极大螺旋藻藻蓝蛋白基因在巴斯德毕赤酵母X-33中表达的研究 被引量：3

1

作者 于平 岑沛霖 +2 位作者 励建荣 张燕萍 秦松 《科技通报》 北大核心 2004年第1期21-23,27,共4页

通过PCR技术克隆了极大螺旋藻藻蓝蛋白基因,构建了克隆载体和表达载体,并将该基因导入巴斯德毕赤酵母X 33基因组,筛选了能够有效表达藻蓝蛋白基因的毕赤酵母工程菌株PC8,从而为发酵法生产藻蓝蛋白奠定了基础.

关键词 基因工程 甲基营养型毕赤酵母 极大螺旋藻 藻蓝蛋白基因 基因表达 PCR技术 x-33基因

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美国X-33空天飞行器项目回顾与总结 被引量：3

2

作者 牛文 李文杰 叶蕾 《飞航导弹》 北大核心 2014年第7期13-17,共5页

X-33是美国在1996—2001年研制的一种亚轨道可重复使用空天飞行器验证机,主要目的是降低全尺寸可重复使用飞行器的研制和使用风险。尽管X-33最终下马,但其研究过程中不乏成功之处。结合NASA肯尼迪航天中心2011年发表的对X-33空天飞行器... X-33是美国在1996—2001年研制的一种亚轨道可重复使用空天飞行器验证机,主要目的是降低全尺寸可重复使用飞行器的研制和使用风险。尽管X-33最终下马,但其研究过程中不乏成功之处。结合NASA肯尼迪航天中心2011年发表的对X-33空天飞行器项目的总结,全面展示了美、欧等西方国家对空天飞行器的研发现状。 展开更多

关键词 空天飞行 x-33 验证机 美国

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重组人IL-10在毕赤酵母X-33及SMD1168中表达效率的比较 被引量：2

3

作者 陈富超 曹明燕 +2 位作者 罗军敏 封建凯 孙万邦 《合肥医学院学报》 2011年第4期351-353,共3页

目的研究重组人IL-10(rhIL-10)在两株毕赤酵母X-33和SMD1168的表达水平,为rhIL-10的表达选择合适的表达菌株。方法以0.5%甲醇分别诱导毕赤酵母X-33和SMD1168表达rhIL-10,用SDS-PAGE和WesternBlot分析和鉴定rhIL-10,用ELISA法测定培养液r... 目的研究重组人IL-10(rhIL-10)在两株毕赤酵母X-33和SMD1168的表达水平,为rhIL-10的表达选择合适的表达菌株。方法以0.5%甲醇分别诱导毕赤酵母X-33和SMD1168表达rhIL-10,用SDS-PAGE和WesternBlot分析和鉴定rhIL-10,用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量并计算rhIL-10占总蛋白的比例。比较同等培养条件下两株酵母表达rhIL-10和总蛋白的水平。结果 SDS-PAGE和Western Blot均检测到42kD左右的蛋白条带;rhIL-10在X-33中的表达量平均达20.00mg/L,在SMD1168中的表达量平均达1.90mg/L,在两株不同酵母中的表达量有显著性差异(P<0.05);同时段的X-33培养液中总蛋白质含量平均为50.00mg/L,rhIL-10占总蛋白的40.00%;SMD1168培养液中总蛋白质含量平均为48.23mg/L,rhIL-10占总蛋白的4.00%。结论 rhIL-10在不同的毕赤酵母表达效率有差异,X-33较1168更适于rhIL-10的表达。 展开更多

关键词 重组人IL-10 x-33 SMD1168 表达

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毕赤酵母X-33糖基化突变菌株的生理特性 被引量：2

4

作者 许永利 张大成 +2 位作者 朱瑞宇 陈蕴 金坚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期439-442,共4页

