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嗜热细菌木糖异构酶基因xylA在酿酒酵母中的高效表达 被引量:33
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作者 鲍晓明 高东 王祖农 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期49-54,共6页
采用PCR技术克隆得到嗜热细菌Clostridiumthermohydrosulfuricum木糖异构酶(xyloseisomeraseXI)基因xylA,将该基因连接于酵母表达载体pMA91的磷酸甘油激酶(PGK)... 采用PCR技术克隆得到嗜热细菌Clostridiumthermohydrosulfuricum木糖异构酶(xyloseisomeraseXI)基因xylA,将该基因连接于酵母表达载体pMA91的磷酸甘油激酶(PGK)启动子下,得到重组质粒pBX1。通过LiAc完整细胞转化法将重组质粒转移至酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)H158受体菌中,得到重组酵母转化子H612,酶活测定结果表明,成功地在酿酒酵母中得到木糖异构酶的活性表达。SDSPAGE电泳结果显示出明显的特异性表达产物带,单体分子量为43kD。由酿酒酵母重组子H612产生的木糖异构酶最高酶活条件与其在自然状态下的一致,均为85℃,pH70,在这一条件下酶的比活力为10U/mg蛋白,而在接近酵母最适生长温度的30℃和40℃时,其相对酶活分别下降37%和11%。研究结果显示在酿酒酵母中得到木糖异构酶的活性表达,为进一步在酿酒酵母菌中建立新的木糖代谢途径打下了基础。 展开更多
关键词 木糖代谢 木糖异构酶 xyla 酿酒酵母
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Fermentation of xylose to produce ethanol by recombinant Saccharomyces cerevisiae strain containing XYLA and XKS1 被引量:4
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作者 LIUXiaolin JIANGNing HEPeng LUDajun SHENAn 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2005年第7期652-657,共6页
Fermentation of the pentose sugar xylose to produce ethanol using lignocellulosic biomass would make bioethanol production economically more competitive. Sac- charomyce cerevisise, an efficient ethanol producer, canno... Fermentation of the pentose sugar xylose to produce ethanol using lignocellulosic biomass would make bioethanol production economically more competitive. Sac- charomyce cerevisise, an efficient ethanol producer, cannot utilize xylose because it lacks the ability to convert xylose to its isomer xylulose. In this study, XYLA gene encoding xylose isomerase (XI) from Thermoanaerobacter tengcongensis MB4T and XKS1 gene encoding xylulokinase (XK) from Pichia stipitis were cloned and functionally coexpressed in Saccharomyces cerevisiae EF-326 to construct a recombinant xylose-utilizing strain. The resulting strain S. cerevisiae EF 1014 not only grew on xylose as sole carbon source, but also produced ethanol under anaerobic conditions. Fermentations performed with different xylose concentrations at different temperatures demonstrated that the highest ethanol produc- tivity was 0.11 g/g xylose when xylose concentration was pro- vided at 50 g/L. Under this condition, 28.4% of xylose was consumed and 1.54 g/L xylitol was formed. An increasing fermentation temperature from 30℃ to 37℃ did not im- prove ethanol yield. 展开更多
关键词 木糖异构酶 乙醇 重组细胞 xyla基因 编码 木酮糖激酶
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E·coli木糖异构酶基因的克隆及表达条件的优化 被引量:1
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作者 许伟 严明 +2 位作者 李永健 李艳 许琳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2005年第4期45-48,共4页
