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miR-181a在衰老萎缩的胸腺细胞中的表达及功能
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作者 张顺 郭智彬 万仁华 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第1期29-32,共4页
目的探讨miR-181a在胸腺增龄性萎缩过程中的表达,及其与靶基因ZFP36l2的相互作用关系,阐明胸腺增龄性萎缩过程分子调节机制。方法 C57BL/6小鼠分为1月龄组、9月龄组、15月龄组,每组各6只。取出胸腺并分离细胞,经CD45抗体染色,LS柱吸附... 目的探讨miR-181a在胸腺增龄性萎缩过程中的表达,及其与靶基因ZFP36l2的相互作用关系,阐明胸腺增龄性萎缩过程分子调节机制。方法 C57BL/6小鼠分为1月龄组、9月龄组、15月龄组,每组各6只。取出胸腺并分离细胞,经CD45抗体染色,LS柱吸附洗脱筛选出胸腺细胞。实时荧光定量PCR法检测胸腺细胞中miR-181a与靶基因ZFP36l2随年龄增长的表达变化趋势,并进行相关性分析。体外应用HEK293细胞转染荧光素酶报告载体,48 h后检测自发荧光值。结果随年龄增长,miR-181a呈现表达下调趋势(P<0.05),而靶基因ZFP36l2则呈现出表达上升趋势(P<0.05)。对miR-181a与ZFP36l2表达量进行相关性分析,发现两者呈负相关性(P=0.04)。体外细胞转染荧光素酶报告基因证实,miR-181a与ZFP36l2 3’UTR区域结合(P<0.05)。结论 miR-181a与靶基因ZFP36l2与胸腺增龄性萎缩过程密切相关,是调节胸腺细胞功能的重要因子。 展开更多
关键词 胸腺增龄性萎缩 miR-181a zfp36l2
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人源肾细胞(HEK293T)蛋白LGALS1真核表达载体的构建
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作者 刘起豪 孙延鸣 《现代畜牧科技》 2021年第8期6-9,16,共5页
目的:扩增LGALS1、ZFP36L2、WBSCR22三种蛋白的基因,构建其真核表达载体,为后续蛋白互作、毒力因子分析等实验奠定基础。方法:根据毒力蛋白基因序列,使用premier 5.0软件设计了三对特异性引物用于基因扩增。以HEK293T细胞中提取出的RNA... 目的:扩增LGALS1、ZFP36L2、WBSCR22三种蛋白的基因,构建其真核表达载体,为后续蛋白互作、毒力因子分析等实验奠定基础。方法:根据毒力蛋白基因序列,使用premier 5.0软件设计了三对特异性引物用于基因扩增。以HEK293T细胞中提取出的RNA反转录出的cDNA为模板,PCR法扩增三种基因LGALS1、ZFP36L2、WBSCR22,连接至pMD19-T载体,构建出pMD19-T-LGALS1、ZFP36L2、WBSCR22,分别经Nde I和BamH I,EcoR I和Nde I,BamH I和EcoR I双酶切后连接到pGBKT7真核表达载体中,构建出pGBKT7-LGALS1、pGBKT7-ZFP36L2、pGBKT7-WBSCR22。结果:目的基因LGALS1、ZFP36L2、WBSCR22扩增成功,pMD19-T-LGALS1、pMD19-T-ZFP36L2、pMD19-T-WBSCR22连接成功,双酶切成功,真核表达载体pGBKT7-LGALS1构建成功,pGBKT7-ZFP36L2、pGBKT7-WBSCR22构建失败。结论:真核表达载体pGBKT7-LGALS1成功构建,为后续实验的进行提供了便利。pGBKT7-ZFP36L2、pGBKT7-WBSCR22构建失败,积累了丰厚的实验经验。 展开更多
关键词 HEK293T LGALS1 zfp36l2 WBSCR22 真核表达载体
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