目的研究毕赤酵母X-33野生型菌株(wX-33)和X-33α-1,6甘露糖基转移酶(Och1p)突变株(och1 mX-33)的生理特性,为och1mX-33株进一步糖基化的研究奠定基础。方法绘制wX-33和och1 mX-33菌株的生长曲线,进行温度敏感性及刚果红敏感性试验,美... 目的研究毕赤酵母X-33野生型菌株(wX-33)和X-33α-1,6甘露糖基转移酶(Och1p)突变株(och1 mX-33)的生理特性,为och1mX-33株进一步糖基化的研究奠定基础。方法绘制wX-33和och1 mX-33菌株的生长曲线,进行温度敏感性及刚果红敏感性试验,美蓝染色观察其形态变化,并检测细胞的存活率。结果与wX-33株比较,och1 mX-33株生长缓慢,生物量减少;对温度、刚果红敏感性增强;存在细胞壁分裂缺陷;在不适温度下,细胞存活率降低。结论糖基化突变可影响毕赤酵母X-33对温度、刚果红的敏感性,使其细胞壁层甘露糖含量降低,并可使och1 mX-33株的生理特性发生很大变化。 展开更多

关键词 毕赤酵母x-33 och1突变 糖基化 生长表型

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X-33出师未捷身先死 被引量：1

5

作者 赵颖 《太空探索》 2001年第5期34-35,共2页

2001年3月1日,美国航宇局向外界正式宣布了不再继续向X-33和X-34计划拨款的消息。至此,美国于5年前提出的单级入轨可重复使用运载器研制计划最终流产。据称,美国航宇局与洛克希德·马丁公司共同签署的X-33计划合作协议将于3月底到期... 2001年3月1日,美国航宇局向外界正式宣布了不再继续向X-33和X-34计划拨款的消息。至此,美国于5年前提出的单级入轨可重复使用运载器研制计划最终流产。据称,美国航宇局与洛克希德·马丁公司共同签署的X-33计划合作协议将于3月底到期,而X-34计划也已在3月2日结束。 美国航宇局表示。 展开更多

关键词 x-33计划 可重复使用航天器计划 美国 运载器

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BPI_(23)-haFGF融合蛋白在毕赤酵母X-33中的分泌表达及活性鉴定 被引量：1

6

作者 马艳 朱家勇 +2 位作者 金小宝 彭海英 王艳 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第2期379-384,共6页

将BPI23-haFGF融合基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,构建出含BPI23-haFGF融合基因的重组质粒pPICZαA-BPI23-haFGF。通过电击将经SacⅠ酶切线性化的pPICZαA-BPI23-haFGF质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并通过抗性与表型筛选、PCR... 将BPI23-haFGF融合基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,构建出含BPI23-haFGF融合基因的重组质粒pPICZαA-BPI23-haFGF。通过电击将经SacⅠ酶切线性化的pPICZαA-BPI23-haFGF质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并通过抗性与表型筛选、PCR鉴定获得高效的工程菌。收集表达上清进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明,在43KD有与预期大小相符的条带,占上清总蛋白的50%以上。亲和层析纯化后的融合蛋白BPI23-haFGF纯度约90%,体外活性实验结果,纯化产物具有杀死革兰氏阴性菌及促进NIH3T3细胞增殖的双重功能。 展开更多

关键词 BPI23-haFGF融合基因 毕赤酵母x-33 分泌表达 活性鉴定

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毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF 被引量：3

7

作者 张大成 许永利 +2 位作者 辛鑫 朱瑞宇 金坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期622-629,共8页

【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白... 【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除毕赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33(och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。 展开更多

关键词 N-糖基化 毕赤酵母x-33 基因敲除 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)

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美取消X—33和X—34计划 被引量：1

8

《中国航天》 北大核心 2001年第4期24-24,共1页

美国航宇局3月1日宣布不再为X-33和X-34两项运载技术验证计划出资,实际上等于宣判了这两项计划的"死刑".这项决定是在该局决定集中精力在其航天发射计划(SLI)之下发展下一代可复用运载器之后做出的.美国航宇局官员称,他们目... 美国航宇局3月1日宣布不再为X-33和X-34两项运载技术验证计划出资,实际上等于宣判了这两项计划的"死刑".这项决定是在该局决定集中精力在其航天发射计划(SLI)之下发展下一代可复用运载器之后做出的.美国航宇局官员称,他们目前正在同多家公司就SLI合同进行谈判,但X-33和X-34都将得不到SLI计划的资助.该局在3月1日发表的声明中称:"美国航宇局认定,对这两种试验机进行飞行试验所能带来的好处不值得让政府进行所需的高额投资;SLI项目资金应该用来满足更重要的需求." 展开更多

