敲降组蛋白去乙酰化酶HDAC8对斑马鱼ZF4细胞存活率的影响 被引量：1

1

作者 李飞 罗军涛 +4 位作者 燕晓霞 陈静 张婷婷 韩兵社 张俊芳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期985-990,共6页

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,然而,其在鱼类生理中的作用目前报道较少。本研究设计合成了斑马鱼HDAC8的shRNA,用EcoR I和AgeI酶切构建了pLKO.1-h... 组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,然而,其在鱼类生理中的作用目前报道较少。本研究设计合成了斑马鱼HDAC8的shRNA,用EcoR I和AgeI酶切构建了pLKO.1-hdac8-shRNA重组质粒,同时构建了一个阴性对照重组质粒(nc),接着将pCMV-VSVG、pCMV-Dr8.91两个慢病毒包装质粒分别与设计好的重组质粒共转染到HEK-293T细胞中进行病毒包装。收集病毒并用其感染ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中hdac8成功被敲降。随后使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内凋亡相关基因bax、bcl2、caspase-3的表达情况。研究发现:与对照组(nc)细胞相比,敲降hdac8的细胞存活率显著下降(P<0.05),bax及caspase-3的表达量在敲降hdac8的细胞内显著上调,意味着敲降hdac8的细胞死亡的增加可能是通过上调凋亡水平引起的。本研究为后期对斑马鱼在生长发育过程中及环境压力下的凋亡机制的研究提供基础。 展开更多

关键词 HDAC8 斑马鱼zf4细胞 细胞存活率

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miRNA-155对氟虫腈作用下斑马鱼ZF4细胞存活的影响

2

作者 李鹿丰 黄涵年 +2 位作者 周永勇 张凯 郭江峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期315-321,共7页

microRNA（miRNA）是一类长约20～24nt的非编码单链小分子RNA．环境毒理学研究表明，当生物暴露于环境化学物质时，会引起相关miRNA表达发生变化，进而调节基因的表达．农药氟虫腈是一种苯基吡唑类杀虫剂，能影响斑马鱼中miR-155的正常... microRNA（miRNA）是一类长约20～24nt的非编码单链小分子RNA．环境毒理学研究表明，当生物暴露于环境化学物质时，会引起相关miRNA表达发生变化，进而调节基因的表达．农药氟虫腈是一种苯基吡唑类杀虫剂，能影响斑马鱼中miR-155的正常表达，但尚未见异位表达的miR．155对斑马鱼细胞影响的研究．本研究明确了异位表达的miR-155对氟虫腈作用下斑马鱼胚胎细胞ZF4存活的影响．结果显示，氟虫腈处理ZF4细胞72h的，IC_50值为39．05p,mol／L，瞬时转染miR-155mimic，显著降低了ZF4细胞氟虫腈暴露的存活率．同时real-time PCR结果显示，其潜在靶基因cyb561d2表达显著降低；而转染miR-155 inhibitor，抑制细胞内源性的miR-155则可显著增强ZF4细胞抵抗氟虫腈细胞毒性的能力，同时cyb561d2表达则显著增高．以上结果表明，miR-155参与氟虫腈毒理学效应，其表达量的高低可以影响氟虫腈作用下ZF4细胞的存活率，而其可能的途径之一是通过潜在靶基因cyb561以的表达调控来实现．因此，miR-155可作为氟虫腈环境毒性的潜在的生物标志物，有望成为致癌环境化学物质对生物体作用机制研究的新途径． 展开更多

关键词 microRNA-155 细胞存活率 zf4细胞 细胞毒性 氟虫腈

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低温胁迫诱导斑马鱼ZF4细胞ROS及MAPK相关蛋白表达的影响 被引量：11

3

作者 许琼琼 韩兵社 +4 位作者 罗军涛 李艳 侯艳雯 胡鹏 张俊芳 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期771-776,共6页

