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巴西固氮螺菌Yu62的EGFP标记及其在小麦体内的定殖研究 被引量:6
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作者 刘华伟 王庆贺 +3 位作者 张宏 王蕊 肖红利 郭蔼光 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2367-2372,共6页
以质粒pEGFP-C1为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因全长序列,将其与原核表达载体pVK-100连接,构建成重组载体pVK-EGFP。利用电转化法将重组载体导入巴西固氮螺菌Yu62中,得到EGFP标记菌株。用EGFP标记菌接种小麦... 以质粒pEGFP-C1为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因全长序列,将其与原核表达载体pVK-100连接,构建成重组载体pVK-EGFP。利用电转化法将重组载体导入巴西固氮螺菌Yu62中,得到EGFP标记菌株。用EGFP标记菌接种小麦‘小偃107’种子,室内限菌条件下培养10 d后,用荧光显微镜观测标记菌在小麦体内的定殖规律并观察接菌植株的田间生长状况。结果显示,巴西固氮螺菌Yu62能定殖于小麦根毛区、茎组织的细胞间隙等部位,而且接菌小麦‘小偃107’植株在根系发育、株高、分蘖数等方面比对照有较明显的优势。研究表明,巴西固氮螺菌Yu62能够定殖于小麦根茎内,并具有促进植物生长的作用。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 巴西固氮螺菌yu62 小麦 定殖
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巴西固氮螺菌Yu62 nifA基因克隆、测序及功能分析 被引量:5
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作者 王娟 陈三凤 +1 位作者 马旅雁 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期655-661,共7页
用TD PCR法克隆了巴西固氮螺菌 (Azospirillunbrasilense)Yu6 2的nifA基因。序列分析表明它与巴西固氮螺菌Sp7的nifA序列高度同源 (96 5 % ) ,其编码的产物NifA蛋白与Sp7菌株NifA的氨基酸序列同源性为 97 6 %。该基因可以完全互补巴西... 用TD PCR法克隆了巴西固氮螺菌 (Azospirillunbrasilense)Yu6 2的nifA基因。序列分析表明它与巴西固氮螺菌Sp7的nifA序列高度同源 (96 5 % ) ,其编码的产物NifA蛋白与Sp7菌株NifA的氨基酸序列同源性为 97 6 %。该基因可以完全互补巴西固氮螺菌Sp7nifA- 突变株的Nif- 表型。研究了NH4+ 和O2 对Yu6 2nifA基因的表达及NifA活性的影响。结果表明 :nifA基因在Yu6 2菌株中是部分组成型表达的 ,氨和氧不能完全阻遏其表达 ,在 5mmol LNH4 Cl与微氧 (0 5 %O2 )条件下表达最高 ;NifA蛋白在 0 4%~ 0 5 %O2 时活性最高 ,氧分压降低和提高都使NifA活性下降 ,1mmol LNH4 Cl足以抑制NifA的活性。 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌yu62 nifA基因克隆 测序
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Colonization Pattern of Azospirillum brasilense Yu62 on Maize Roots 被引量:7
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作者 刘元 陈三凤 李季伦 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第6期748-752,共5页
Plasmid pVK1001 which carried the gfp gene of GFPmut2, a mutant of GFP, was introduced into Azospirillum brasilense Yu62 by electroporation. Maize seedlings were inoculated with the GFP-labelled baeteria and grown gno... Plasmid pVK1001 which carried the gfp gene of GFPmut2, a mutant of GFP, was introduced into Azospirillum brasilense Yu62 by electroporation. Maize seedlings were inoculated with the GFP-labelled baeteria and grown gnotobiotically in flask with semi-solid agar medium. Observations were performed with confocal laser scanning microscopy (CLSM) and electron microscopy, respectively, at 8 d and 12 d after inoculation. Confocal laser scanning microscopy showed that A. brasilense Yu62 could penetrate into the cortex tissue, colonizing in the intercellular spaces of the parenchyma cells of the cortex tissue. Transmission and scanning electron microscopy (TEM) showed that the majority of the bacteria colonized on the root surface and only a minority of them resided in the root interior. 展开更多
