22个氨基酸信号肽的亲水性β-桶状跨膜蛋白。牦牛ZP3基因编码区的成功克隆,为进一步研究该基因的结构与功能及其在受精过程中的作用提供了基础。 展开更多

关键词 牦牛 zp3基因 克隆 分子结构

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GnRH-A及其配伍对鲤鱼ZP3基因表达的影响 被引量：5

7

作者 宋艳 夏庆杰 +4 位作者 扬松沛 胡大芳 马世荣 张发强 闫乃红 《西南农业学报》 CSCD 2006年第1期149-151,共3页

运用逆转录实时荧光定量酶链反应(RT-FQ-PCR)技术,研究GnRH-A及其配伍对鱼卵成熟、受精相关基因ZP3的调控。结果显示:3种不同药物配伍分别使鲤鱼ZP3基因表达在给药处理后4、6和12 h达到峰值。提示:不同配伍药物对鱼卵成熟、受精产生影响... 运用逆转录实时荧光定量酶链反应(RT-FQ-PCR)技术,研究GnRH-A及其配伍对鱼卵成熟、受精相关基因ZP3的调控。结果显示:3种不同药物配伍分别使鲤鱼ZP3基因表达在给药处理后4、6和12 h达到峰值。提示:不同配伍药物对鱼卵成熟、受精产生影响。ZP3基因可作为促繁殖药筛选的重要指标。 展开更多

关键词 促繁殖药物 逆转录实时荧光定量酶链反应 鲤鱼zp3基因表达

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卵透明带ZP3的研究及其应用 被引量：13

8

作者 徐丽 彭景楩 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期122-126,共5页

卵透明带蛋白围绕在卵母细胞外 ,在受精过程中起着重要作用。ZP3蛋白是卵透明带蛋白家族中的重要成员 ,在功能上 ,ZP3作为初级精子受体 ,起始精卵结合和顶体反应。由于ZP3在受精中的重要作用 ,它成为免疫避孕的有效靶点。ZP3蛋白疫苗和... 卵透明带蛋白围绕在卵母细胞外 ,在受精过程中起着重要作用。ZP3蛋白是卵透明带蛋白家族中的重要成员 ,在功能上 ,ZP3作为初级精子受体 ,起始精卵结合和顶体反应。由于ZP3在受精中的重要作用 ,它成为免疫避孕的有效靶点。ZP3蛋白疫苗和DNA疫苗可以诱导机体产生较强的免疫反应 ,导致生育降低 ,同时带来一定程度的副作用。 展开更多

关键词 卵透明带 免疫避孕 DNA疫苗 zp3 受精过程

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人ZP3B-细胞表位嵌合肽DNA的设计和合成 被引量：2

9

作者 曹佐武 杨林 +1 位作者 潘善培 王自能 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2000年第4期42-45,共4页

目的 :设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ZP3B细胞表位的DNA序列。方法 :根据国外的研究基础 ,设计由人ZP3的B细胞表位肽段和外源Th细胞表位肽段串联而成的 4 5肽嵌合肽序列 ,并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的DNA... 目的 :设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ZP3B细胞表位的DNA序列。方法 :根据国外的研究基础 ,设计由人ZP3的B细胞表位肽段和外源Th细胞表位肽段串联而成的 4 5肽嵌合肽序列 ,并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的DNA序列。然后人工合成该嵌合肽的DNA链 ,并克隆到PUC18载体上。结果 :通过酶切分析和测序证明 ,合成的DNA与所设计的嵌合肽DNA序列一致。结论 :　按设计合成了人ZP3的B细胞表位和外源Th细胞表位串联而成的嵌合肽DNA序列。 展开更多

关键词 人zp3 透明带基因 B细胞表位 嵌合肽 DNA序列

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山羊ZP3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究 被引量：1

10

作者 刘霜 卢建远 +5 位作者 马力 夏威 胡亮 罗斌 杨珂伟 字向东 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第4期412-416,共5页

对高繁金堂黑山羊和低繁藏山羊ZP3基因c DNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR技术对其在发情前期母羊卵巢组织的表达进行研究.结果表明:山羊ZP3基因编码区全长为1269bp,共编码422个氨基酸,两品种间有2处碱基差异,但未导致氨基酸... 对高繁金堂黑山羊和低繁藏山羊ZP3基因c DNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR技术对其在发情前期母羊卵巢组织的表达进行研究.结果表明:山羊ZP3基因编码区全长为1269bp,共编码422个氨基酸,两品种间有2处碱基差异,但未导致氨基酸的差异.山羊的ZP3基因在卵巢表达量高,与其他组织差异极显著(P<0.01),但两个品种间差异不显著(P>0.05).说明ZP3基因主要在卵巢中表达,但可能不是影响山羊多羔性状的主基因. 展开更多