为了研究鱼类低温下分子调控机制及其与活性氧(reactive oxygen species,ROS)之间的关系,本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维ZF4细胞进行不同程度的低温胁迫(18℃和10℃),监测其在不同低温胁迫时间下(1 d、3 d和5 d)ROS的变化以及... 为了研究鱼类低温下分子调控机制及其与活性氧(reactive oxygen species,ROS)之间的关系,本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维ZF4细胞进行不同程度的低温胁迫(18℃和10℃),监测其在不同低温胁迫时间下(1 d、3 d和5 d)ROS的变化以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中蛋白的表达情况。结果显示:(1)DCFH-DA探针法表明在低温胁迫作用下,细胞内ROS含量增加。细胞内ROS上升水平与外界胁迫压力成正相关。低温处理3 d后,18℃和10℃的细胞,其ROS含量与对照组(28℃)相比分别显著升高到(1.23±0.04)倍(P<0.05)和(2.31±0.08)倍(P<0.05)。(2)Western Blot检测磷酸化的p38(p-p38)和磷酸化的JNK(p-JNK p54和p-JNK p46)的水平变化,结果显示低温胁迫可以使p38和JNK的活性增强,且均在10℃处理3 d达到最高水平。(3)进一步检测DNA断裂标记蛋白γH2A.X的表达水平,结果显示,无论在18℃还是10℃,其在第3天呈现高表达。本实验初步证实低温胁迫能够诱导斑马鱼细胞ROS的产生;通过对不同时间点的蛋白表达水平检测,发现p-JNK、p-p38和γH2A.X激活时间点与低温诱导ROS表达时间点相吻合。该研究为后期对斑马鱼细胞低温胁迫实验奠定基础,其中低温下处理3 d可以作为一个检测各个蛋白变化的关键时间点。 展开更多

关键词 ROS 斑马鱼zf4细胞 低温胁迫 MAPKS γH2A.X

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dusp1敲降对低温诱导斑马鱼ZF4细胞凋亡的作用 被引量：4

4

作者 牛虹博 胡鹏 +3 位作者 程鹏丽 储旭 胡春兰 陈良标 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期995-1002,共8页

为了研究双特异性磷酸酶(dual-specificity phosphatase 1,dusp1)基因与鱼类低温诱导的细胞凋亡之间的关系,本研究经Eco RI和Age1酶切构建plko.1-dusp1-sh RNA1,plko.1-dusp1-shRNA2,plko.1-negative control(nc),plko.1-EGFP的重组质粒... 为了研究双特异性磷酸酶(dual-specificity phosphatase 1,dusp1)基因与鱼类低温诱导的细胞凋亡之间的关系,本研究经Eco RI和Age1酶切构建plko.1-dusp1-sh RNA1,plko.1-dusp1-shRNA2,plko.1-negative control(nc),plko.1-EGFP的重组质粒,并分别与慢病毒包装质粒pCMV-DR8.9.1、pCMV-VSVG共同转染至293T细胞中,经293T细胞包装的病毒,感染斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryos fibroblast like cell line,ZF4),RT-PCR检测表明dusp1成功被敲降。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞系,将细胞于28℃培养(正常对照组)或经10℃低温处理10 d,使用annexin V-FITC/Propidium lodide(PI)双色标记流式细胞术检测ZF4细胞凋亡情况。结果显示:低温胁迫下dusp1敲降的细胞凋亡(dusp1-shRNA1敲降,dusp1-kd1;dusp1-shRNA2敲降,dusp1-kd2)比例较nc组显著上调,其中早期凋亡和晚期凋亡细胞比例dusp1-kd1显著高于nc组,并且dusp1-kd1活细胞数显著低于nc组(P<0.05),进一步证明dusp1参与鱼类冷应激过程,并在低温情况下保护细胞。该研究为后期对斑马鱼细胞低温胁迫实验奠定了基础,其中dusp1基因沉默型斑马鱼细胞在10℃低温处理10 d凋亡数显著大于对照组,证明dusp1在细胞凋亡信号通路中起到重要调控作用,为低温下研究斑马鱼基因的分子机制提供新的思路。 展开更多

关键词 双特异性磷酸酶 慢病毒 SHRNA zf4细胞 凋亡 低温胁迫

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低温对斑马鱼ZF4细胞基因组DNA甲基化水平的影响 被引量：5

5

作者 侯艳雯 刘玮 +2 位作者 姜蓬垒 张俊芳 韩兵社 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期271-279,共9页