关键词 green fluorescent protein (GFP) Azospirillum brasilense yu62 COLONIZATION confocal laser scanning microscopy ( CLSM) transmission electron microscopy (TEM) scanning electron microscopy (SEM)
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巴西固氮螺菌Yu62 draTG基因及其下游区域的定位诱变分析 被引量:5
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作者 马旅雁 吴粤 +2 位作者 王娟 赵银锁 李季伦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期281-287,共7页
用卡那霉素盒(Kmrcasete)插入法,对巴西固氮螺菌(Azospirilumbrasilense)Yu62的draTG基因及其下游区域进行了诱变,并获得相应的突变株。研究表明:draT变突株的固氮酶活性不再受铵... 用卡那霉素盒(Kmrcasete)插入法,对巴西固氮螺菌(Azospirilumbrasilense)Yu62的draTG基因及其下游区域进行了诱变,并获得相应的突变株。研究表明:draT变突株的固氮酶活性不再受铵抑制,而draG突变株在有铵时则丧失固氮酶活性,但当铵耗尽后却不能像野生型菌株那样恢复活性。draTG下游区域突变株YZ4(突变位点距draG约2kb)在无氮及限铵条件下,其固氮酶活性比野生型菌株的高,但其nifHlacZ转录融合子的表达并不受影响。 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 draTG 突变株 定位诱变
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巴西固氮螺菌Yu62 glnB基因的克隆及其功能分析
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作者 李周华 陈三凤 李季伦 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期964-970,共7页
通过原位杂交从巴西固氮螺菌Yu62的基因文库中 ,筛选到glnB基因的阳性克隆 ,将3 7kb/EcoRI+PstI的阳性克隆亚克隆到pUC1 9中 ,进行了全序列分析 ,其在GenBank中的登记号是AF32 3960。DNA序列分析表明该阳性克隆含有完整的glnB基因 ,gln... 通过原位杂交从巴西固氮螺菌Yu62的基因文库中 ,筛选到glnB基因的阳性克隆 ,将3 7kb/EcoRI+PstI的阳性克隆亚克隆到pUC1 9中 ,进行了全序列分析 ,其在GenBank中的登记号是AF32 3960。DNA序列分析表明该阳性克隆含有完整的glnB基因 ,glnB基因下游是编码谷氨酰胺合成酶 (GS)的glnA基因 ,glnB基因上游是一个编码未知蛋白的ORF。glnB基因编码区长 336bp,编码 1 1 2个氨基酸 ,与肺炎克氏杆菌、大豆慢生根瘤菌、豌豆根瘤菌及大肠杆菌在氨基酸顺序的同源性分别高达 71 %、77%、79%和 69%。将卡那霉素抗性片段 (Km -cas sette)插入glnB基因的BglII位点 ,通过三亲杂交法将其引入到巴西固氮螺菌Yu62中 ,通过同源重组 ,获得GlnB- 突变株 (glnB ::Km)。为了进一步分析glnB基因的功能 ,将glnB基因的编码区 ( 339bp)构建在pVK1 0 0中 ,置于Km启动子下组成型表达 ,形成重组质粒pVK -II。将重组质粒pVK -II转入到GlnB- 突变株 ,构建成互补株C -glnB(glnB ::Km/glnB)。对GlnB-突变株和互补株的固氮酶活性和生长性能的测定表明 ,GlnB- 突变体无固氮酶活性 ,即表型为Nif- ;而互补株像野生型菌株一样具有固氮酶活性。突变株、互补株及野生型在菌落生长速度上基本相同。将含有glnB基因的重组质粒pVK -II分别转移到野生型Yu62? 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌yu62 glnB基因 PⅡ蛋白 GlnB^-突变标 基因克隆 功能
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巴西固氮螺菌Yu62 glnB基因和glnZ基因的克隆和序列分析 被引量:5
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作者 陈三凤 杨红 +1 位作者 王娟 李季伦 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期9-13,共5页
