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Cameleon测钙系统在H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用 被引量：2
1
作者 张四洋 于淼 +2 位作者 高建 邱雪杉 崔泽实 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1453-1458,共6页
观察Cameleon测钙系统在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),并探讨[Ca2+]i与细胞凋亡和Pyk2磷酸化的关系。采用Ca2+指示器Cameleon YC3.6转染A549细胞,24 h后用50 mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚集... 观察Cameleon测钙系统在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),并探讨[Ca2+]i与细胞凋亡和Pyk2磷酸化的关系。采用Ca2+指示器Cameleon YC3.6转染A549细胞,24 h后用50 mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚集显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Western blot检测H2O2刺激的细胞中Pyk2-tyr402磷酸化水平。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果发现,在H2O2作用下,A549细胞胞浆内游离[Ca2+]i迅速升高,同时Pyk2-tyr402磷酸化水平显著升高(P<0.05),凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。因此,H2O2促进A549细胞内Ca2+释放,可能通过活化Pyk2诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 H2O2 CA2+ CAMELEON yc3.6 PYK2 细胞凋亡
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Ca^(2+)荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3测定H_2O_2刺激的A549细胞中Ca^(2+)浓度变化 被引量：2
2
作者 张四洋 周末 +3 位作者 高建 于淼 邱雪杉 崔泽实 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第7期1497-1501,共5页
目的:本研究旨在观察Ca2+荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3在H2O2刺激的A549细胞中的应用,实时测定细胞质Ca2+浓度([Ca2+]i),并比较两种Ca2+探针在荧光曲线及[Ca2+]i测定值等方面的差异。方法:采用Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC... 目的:本研究旨在观察Ca2+荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3在H2O2刺激的A549细胞中的应用,实时测定细胞质Ca2+浓度([Ca2+]i),并比较两种Ca2+探针在荧光曲线及[Ca2+]i测定值等方面的差异。方法:采用Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6转染A549细胞,24h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Ca2+荧光染料探针fluo-3负载细胞,1h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果:采用Cameleon探针转染的细胞中,反映[Ca2+]i变化的R值曲线迅速升高后逐渐降至刺激前水平,通过公式计算发现[Ca2+]i变化范围是33.1-596.1 nmol/L。采用fluo-3探针负载的细胞中,反映[Ca2+]i变化的荧光强度F值曲线逐渐升高至稳定,通过公式计算得到[Ca2+]i变化范围是131.8-695.6 nmol/L。同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。结论:Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6和荧光染料探针fluo-3均检测到H2O2诱导的细胞内[Ca2+]i变化,Cameleon YC3.6可能更灵敏地反映快速变化的钙信号。 展开更多
关键词 CAMELEON YC3 6 fluo-3 H2O2 CA2+ 细胞凋亡
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