低温压力会导致鱼类生理功能失调、机体损伤甚至死亡,鱼类会产生各种适应性变化来应对低温压力,其中涉及的表观遗传学机制越来越受到重视。为了探讨鱼类低温应激压力下的表观遗传学调控机制,本研究对斑马鱼(Daniorerio)胚胎成纤维细胞ZF... 低温压力会导致鱼类生理功能失调、机体损伤甚至死亡,鱼类会产生各种适应性变化来应对低温压力,其中涉及的表观遗传学机制越来越受到重视。为了探讨鱼类低温应激压力下的表观遗传学调控机制,本研究对斑马鱼(Daniorerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行短期低温胁迫(18℃处理3d、5d和10℃处理3d、5d)和长期低温胁迫(18℃处理30 d),然后用具有不同甲基化敏感性的同裂酶HpaⅡ和MspⅠ对细胞基因组DNA进行酶切以监测细胞基因组DNA甲基化水平变化。结果显示短期低温胁迫下ZF4细胞生长受到抑制甚至死亡,而经过长期低温胁迫的ZF4细胞对低温压力产生了一定适应性。并且低温胁迫下DNA甲基化水平呈现动态变化,短期低温培养细胞的基因组DNA甲基化水平明显增高,但是长期低温培养细胞的DNA甲基化水平反而下降。此外,研究发现抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)或者共济失调–毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia mutated,ATM)抑制剂KU-55933可以抑制18℃5 d低温处理后的ZF4细胞DNA甲基化水平的增高,说明活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生和ATM的激活介导了DNA甲基化水平的增高。本研究结果显示,短期低温刺激下ZF4细胞ROS的产生导致DNA损伤,激活DNA损伤修复机制,进而导致基因组DNA甲基化水平上升,该研究为后期斑马鱼低温胁迫分子机制的研究奠定基础。 展开更多

关键词 斑马鱼zf4细胞 低温应激 ROS ATM DNA甲基化

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低温驯化对斑马鱼ZF4细胞凋亡和ROS的影响 被引量：5

6

作者 王晓煜 胡春兰 +1 位作者 程鹏丽 陈良标 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期4475-4480,共6页

低温驯化是生物适应寒冷环境的一个重要途径,了解低温驯化的机制对揭示生物如何在低温环境中存活并繁衍具有重要的意义。为了探究鱼类适应低温的机制,本研究建立了斑马鱼成纤维ZF4细胞的单克隆细胞系,并在18℃长期培养适应16个月,成功... 低温驯化是生物适应寒冷环境的一个重要途径,了解低温驯化的机制对揭示生物如何在低温环境中存活并繁衍具有重要的意义。为了探究鱼类适应低温的机制,本研究建立了斑马鱼成纤维ZF4细胞的单克隆细胞系,并在18℃长期培养适应16个月,成功获得了低温驯化细胞系。之后我们将18℃驯化组细胞和28℃未驯化组细胞放置13℃低温处理3 d后,观察低温对驯化细胞和未驯化细胞的影响。我们发现18℃驯化细胞的形态与18℃~13℃3 d处理组没有明显差别,并且细胞能正常生长,稳定传代,说明驯化后的细胞对低温已经产生了适应性。随后我们比较了18℃低温驯化组和28℃未驯化组的细胞形态发现,在13℃处理3 d后,驯化组细胞连接较为紧密,整体状态未发生太大变化;而28℃未驯化组细胞聚集程度非常明显,细胞状态较差,死细胞数目增多。我们对细胞的存活率,活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及细胞的凋亡程度进行检测发现,18℃驯化组细胞存活率高于28℃未驯化组(p<0.05),ROS含量显著低于28℃未驯化组(p<0.01),凋亡程度显著低于未驯化组(p<0.01),说明低温驯化能提高细胞的耐寒能力,在面临更低温度时,能减少ROS含量减轻细胞受损程度。总之,本研究成功建立了低温驯化细胞系,为今后抗寒机制的研究提供了实验材料,同时也为低温适应机制的进化历程追踪提供了研究基础。 展开更多

关键词 zf4 单克隆细胞 驯化 凋亡 ROS

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低温胁迫下斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4)应激颗粒的探究 被引量：3

7

作者 程鹏丽 胡瑞芹 +1 位作者 李根芳 陈良标 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期40-44,共5页

