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XAC广播电视自动监测系统 被引量：1
1
作者 叶德龙 王葵阳 《广播与电视技术》 北大核心 1998年第4期77-82,共6页
本文首先介绍ＸＡＣ广播电视自动监测系统的功能，然后进一步说明了系统实施的基本原理及系统结构。
关键词 广播电视信号 自动监测 系统功能 系统结构 xac
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柑桔溃疡病菌重组单链抗体的高效表达及活性检测 被引量：3
2
作者 陈刚 殷幼平 +2 位作者 袁青 夏玉先 王中康 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1066-1069,共4页
运用PCR方法扩增利用核糖体展示技术筛选的抗柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,XAC)的单链抗体(ScFv95)基因片段,将单链抗体基因重组到原核表达载体pET30a(+)中,构建单链抗体高效表达载体pET30a(+)-XAC-ScFv。再将pET30a(+... 运用PCR方法扩增利用核糖体展示技术筛选的抗柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,XAC)的单链抗体(ScFv95)基因片段,将单链抗体基因重组到原核表达载体pET30a(+)中,构建单链抗体高效表达载体pET30a(+)-XAC-ScFv。再将pET30a(+)-XAC-ScFv质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,并对表达产物进行纯化、复性及活性检测。获得了抗XAC单链抗体的高效表达蛋白,以包涵体形式存在的表达蛋白大小约32kDa。包涵体蛋白经过变性、纯化和复性后,初步获得有功能的单链抗体。同时用Biacore分析XAC-ScFv-95与XAC LPS作用,结果表明复性后的XAC-ScFv-95具有较高的亲和力,从而为柑桔溃疡病菌XAC的免疫诊断和防治研究提供了新的工具和途径。 展开更多
关键词 xac 表达 包涵体 单链抗体 复性 Biacore分析
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柑橘溃疡病生防内生细菌的筛选、鉴定及其活性代谢产物的稳定性 被引量：14
3
作者 刘冰 宋水林 +2 位作者 刘晓丽 杨明霞 龚玲玲 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2152-2158,共7页
通过皿内检测和离体叶片法筛选到一株柑橘溃疡病生防内生细菌GN232,对其进行了分类鉴定,并对其抗细菌活性代谢产物的特性进行了研究。形态特征、培养特性、生理生化特性和16S rDNA序列分析表明,该内生细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subti... 通过皿内检测和离体叶片法筛选到一株柑橘溃疡病生防内生细菌GN232,对其进行了分类鉴定,并对其抗细菌活性代谢产物的特性进行了研究。形态特征、培养特性、生理生化特性和16S rDNA序列分析表明,该内生细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.subtilis);发酵滤液活性测定结果表明,菌株GN232抗细菌活性代谢产物在中性环境下稳定,对温度不敏感,紫外线照射25 min后发酵滤液抑菌活性降低,胰蛋白酶对发酵滤液活性无明显影响;此外,该菌株发酵上清液和农用链霉素混用后对溃疡病菌的抑制效果较单独发酵滤液、农用链霉素的抑菌效果分别提高26.8%和20.7%。 展开更多
关键词 内生细菌 柑橘溃疡病菌 活性代谢产物
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柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体基因的构建及表达产物的生物学活性分析 被引量：2
4
作者 王中康 李泮志 +3 位作者 袁青 于红 李蒙 殷幼平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期3123-3130,共8页
【目的】构建鼠源抗柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体(dsFv)片段基因,原核表达并将其复性为具有免疫活性的dsFv抗体。【方法】采用PCR定点突变的方法构建dsFv重链(VH)及轻链可变区(VL)基因,分别将其连接入表达载体中,于E.coliBL21(DE3)中... 【目的】构建鼠源抗柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体(dsFv)片段基因,原核表达并将其复性为具有免疫活性的dsFv抗体。【方法】采用PCR定点突变的方法构建dsFv重链(VH)及轻链可变区(VL)基因,分别将其连接入表达载体中,于E.coliBL21(DE3)中诱导表达,表达产物溶解后稀释入复性缓冲液中使其重折叠为dsFv抗体并纯化。SDS-PAGE及Western-blot分析表达及复性产物,BIAcore检测dsFv与Xac-LPS的亲和力,ELISA验证dsFv的特异性及稳定性。【结果】测序结果表明在VH的44位和VL的100位成功引入了半胱氨酸突变位点,实现了高效的原核表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE分析显示VH和VL的大小为23kD,并将其成功复性,复性后大小为46kD。BIAcore分析表明dsFv对Xac-LPS保持了很高的亲和力,亲和常数(KD)达到3.40×10-10M。ELISA证明dsFv具有较高的抗原特异性并且热稳定性较scFv提高近20℃。【结论】成功表达并复性了dsFv抗体,为柑橘溃疡病菌的免疫诊断提供了高效优质的重组抗体。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 二硫键稳定Fv抗体 包涵体 复性 BIAcore分析