关键词 山羊 zp3 克隆 序列分析 qPCR

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猪卵透明带ZP3α真核表达载体的构建及体外瞬时表达 被引量：2

11

作者 孙彩军 潘善培 +2 位作者 谢琪璇 肖銮娟 唐键 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第2期3-5,共3页

目的 :构建猪卵透明带ZP3α真核表达载体 ,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法 :采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段 ,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞... 目的 :构建猪卵透明带ZP3α真核表达载体 ,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法 :采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段 ,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达 ,然后采用RT -PCR和间接免疫荧光技术 (IIF)检测pZP3α在mRNA水平的转录和蛋白质水平上的表达。结果 :真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α构建成功 ,用RT -PCR和IIF技术检测到了pZP3α在HeLa细胞中的转录与表达。结论 :真核表达载体pVAX1-pZP3α的成功构建和表达为研制开发有效的人用卵透明带DNA避孕疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪卵透明带 zp3α 真核表达栽体 DNA疫苗 免疫避孕

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蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用 被引量：1

12

作者 谢琪璇 郑育声 +3 位作者 彭雅林 肖銮娟 余巍 潘善培 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1208-1210,共3页

目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y ... 目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论　该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。 展开更多

关键词 层析 蛋白 定量 重组人卵透明带zp3蛋白 纯化

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人ZP3基因的RT-PCRcDNA克隆 被引量：1

13

作者 叶志华 梁建庆 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第4期1-4,共4页

目的:研究人ZP3基因的结构及构建人ZP3基因原核表达系统。方法:从人卵巢组织中分离出mRNA并以此作为模版,通过RT-PCR扩增出人ZP3基因cDNA片段,然后将其克隆在pUC18质粒上,并对克隆片段进行序列分析。结果:共克隆到ZP3-A(1300bp)、ZP3-B(... 目的:研究人ZP3基因的结构及构建人ZP3基因原核表达系统。方法:从人卵巢组织中分离出mRNA并以此作为模版,通过RT-PCR扩增出人ZP3基因cDNA片段,然后将其克隆在pUC18质粒上,并对克隆片段进行序列分析。结果:共克隆到ZP3-A(1300bp)、ZP3-B(1180bp)、ZP3-C(1200bp)和ZP3-D(1080bp)4种不同长度的人ZP3基因cDNA片段,对其中最长的ZP3-A片段的测序结果表明,它包含了人ZP3基因阅读框内的全部序列,与NCBISequenceViewer中公布的人ZP3mRNA序列(NM-007155)相比较,在1275bp长的编码区内只有一个碱基不同,两者同源性达到99.92%。结论:本研究克隆到的ZP3-AcDNA片段确是人ZP3基因无疑。 展开更多

关键词 人zp3基因 CDNA克隆 序列

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透明带的精子受体在ZP3的O-糖链上 被引量：2

14

作者 曹佐武 《生命的化学》 CAS CSCD 2001年第4期297-299,共3页

关键词 透明带 精子受体 受精 O-糖链 zp3

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密码子植物化的小鼠ZP3蛋白基因人工合成 被引量：1

15

作者 芦春斌 《种子》 CSCD 北大核心 2009年第5期21-23,共3页

对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3... 对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3基因的编码区。DNA序列测定人工合成的基因为植物化的ZP 3基因。 展开更多

关键词 小鼠zp3蛋白基因 重叠PCR 合成 植物反应器

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昆虫细胞杆状病毒表达系统表达重组人类ZP3蛋白的研究

16

作者 卢慧 刁华 +3 位作者 肖玉芳 于合国 李铮 施惠娟 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期978-983,共6页

目的：探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3（hZP3）蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法：构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状... 目的：探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3（hZP3）蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法：构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状病毒穿梭载体Bacmid,用重组的Bacmid转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,分别表达带HIS标签的h ZP3全长蛋白（氨基酸1-424）和截短的hZP3蛋白（氨基酸23-348）。摸索重组hZP3蛋白的表达时间和纯化制备方法。结果：成功制备了表达重组人hZP3全长蛋白和截短体蛋白的Bacmid和杆状病毒颗粒,Western印迹检测表明,在Sf9细胞中较好的表达时间段为感染后72-96 h。重组表达的hZP3蛋白可以部分被钴柱亲和纯化,大量的重组hZP3蛋白不能结合到亲和介质而流穿,但确切的原因还未知。纯化得到的hZP3经荧光素Dylight Dye488标记,能与人精子结合。结论：利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达hZP3蛋白是可行的,可以进一步优化,但hZP3蛋白的有效富集和纯化方法是最大的瓶颈,还需要进一步摸索。 展开更多