采用PCR技术以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板扩增得到木糖异构酶基因xylA,连接到载体pET-22b(+),得到重组质粒pET-22b(+)-xylA。将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,重组菌株经IPTG诱导后,通过半胱氨酸-咔唑法测得木糖异构酶活... 采用PCR技术以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板扩增得到木糖异构酶基因xylA,连接到载体pET-22b(+),得到重组质粒pET-22b(+)-xylA。将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,重组菌株经IPTG诱导后,通过半胱氨酸-咔唑法测得木糖异构酶活力。每mL发酵液中重组菌株显示出酶活力约为0.84 U。SDS-PAGE电泳结果显示出明显的5×104(相对分子质量)特异性蛋白质条带。 展开更多
关键词 E.COLI xyla基因 木糖异构酶 克隆 表达
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Thermus thermophilus HB8葡萄糖异构酶在大肠杆菌中表达 被引量:1
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作者 丁莉 许伟 +1 位作者 严明 许琳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2006年第2期42-45,共4页
为了增加高热稳定性的葡萄糖异构酶的得率,采用PCR技术扩增得到Thermus thermophilusHB8葡萄糖异构酶基因xylA,连接到表达载体pET-22b(+)上,获得重组质粒pET-22b(+)-xylA。将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后,通过半... 为了增加高热稳定性的葡萄糖异构酶的得率,采用PCR技术扩增得到Thermus thermophilusHB8葡萄糖异构酶基因xylA,连接到表达载体pET-22b(+)上,获得重组质粒pET-22b(+)-xylA。将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后,通过半胱氨酸-咔唑法测葡萄糖异构酶酶活。重组菌经诱导培养,SDS-PAGE电泳结果显示出明显的分子量约为44 kD特异性蛋白质条带,比酶活约为18.562 U/mg,比野生型菌株提高了2倍。 展开更多
关键词 THERMUS THERMOPHILUS xyla基因 葡萄糖异构酶 克隆 表达
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以木糖异构酶基因作为选择标记的花生遗传转化 被引量:11
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作者 丁霄 隋炯明 +1 位作者 王晶珊 乔利仙 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期444-448,483,共6页
用木糖异构酶基因xylA替换掉pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin-B-phosphotransferase,Hpt),构建了植物表达载体pCAMBIA1301-xylA。再利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-xylA导入花生,转移到添加蔗糖(5g/L)和不同浓度木糖(5,... 用木糖异构酶基因xylA替换掉pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin-B-phosphotransferase,Hpt),构建了植物表达载体pCAMBIA1301-xylA。再利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-xylA导入花生,转移到添加蔗糖(5g/L)和不同浓度木糖(5,10,20,30g/L)的体胚诱导及体胚萌发培养基上培养。对外植体成苗率及转基因阳性率进行统计,结果表明,当木糖浓度为10g/L时,诱导成苗率为15.25%,再生植株生长健壮,且转基因阳性率高达77.27%,最终确定10g/L为最适木糖筛选浓度。该筛选方法利用木糖作为筛选剂,可以避免利用抗生素筛选可能造成的安全隐患,转化效率高,是一种安全、高效的筛选方法。 展开更多
关键词 花生 木糖异构酶基因 农杆菌介导法 遗传转化
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代谢木糖重组谷氨酸棒杆菌的构建
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作者 张恒丽 蔡恒 +2 位作者 汪晨 张凯 周志惠 《生物加工过程》 CAS CSCD 2014年第2期28-32,共5页
为了使谷氨酸棒杆菌较好地利用木糖生产有机酸,将来自Escherichia coli K-12的木糖异构酶基因xylA构建到表达载体pXMJ19中,导入Corynebacterium glutamicum ATCC13032Δldh中,成功表达了该酶基因。结果表明:重组菌株在以木糖为唯一C源... 为了使谷氨酸棒杆菌较好地利用木糖生产有机酸,将来自Escherichia coli K-12的木糖异构酶基因xylA构建到表达载体pXMJ19中,导入Corynebacterium glutamicum ATCC13032Δldh中,成功表达了该酶基因。结果表明:重组菌株在以木糖为唯一C源进行发酵时,木糖的消耗速率为0.54 g/(L·h),木糖异构酶比酶活约为0.54 U/mL;在以木糖和葡萄糖的混合糖为C源进行发酵时,菌株优先利用葡萄糖,在葡萄糖完全消耗后,菌株开始有效利用木糖;以木糖为唯一C源进行两阶段发酵时,琥珀酸的收率可达(0.62±0.003)g/g。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 琥珀酸 木糖异构酶基因 木糖
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