为了探究低温胁迫下斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4)应激颗粒的形成及其解聚情况,首先选取18℃、13℃和10℃作为低温胁迫温度,并且分别通过不同时间的低温处理;然后利用TIAL1、G3BP1(应激颗粒的标记物)分别进行细胞免疫荧光实验和RT-qPCR实... 为了探究低温胁迫下斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4)应激颗粒的形成及其解聚情况,首先选取18℃、13℃和10℃作为低温胁迫温度,并且分别通过不同时间的低温处理;然后利用TIAL1、G3BP1(应激颗粒的标记物)分别进行细胞免疫荧光实验和RT-qPCR实验探究应激颗粒的形成和解聚;最后选取应激恢复的温度和时间,探究应激颗粒的解聚情况。结果表明,不同温度的低温胁迫,应激颗粒形成的时间不同;低温处理时间不同,应激颗粒的大小也不同。实验发现在18℃低温处理24 h,13℃低温处理4 h以及10℃低温处理1 h,ZF4细胞应激颗粒形成明显。说明随着胁迫温度的降低,应激颗粒形成速度也在加快。应激颗粒的形成表现为应激颗粒数量的增多和直径的变大。当ZF4细胞在13℃低温处理4 h,再将温度恢复到最适生长温度(28℃)时,发现应激颗粒会在十几分钟迅速解聚。应激颗粒的解聚表现为应激颗粒的快速溶解消散。首次发现鱼类细胞在低温下形成应激颗粒,主要成分与哺乳动物细胞类似,表明应激颗粒是动物细胞应对低温刺激的普遍反应机制。 展开更多

关键词 zf4细胞 低温胁迫 应激颗粒 形成 解聚

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南极鱼Calmodulin基因在ZF4细胞中抗寒功能的分析 被引量：1

8

作者 胡瑞芹 李根芳 陈良标 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期4947-4952,共6页

为探究南极鱼Calmodulin基因在低温适应下的作用与应用,本研究从南极鱼Dissostichus mawsoni的cDNA文库中克隆得到CaM基因,通过构建真核表达载体并转染到ZF4细胞中,在低温胁迫下检测细胞的存活率。结果表明,南极鱼CaM基因能够在ZF4细胞... 为探究南极鱼Calmodulin基因在低温适应下的作用与应用,本研究从南极鱼Dissostichus mawsoni的cDNA文库中克隆得到CaM基因,通过构建真核表达载体并转染到ZF4细胞中,在低温胁迫下检测细胞的存活率。结果表明,南极鱼CaM基因能够在ZF4细胞中表达,并分布在细胞质中;在低温胁迫下,与对照组相比,过表达南极鱼CaM基因的细胞的LDH毒性明显低于对照组,并且细胞活性明显高于对照组。因此,低温胁迫下南极鱼CaM基因的过表达能够显著提高ZF4细胞的抗寒能力。本研究结果证明了一种候选的抗寒基因,为鱼类的抗寒育种提供了理论依据。 展开更多

关键词 南极鱼CaM基因 低温胁迫 zf4细胞 LDH细胞毒性 细胞活性

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低温压力下斑马鱼ZF4细胞中dnmt1的作用研究

9

作者 王琼 罗军涛 +2 位作者 罗贝贝 韩兵社 张俊芳 《医学分子生物学杂志》 CAS 2021年第6期482-489,共8页

目的探究低温压力下DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的作用。方法以斑马鱼胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryonic fibroblast like cell line,ZF4)为研究对象,检测ZF4细胞低温下dnmt1的表达变化,并构建靶向dnmt1的shRNA... 目的探究低温压力下DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的作用。方法以斑马鱼胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryonic fibroblast like cell line,ZF4)为研究对象,检测ZF4细胞低温下dnmt1的表达变化,并构建靶向dnmt1的shRNA通过慢病毒在ZF4细胞中敲低dnmt1,进一步检测敲低dnmt1对于低温下ZF4细胞全基因组DNA甲基化、细胞存活率和凋亡相关基因表达的影响。结果18℃低温压力下ZF4细胞中dnmt1的mRNA表达量升高,在处理第3天达到顶峰。sh-dnmt1慢病毒可以有效下调ZF4细胞中dnmt1的表达。低温压力下,ELISA结果显示dnmt1敲低后细胞全基因组DNA甲基化水平显著下调(P<0.05),台盼蓝染色显示细胞存活率显著升高(P<0.001),RT-qPCR结果显示凋亡相关基因bax表达量显著下调(P<0.001)、bcl-2表达量显著上调(P<0.001)、caspase-3表达量显著下调(P<0.01)。结论低温压力下敲低dnmt1对ZF4细胞具有保护作用,而且DNA甲基化水平降低、细胞凋亡受到抑制可能与其保护作用相关,研究结果可为后期研究人类低温耐受的分子机制提供新线索。 展开更多

