目的探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量...目的探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量。DR-GFP质粒系统检测DNA损伤修复水平,免疫荧光法检测蛋白的空间定位。结果依托泊苷抑制了ZNF451的表达并呈剂量及时间依赖性。30、50、80μmol/L依托泊苷处理,敲低ZNF451后的A549和HeLa细胞增殖活力显著降低(A549:t=27.62、25.61、5.32,P<0.01;HeLa:t=30.77、21.28、4.18,P<0.01)。ZNF451在DNA损伤位点处募集并与γ-H2AX存在胞内共定位和内源性的相互作用,且在30、50、80μmol/L依托泊苷处理的ZNF451敲低细胞中,γ-H2AX的表达水平显著增加(A549:t=6.12、10.67、4.68,P<0.01;HeLa:t=7.94、9.81、15.12,P<0.01)。敲低ZNF451的细胞非同源末端连接(NHEJ)修复效率降低(t=18.60,P<0.05)。在辐射和依托泊苷处理后,ZNF451与P53结合蛋白1(53BP1)和DNA损伤检查点介质1(MDC1)有明显的共定位。结论敲低ZNF451抑制A549和HeLa细胞增殖并诱导DNA损伤水平加剧。ZNF451可以募集至DNA损伤位点,通过与DNA损伤修复因子53BP1/MDC1共定位参与NHEJ修复。展开更多
文摘目的探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量。DR-GFP质粒系统检测DNA损伤修复水平,免疫荧光法检测蛋白的空间定位。结果依托泊苷抑制了ZNF451的表达并呈剂量及时间依赖性。30、50、80μmol/L依托泊苷处理,敲低ZNF451后的A549和HeLa细胞增殖活力显著降低(A549:t=27.62、25.61、5.32,P<0.01;HeLa:t=30.77、21.28、4.18,P<0.01)。ZNF451在DNA损伤位点处募集并与γ-H2AX存在胞内共定位和内源性的相互作用,且在30、50、80μmol/L依托泊苷处理的ZNF451敲低细胞中,γ-H2AX的表达水平显著增加(A549:t=6.12、10.67、4.68,P<0.01;HeLa:t=7.94、9.81、15.12,P<0.01)。敲低ZNF451的细胞非同源末端连接(NHEJ)修复效率降低(t=18.60,P<0.05)。在辐射和依托泊苷处理后,ZNF451与P53结合蛋白1(53BP1)和DNA损伤检查点介质1(MDC1)有明显的共定位。结论敲低ZNF451抑制A549和HeLa细胞增殖并诱导DNA损伤水平加剧。ZNF451可以募集至DNA损伤位点,通过与DNA损伤修复因子53BP1/MDC1共定位参与NHEJ修复。