gln B基因编码的 PII蛋白在巴西固氮螺菌的固氮过程中起着非常重要的调控作用 ,而 gln Z是与gln B高度同源的基因 ,其产物 Pz可能也在固氮调控中起作用。本研究用 PCR法克隆了巴西固氮螺菌 Yu6 2gln B基因和 gln Z基因。 DNA序列分析表... gln B基因编码的 PII蛋白在巴西固氮螺菌的固氮过程中起着非常重要的调控作用 ,而 gln Z是与gln B高度同源的基因 ,其产物 Pz可能也在固氮调控中起作用。本研究用 PCR法克隆了巴西固氮螺菌 Yu6 2gln B基因和 gln Z基因。 DNA序列分析表明 gln B和 gln Z这 2个基因的编码区的长度都为 336 bp,编码 112个氨基酸。将巴西固氮螺菌 Yu6 2菌株与标准菌株 Sp7的 gln B基因和 gln Z基因分别进行比较 ,结果表明这 2个菌株的 gln B基因在编码区的核苷酸顺序完全相同 ,而 gln Z基因在长 336 bp的编码区内有 4个碱基发生变化 ,但改变后都是同义密码子 ,即编码的氨基酸并未改变。 gln B基因和 gln Z基因在核苷酸顺序上的同源性高达 73.2 % ,氨基酸顺序的同源性达 6 6 .7% 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 glnB基因 glnZ基因 序列分析 克隆
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巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Yu62的质粒及nifHDK基因的定位 被引量:1
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作者 何路红 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期255-260,共6页
对从北京郊区玉米根际分离到的巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Yu62的质粒进行了分离和检测,发现检测方法不同,得到的质粒数目也不同,用 Kado 法只发现一个大质粒,以 pABm 1表示,其分子量约为120 Md;而用改良的 Eckhardt 方法,... 对从北京郊区玉米根际分离到的巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Yu62的质粒进行了分离和检测,发现检测方法不同,得到的质粒数目也不同,用 Kado 法只发现一个大质粒,以 pABm 1表示,其分子量约为120 Md;而用改良的 Eckhardt 方法,则发现有5个大质粒,分别以 pABm 1、pABm 2、pABm 3、pABm 4和 pABm 5表示,它们的分子量分别约为120 Md、330 Md、360 Md、480 Md 和900 Md,都是巨型质粒,用多种方法检测均未发现小质粒。应用生物素标记的核酸杂交技术制备了 Biotin-nifHDK 探针,并对 Yu62菌株的质粒及染色体片段进行了 Southern 印迹杂交和斑点杂交,杂交结果表明 nifHDK 基因定位于染色体上。 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 固氮菌 nifHDK基因
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巴西固氮螺菌中P_Ⅱ和P_Z在固氮调节中的不同作用 被引量:2
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作者 陈三凤 管乐 +3 位作者 应娇妍 李周华 王娟 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期523-529,共7页
在巴西固氮螺菌 (Azospirillumbrasilense)中 ,glnB和glnZ是两个高度同源基因 ,分别位于 3 7kb EcoRI+PstI和 3 7kb SalI的两个不同的染色体片段上。用卡那霉素盒 (Kmr cas sette)插入法 ,对glnB和glnZ分别进行定位诱变 ,并获得相应的... 在巴西固氮螺菌 (Azospirillumbrasilense)中 ,glnB和glnZ是两个高度同源基因 ,分别位于 3 7kb EcoRI+PstI和 3 7kb SalI的两个不同的染色体片段上。用卡那霉素盒 (Kmr cas sette)插入法 ,对glnB和glnZ分别进行定位诱变 ,并获得相应的突变株 ,即glnB- 和glnZ- 。研究表明 ,glnB- 突变株丧失固氮酶活性 ,表现为Nif- ,而glnZ- 象野生型菌株一样具有固氮酶活性。为了进一步研究这两个基因的功能 ,将glnB和glnZ分别构建在pVK1 0 0载体上形成重组质粒pVK -Ⅱ和pVK -Z ,对glnB- 和glnZ- 突变株进行互补实验 ,进一步证明了glnB与固氮酶活有直接相关性 ,而glnZ无此作用。同时 ,通过三亲接合法将pVK -Ⅱ和pVK -Z分别转移到巴西固氮螺菌野生型Yu62和具有一定抗铵能力的draT- 突变株中 ,使glnB和glnZ的拷贝数增加 ,进一步比较它们的固氮酶活性。结果表明多拷贝的glnB基因 ,能显著提高固氮酶活性 ,而多拷贝的glnZ对固氮酶活性无影响。同时 ,将pVK Ⅱ和pVK -Z分别转移到nifA- 突变株中 ,结果表明glnB和glnZ均不能恢复nifA- 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 glnB基因 glnZ基因 突变株 固氮酶活性
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