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一种核糖体展示单链抗体文库的构建与鉴定
5
作者 年四季 袁青 +1 位作者 殷幼平 王中康 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期51-55,共5页
用柑桔溃疡病致病菌Xanthomonas axonopodis pv.citri(Xac)全菌免疫小鼠,提取小鼠脾细胞mRNA,RT-PCR扩增小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),采用linker(Gly4Ser)3连接VH和VL,构建用于核糖体展示方法筛选阳性单链抗体(scFvs)的文... 用柑桔溃疡病致病菌Xanthomonas axonopodis pv.citri(Xac)全菌免疫小鼠,提取小鼠脾细胞mRNA,RT-PCR扩增小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),采用linker(Gly4Ser)3连接VH和VL,构建用于核糖体展示方法筛选阳性单链抗体(scFvs)的文库。通过将scFv文库DNA转化大肠杆菌JM109,随机挑取克隆子测序以分析单链抗体文库的多样性。结果显示,用柑桔溃疡病菌免疫后的小鼠抗血清效价为2500倍左右,扩增的VH大小为350bp左右,VL的大小为650bp左右,linker连接后的单链抗体文库DNA大小为1200bp左右。测序结果显示,单链抗体文库多样性好。以Xac为靶,筛选到了抗Xac的特异性抗体,说明该抗体库可用于柑桔溃疡病菌单链抗体的筛选。 展开更多
关键词 单链抗体 抗体文库 柑桔溃疡病菌 核糖体展示
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冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌生长特性的影响 被引量：6
6
作者 葛红娟 龙桂友 +3 位作者 戴素明 李大志 李娜 邓子牛 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1383-1391,共9页
【目的】采用新的接种方式,比较冰糖橙与枸橼C-05叶片对溃疡病菌生长特性的的影响,探讨冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌敏感度的差异性。【方法】将完全展开、颜色淡绿的冰糖橙与枸橼C-05叶片进行75%酒精和1%Na Cl O消毒并切割后,分别与溃... 【目的】采用新的接种方式,比较冰糖橙与枸橼C-05叶片对溃疡病菌生长特性的的影响,探讨冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌敏感度的差异性。【方法】将完全展开、颜色淡绿的冰糖橙与枸橼C-05叶片进行75%酒精和1%Na Cl O消毒并切割后,分别与溃疡病菌在离体条件下共培养,观察叶片在MT培养基(对照)、MT中间嵌入NYGA培养基(MA)中对溃疡病菌生长的影响;分别提取冰糖橙和枸橼C-05叶片的粗提液,并以25%、50%和75%的比例添加至MT培养基中,观察冰糖橙和枸橼C-05叶片提取液分别对溃疡病菌生长的影响;同时以不同比例的叶片粗提液添加至NYGB培养基中,观察冰糖橙与枸橼C-05叶片提取液分别对溃疡病菌胞外多糖含量的影响。【结果】Xac在培养冰糖橙叶片的MT培养基中生长迅速,接种1周后即出现Xac的增殖现象,菌斑直径均值比对照大0.5 mm;接种2周后菌斑直径均值为5.27 mm,几乎是对照的3倍;而2—3周为Xac的急速生长期,菌斑直径由5.27 mm快速增长至13.41 mm,是对照菌斑直径的5倍多;3周后菌斑生长缓慢趋于平稳;各个时间点的菌斑直径与对照相比均达到极显著差异水平。在培养冰糖橙叶片的MA培养基中,Xac生长1 d后菌斑直径均值为4.58 mm,小于对照的6.19 mm;接种3 d后Xac继续生长,菌斑直径几乎与对照组相同,差异不显著;但是在接种5 d后,菌斑直径快速增长至21.31 mm,大于对照组的16.33 mm,3个菌斑长势连在一起,两者差异达到极显著水平。冰糖橙的叶片提取液对溃疡病菌的生长及胞外多糖含量均有促进作用,随着其添加浓度的增加,促进效果越明显,与对照相比均可达到极显著水平。Xac在培养枸橼C-05叶片的MT培养基中生长较为缓慢,在接种1周后菌斑直径与对照相比差异不显著;2周后菌斑直径约为对照的一半;3周时,菌斑直径均值为2.06 mm,小于对照的2.62mm;2周和3周时的菌斑直径与对照相比均达到显著水平。在培养枸橼C-05叶片的MA培养基中,Xac生长较为缓慢,菌斑直径均小于对照组,在1、3和5 d时与对照相比均达到极显著水平。枸橼C-05的叶片提取液对溃疡病菌生长和胞外多糖含量的影响不大,与对照相比均差异不显著。【结论】冰糖橙叶片中存在可促进溃疡病菌的生长、增加胞外多糖含量的物质,这种物质可能突破了其自身免疫系统,导致其对Xac高度敏感而极易感病。枸橼C-05叶片与溃疡病菌共培养时,分泌抑制溃疡病菌生长的物质,使得枸橼C-05对Xac具有较低敏感度而表现抗性。 展开更多
关键词 冰糖橙 枸橼C-05 溃疡病菌 叶片提取液 胞外多糖
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西飞集团民品产业化发展战略研究 被引量：1
7
作者 康凯 《西安航空技术高等专科学校学报》 2009年第5期6-8,共3页
针对西飞集团公司以军品为主,民品发展缓慢,主开发能力薄弱,产品滞销等现状,从西飞公司实际出发,阐述了西飞集团民品产业存在的问题,并提出转变机制,加强科技研发,建立激励机制,走产业化道路的发展方向和一系列保证措施,制定出切实有效... 针对西飞集团公司以军品为主,民品发展缓慢,主开发能力薄弱,产品滞销等现状,从西飞公司实际出发,阐述了西飞集团民品产业存在的问题,并提出转变机制,加强科技研发,建立激励机制,走产业化道路的发展方向和一系列保证措施,制定出切实有效的战略发展目标。 展开更多
关键词 西飞集团 民品产业 “以民养军” 市场经济体制
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