关键词 人zp3 精子 重组蛋白 昆虫细胞杆状病毒表达系统

原文传递

补肾中药对免疫性不孕症相关基因ZP3 mRNA表达的影响

17

作者 郭焱 李丽 李春莉 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2009年第29期4151-4153,共3页

目的:观察补肾中药对免疫性不孕症相关基因ZP3 mRNA表达的影响。方法:采用主动免疫法制作免疫性不孕小鼠模型,提取卵巢细胞总RNA,采用RT-PCR技术,检测药物对卵巢细胞ZP3 mRNA的影响。结果:补肾中药可明显下调免疫性不孕小鼠卵巢细胞ZP3 ... 目的:观察补肾中药对免疫性不孕症相关基因ZP3 mRNA表达的影响。方法:采用主动免疫法制作免疫性不孕小鼠模型,提取卵巢细胞总RNA,采用RT-PCR技术,检测药物对卵巢细胞ZP3 mRNA的影响。结果:补肾中药可明显下调免疫性不孕小鼠卵巢细胞ZP3 mRNA的水平(P<0.01)。结论:补肾中药可能通过下调免疫性不孕小鼠卵巢细胞ZP3 mRNA表达,从而发挥治疗作用。 展开更多

关键词 补肾中药 免疫性不孕症 zp3 MRNA

原文传递

重组人ZP3蛋白在大肠杆菌中的高效表达

18

作者 叶志华 梁建庆 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第6期3-7,共5页

目的：用基因工程方法制备重组人ZP3蛋白。方法：以全长人ZP3 cDNA片段为模板，通过PCR扩增出编码人ZP3蛋白不同肽段的cDNA片段，然后将这些cDNA片段分别插入到表达载体pET-I9b的Nco I-BamH I或Nde I-BamH I位点内，共构建成6种人ZP3蛋... 目的：用基因工程方法制备重组人ZP3蛋白。方法：以全长人ZP3 cDNA片段为模板，通过PCR扩增出编码人ZP3蛋白不同肽段的cDNA片段，然后将这些cDNA片段分别插入到表达载体pET-I9b的Nco I-BamH I或Nde I-BamH I位点内，共构建成6种人ZP3蛋白非融合表达质粒（pFZP3-1-pEZP3-6）和3种人ZP3蛋白融合表达质粒（pFZP3-7-Pfzp3-9）.将这9种表达质粒分别转化大肠杆菌Rosetta2（DE3）感受态细胞并选择出Ap转化子，将Ap转化子接种到NZCYM培养基中（含AP 100μg/mL），在35-37℃振荡培养到对数生长期，加入IPTG至1.0-1.5mmol/L浓度诱导培养3h，离心收集细胞进行SDS-PAGE电泳检测和Western Blot杂交分析。结果：这9种人ZP3蛋白表达质粒在大肠杆菌Rosetta2（DE3）中得到高效表达，目的蛋白占总细胞蛋白的10-25%，表达产物均以包涵体形式存在。结论：成功构建了重组人ZP3蛋白原核表达系统，为地一步研究和应用人ZP3蛋白打下了基础。 展开更多

关键词 人zp3蛋白 表达 大肠杆菌

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常规IVF完全受精失败患者的ZP3基因突变检测分析

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作者 王华 胡巨伟 +2 位作者 李洁 徐继强 周黎明 《中国优生与遗传杂志》 2020年第10期1263-1265,1272,共4页

目的通过Sanger测序,检测ZP3基因突变在常规IVF受精正常组和完全受精失败组的出现频率情况,以寻求突变对受精的影响。方法选取接受常规IVF治疗的患者90例,按受精率分为受精正常组(对照组 n=64)和完全受精失败组(试验组 n=26),收集女性... 目的通过Sanger测序,检测ZP3基因突变在常规IVF受精正常组和完全受精失败组的出现频率情况,以寻求突变对受精的影响。方法选取接受常规IVF治疗的患者90例,按受精率分为受精正常组(对照组 n=64)和完全受精失败组(试验组 n=26),收集女性患者血液样本并提取DNA;根据ZP3设计引物进行扩增,利用Sanger测序,观察两组ZP3基因突变情况。结果共发现8种基因突变,突变在对照组和实验组中出现频率均没有显著性差异(P>0.05)。结论 8种ZP3基因突变可能和受精无关系,尚需大样本和多因素研究。 展开更多

关键词 Sanger测序 受精 zp3 基因突变

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人ZP3精子受体相关的细胞表位嵌合肽的基因表达

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作者 曹佐武 杨林 +6 位作者 刘穗玲 肖銮娟 谢琪璇 王珣章 龙綮新 潘善培 王自能 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第B10期60-60,共1页

关键词 人卵泡 zp3精子受体 细胞表位嵌合肽 基因表达

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