关键词 美国 可复用运载器 x-33 x-34 试验机

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咳嗽变异性哮喘患者血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO的关系研究 被引量：14

9

作者 张翊玲 路苹 +1 位作者 郑梦凝 姚红梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1352-1357,共6页

目的:研究咳嗽变异性哮喘(CVA)患者血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO的关系,进一步研究sPLA2-X对CVA的影响。方法:选择贵州省人民医院呼吸与危重症医学科2018年6月至2019年11月门诊经确诊CVA的患者为研究对象及同期在我院... 目的:研究咳嗽变异性哮喘(CVA)患者血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO的关系,进一步研究sPLA2-X对CVA的影响。方法:选择贵州省人民医院呼吸与危重症医学科2018年6月至2019年11月门诊经确诊CVA的患者为研究对象及同期在我院健康体检中心体检的健康志愿者为对照组,分为CVA治疗前组(41例)和健康对照组23例。CVA治疗前组经规范化治疗3月后成CVA治疗后组(41例)。采用ELISA方法检测咳嗽变异性哮喘(CVA)患者血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33、IL-17、总IgE的含量;采用肺功能仪检测肺功能;呼出气一氧化氮检测仪检测FeNO。结果:与健康对照组相比,CVA治疗前组血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33的表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,CVA经规范治疗后,CVA治疗后组血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33及总IgE显著降低,FeNO明显降低、肺功能改善,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而CVA治疗前组血清中IL-17与健康对照组相比,无显著差异。CVA治疗前组血清中sPLA2-X含量与CysLT、FeNO、iNOS、IL-33呈正相关(r=0.854 7、0.622 9、0.644 9、0.778 9,P<0.001),IL-17与血清中sPLA2-X含量无相关性(r=0.058 5,P=0.127 6)。结论:CVA患者为支气管哮喘特殊类型,其血清中sPLA2-X与CysLT、iNOS、IL-33均显著升高,同时FeNO显著升高。经治疗后血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33显著降低。血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO呈正相关。 展开更多

关键词 分泌型磷脂酶A2-X 咳嗽变异性哮喘 CysLT半胱氨酰白三烯 白介素33 iNOS诱生型一氧化氮合酶

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非受体酪氨酸激酶BMX对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响

10

作者 李媛媛 宫小勇 +2 位作者 代引海 杨文婷 郑鹏生 《甘肃科学学报》 2020年第4期24-28,共5页

为探索非受体酪氨酸激酶BMX(也称Etk)对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响,应用免疫细胞化学和Western blot检测BMX在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33 A、HT-3、CaSki中的表达及定位,构建BMX过表达质粒载体,转染至C-33 A细胞中,筛选稳定过... 为探索非受体酪氨酸激酶BMX(也称Etk)对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响,应用免疫细胞化学和Western blot检测BMX在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33 A、HT-3、CaSki中的表达及定位,构建BMX过表达质粒载体,转染至C-33 A细胞中,筛选稳定过表达的细胞株,利用细胞成球实验检测BMX对C-33 A细胞成球能力的影响。免疫细胞化学染色显示,BMX主要在细胞浆中表达,在细胞核中也有部分表达,在HeLa、SiHa、HT-3及CaSki细胞系中BMX高表达,而在C-33A细胞中低表达。Western blot检测也得出同样的结果。将BMX过表达质粒载体转染至C-33A细胞系中,鉴定稳定过表达的细胞株(C-33 A-AcGFP,C-33 A-BMX)。对照组和BMX过表达组细胞成球实验显示,对照组球体较为松散而过表达组较为密实,两组细胞成球率无明显差异(P>0.05),但是过表达组球体直径明显大于对照组(P<0.001)。上述结果表明:非受体酪氨酸激酶BMX促进宫颈癌C-33 A细胞的成球能力。 展开更多

关键词 BMX 宫颈癌 C-33 A 成球实验

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X—33有望构造一体化航天飞机吗?