关键词 低温 zf4细胞 DNMT1 DNA甲基化 细胞凋亡

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铝易拉罐化学处理液ZF4研制

10

作者 刘晓辉 王贵公 沈淑清 《辽宁化工》 CAS 1993年第3期34-35,64,共3页

以低浓度锆为核心成份的化学处理液 ZF4代替国内多用的铬酸盐对铝易拉罐的防腐蚀膜进行处理,可以克服铬酸盐法废水中铬含量高、处理难度大的缺点。本文介绍了 ZF4化学处理液的使用效果及原料消耗,并对进口化学处理液进行了剖析。

关键词 铝易拉罐 化学处理液 zf4 防腐蚀膜

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ZF4-126型GIS开关弹簧机构拒合及合后即跳隐患原因分析及整改

11

作者 杨次 《电工技术》 2019年第17期89-91,共3页

针对某公司110kVZF4-126型GIS开关弹簧机构长时间未操作后再次进行合闸操作时出现拒合、合后即跳等故障现象,对该型号开关弹簧机构的故障原因进行分析,并提出整改方案。

关键词 zf4-126 弹簧机构 拒合 合后即跳

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低温下ZF4细胞miR-183-5p的作用研究 被引量：1

12

作者 牛昊 富伟康 +3 位作者 罗军涛 李梦佳 张俊芳 韩兵社 《医学分子生物学杂志》 CAS 2022年第2期115-120,共6页

目的探讨miR-183-5p在斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维(ZF4)细胞低温适应中的表达情况与作用机制。方法RT-qPCR检测ZF4细胞中miR-183-5p的表达,使用靶基因预测数据库Targetscan Fish预测miR-183-5p的靶基因,Turbofect转染试剂对miR-183-5... 目的探讨miR-183-5p在斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维(ZF4)细胞低温适应中的表达情况与作用机制。方法RT-qPCR检测ZF4细胞中miR-183-5p的表达,使用靶基因预测数据库Targetscan Fish预测miR-183-5p的靶基因,Turbofect转染试剂对miR-183-5p模拟物/miRNA阴性对照(miR-183-5p mimics/miR-NC)进行转染,并进行后续CCK-8法细胞活力检测实验和双荧光素酶活性报告实验。结果18℃低温培养30 d后ZF4细胞中miR-183-5p的表达量显著升高,且细胞活力检测实验发现过表达miR-183-5p可增强低温下ZF4细胞活力;miR-183-5p的保守性分析显示其在物种间高度保守,使用生物信息方法与RTqPCR预测并初步验证了miR-183-5p潜在的靶基因,双荧光素酶活性报告实验进一步验证了miR-183-5p可与egr1的3′UTR结合。结论miR-183-5p可能通过egr1在斑马鱼细胞低温适应过程中起到保护作用,这为进一步探索斑马鱼低温适应机制奠定了基础,并为低温治疗的分子机制研究提供了新思路。 展开更多

关键词 斑马鱼 F4 细胞 低温 MIRNA

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ZF4-126型SF6封闭式组合电器

13

作者 王杰 《电力系统装备》 2004年第11期56-56,共1页

由北京北开电气股份有限公司生产的ZF4-126型SF6封闭式组合电器适用于110kV的配电网络。该产品采用定开距灭弧结构，近区故障开断性能较好。

关键词 zf4-126型 SF6封闭式组合电器 UL标准 技术参数 北京北开电气股份有限公司

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kdm4A在斑马鱼细胞低温胁迫过程中的作用 被引量：2

14

作者 刘玮 罗军涛 +3 位作者 谢婷婷 燕晓霞 张俊芳 韩兵社 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期4467-4474,共8页

赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(lysine demethylase 4A,kdm4A)编码的蛋白具有去甲基化酶活性,并且在基因表达调控中起重要作用。该基因在斑马鱼中有两种类型kdm4aa和kdm4ab。本实验室前期对18℃低温胁迫下斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤... 赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(lysine demethylase 4A,kdm4A)编码的蛋白具有去甲基化酶活性,并且在基因表达调控中起重要作用。该基因在斑马鱼中有两种类型kdm4aa和kdm4ab。本实验室前期对18℃低温胁迫下斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryos fibroblast like cell line,ZF4)的转录组数据分析发现kdm4aa表达量显著降低,但是该基因在鱼类低温胁迫下的作用仍不清楚。为了研究这两种基因在鱼类低温胁迫下的功能,本研究用EcoRⅠ和AgeⅠ酶切构建了pLKO.1-kdm4aa-shRNA、pLKO.1-kdm4ab-shRNA和pLKO.1-negative control(nc)三种重组质粒,并分别与慢病毒包装质粒pCMV-DR8.9.1、pCMV-VSVG共同转染至293T细胞中,经293T细胞包装的病毒,感染斑马鱼ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中kdm4aa和kdm4ab均成功被敲降。随后将细胞于28℃培养(Control)或经18℃低温处理1 d,使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内自噬相关基因beclin1和LC3的表达情况。结果显示:在18℃条件下,敲降kdm4aa的细胞与nc组细胞相比存活率显著上升(p<0.05),而敲降kdm4ab的细胞存活率与nc组相比无明显变化,证明敲降kdm4aa在低温胁迫下保护细胞。进一步的研究发现,敲降kdm4aa的细胞内自噬相关基因beclin1及LC3的表达量均显著上调,而敲降kdm4ab的细胞变化不显著,提示敲降kdm4aa在低温胁迫下对斑马鱼细胞的保护作用可能是通过上调自噬水平引起的。该研究为后期斑马鱼低温胁迫分子机制的研究提供新的思路。 展开更多

关键词 kdm4aa 和kdm4ab 存活率 zf4 细胞 低温胁迫 自噬

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PGC-1α敲降对斑马鱼细胞冷应激过程的影响 被引量：3

15

作者 胡成枫 王晓煜 陈良标 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期4422-4429,共8页

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)辅助激活因子1α(PPARγcoactivator-1α,PGC-1α)作为一个重要的转录激活因子,参与多种生理活动的调节。本研究探究了PGC-1α在斑马鱼(Danio rerio... 过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)辅助激活因子1α(PPARγcoactivator-1α,PGC-1α)作为一个重要的转录激活因子,参与多种生理活动的调节。本研究探究了PGC-1α在斑马鱼(Danio rerio)ZF4细胞(胚胎发育3 d成纤维样细胞)冷应激过程中所起的作用。通过慢病毒质粒转染干扰PGC-1α基因的表达,并用嘌呤霉素筛选得到稳转细胞系,给与其18℃7 d和10℃7 d的低温刺激后使用CM-H2DCFDA探针染色,通过流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;JC-1探针染色,流式细胞仪检测低温处理后PGC-1α敲降的细胞线粒体膜电位的变化。研究表明,在低温刺激下,PGC-1α基因未敲降的ZF4细胞内ROS含量升高,线粒体膜电位下降;而在PGC-1α基因敲降的ZF4细胞内,ROS含量在前者的水平上进一步升高,线粒体膜电位的下降也加剧,故PGC-1α在ZF4细胞冷应激过程中对细胞起到保护作用,能维持细胞内ROS含量和线粒体膜电位水平。本研究对PGC-1α基因在斑马鱼ZF4细胞冷应激过程中所起的功能进行初步探究,为鱼类在低温下的适应性研究提供依据。 展开更多

关键词 PGC-1Α zf4 细胞 低温刺激 ROS 线粒体膜电位

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低温驯化下斑马鱼LINE1的表达检测

16

作者 陶筱帆 谢婷婷 +4 位作者 李小霞 罗军涛 白雅静 韩兵社 张俊芳 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2020年第3期88-93,共6页

长散布核元件-1(Long spread nuclear element-1,LINE1)是跳跃基因。前期比较基因组研究发现,南极鱼经历漫长的低温适应进化后,与南极圈外的同亚目鱼类相比较,在基因水平上LINE1的扩增效率高达8~300倍,但LINE1的扩增与鱼类抵御寒冷之间... 长散布核元件-1(Long spread nuclear element-1,LINE1)是跳跃基因。前期比较基因组研究发现,南极鱼经历漫长的低温适应进化后,与南极圈外的同亚目鱼类相比较,在基因水平上LINE1的扩增效率高达8~300倍,但LINE1的扩增与鱼类抵御寒冷之间的关系尚未明了。本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行了不同时间梯度的低温处理(18℃、5 d和18℃、30 d),同时对斑马鱼成鱼也进行了不同时间的低温处理(10℃,3 h、6 h、1 d、3 d、5 d)。采用RT-qPCR检测了LINE1的mRNA水平,并克隆了斑马鱼LINE1基因启动子区,利用Luciferase双荧光报告系统,在ZF4细胞中验证LINE15’UTR在低温压力下的生物活性。结果显示,短时间低温处理下,ZF4细胞中LINE1 mRNA水平有所降低,而在长时间低温处理中,LINE1的mRNA水平显著升高。在成鱼中,短时间低温处理下,LINE1 mRNA水平降低;长期低温处理下,LINE1 mRNA水平显著升高。在ZF4细胞中发现,LINE15’UTR具有生物活性。在低温处理(18℃,3 d)下,报告基因信号减弱,间接表明LINE1启动子活性减弱。研究结果表明,低温压力会影响LINE1在鱼类中的表达。本研究为进一步探究LINE1在鱼类适应低温环境中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 LINE1 低温 斑马鱼 zf4细胞 启动子

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GIS接地刀闸“假分”隐患分析及判别方法

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作者 苏虹明 朱瑞超 +1 位作者 饶志 邢世鹏 《电工技术》 2024年第12期84-86,共3页

在近2年的变电站设备运维中,某变电站出现2起ZF4-126型GIS设备快速接地刀闸“假分”的重大隐患,即在地刀机构和外传动部件分闸到位的情况下,内部导体仍处于合闸位置,该类“假分”隐患在日常操作和运维过程中基本无法发现。从导电杆异常... 在近2年的变电站设备运维中,某变电站出现2起ZF4-126型GIS设备快速接地刀闸“假分”的重大隐患,即在地刀机构和外传动部件分闸到位的情况下,内部导体仍处于合闸位置,该类“假分”隐患在日常操作和运维过程中基本无法发现。从导电杆异常受力、设计缺陷、传动形式三方面分析地刀“假分”隐患产生的原因,并提出了X光检测、绝缘电阻测试、接地电流测量方法用于日常操作中判别ZF4-126型地刀是否存在“假分”现象。 展开更多

关键词 zf4-126 变电运行 接地刀闸 假分 判别方法

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低温压力下水通道蛋白1b(aqp1b)基因的表达及表观调控

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作者 时应娣 李晓霞 +2 位作者 罗军涛 韩兵社 张俊芳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期595-602,共8页

水通道蛋白是(aquaporins,AQPs)介导水分子被动跨膜转运的内在膜蛋白。本研究发现在低温胁迫下斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4)中aqp1b基因相对表达水平显著升高,为研究低温胁迫下斑马鱼水通道蛋白(aqp1b)基因的表达调控机制,采用染色质免疫... 水通道蛋白是(aquaporins,AQPs)介导水分子被动跨膜转运的内在膜蛋白。本研究发现在低温胁迫下斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4)中aqp1b基因相对表达水平显著升高,为研究低温胁迫下斑马鱼水通道蛋白(aqp1b)基因的表达调控机制,采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量PCR(Ch IP-q PCR)法和甲基化DNA免疫沉淀-实时荧光定量PCR(Me DIP-q PCR)法,研究低温压力下ZF4细胞中aqp1b基因启动子区域组蛋白修饰和DNA甲基化水平的变化。Ch IP-q PCR分析表明:低温处理5 d后aqp1b基因启动子区域H3K4me3(激活性组蛋白修饰标志)修饰水平比对照组显著提高3.1倍(p<0.05);而H3K27me3(抑制性组蛋白修饰标志)修饰水平比对照组显著降低2.1倍(p<0.01)。Me DIP-q PCR分析表明:低温处理组aqp1b基因启动子区域甲基化水平比对照组显著下调7.3倍(p<0.01)。研究表明,低温压力下ZF4细胞中aqp1b基因的表达受到了表观遗传机制调控以适应低温压力。 展开更多

关键词 斑马鱼胚胎成纤维细胞 低温胁迫 水通道蛋白1b 组蛋白修饰 DNA甲基化

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