11

作者 易家康 《世界科学》 1999年第7期21-21,共1页

关键词 航天飞机 一体化 x-33型 飞机构造

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贝伐单抗联合培美曲塞对非小细胞肺癌移植瘤裸鼠体内IL-6、IL-17、IL-33及TNF-α的影响 被引量：2

12

作者 辛丽云 马骁 《生物医学工程与临床》 CAS 2017年第5期533-538,共6页

目的通过建立非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤裸鼠模型,观察贝伐单抗联合培美曲塞对NSCLC移植瘤裸鼠肿瘤组织中白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-33及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,进而探讨其可能机制。方法选择BALB/C雄性裸鼠60只,鼠... 目的通过建立非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤裸鼠模型,观察贝伐单抗联合培美曲塞对NSCLC移植瘤裸鼠肿瘤组织中白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-33及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,进而探讨其可能机制。方法选择BALB/C雄性裸鼠60只,鼠龄3~4周,体质量13~14 g。按随机数字表法分为3组,即空白对照组、对照组及治疗组,每组20只。制备A549单细胞悬液,接种于对照组及治疗组裸鼠右侧近腋部皮下,空白对照组用0.9%氯化钠溶液(生理盐水)代替单细胞悬液。裸鼠全部成瘤后,治疗组裸鼠腹腔注射给药贝伐单抗和培美曲塞,空白对照组及对照组于同一时间采用等量0.9%氯化钠溶液代替。接种4周后,断颈处死裸鼠,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测3组小鼠肿瘤组织中IL-6 mRNA、IL-17 mRNA、IL-33 mRNA及TNF-αmRNA和其蛋白的表达。结果对照组及治疗组40只裸鼠100%成瘤,且全部存活,移植瘤体积差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,给药后,治疗组移植瘤体积生长开始受抑制,且在接种后27 d显著受到抑制(t=-34.42,P<0.05)。与空白对照组比较,对照组肿瘤组织中IL-6、IL-17、IL-33及TNF-α的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);经过贝伐单抗联合培美曲塞治疗后,与对照组比较,治疗组IL-6、IL-17、IL-33及TNF-α的表达mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论贝伐单抗联合培美曲塞可显著降低NSCLC移植瘤裸鼠肿瘤组织中IL-6、IL-17、IL-33及TNF-α的表达水平。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 贝伐单抗 培美曲塞 联合治疗 白细胞介素-6(IL-6) 白细胞介素-17(IL-17) 白细胞介素-33(IL-33) 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)

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鸡源抗菌肽Fowlicidin-3表达条件的优化及生物学特性和体内疗效研究 被引量：11

13

作者 李荣荣 和祯泉 +2 位作者 吕英军 鲍恩东 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期113-118,共6页

对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5～6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源F... 对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5～6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg.L-1。采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源Fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌CowanⅠ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μg.mL-1。在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源Fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果。 展开更多

关键词 Fowlicidin-3 表达优化 生物学特性 x-33 体内疗效

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雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达及其酶学性质研究 被引量：7

14

作者 王建荣 刘丹妮 +6 位作者 李鹏 刘金山 周平发 陈丽芝 聂金梅 钟开兴 李阳源 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期83-88,共6页

采用同源克隆法获得了雪白根霉的脂肪酶基因(rnl),将其连接到pPICZαA载体上,得到重组表达载体pPICZαA-rnl。将表达载体pPICZαA-rnl用限制性内切酶SacI线性化后,电击转入毕赤酵母X-33中。雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母X-33中成功表达... 采用同源克隆法获得了雪白根霉的脂肪酶基因(rnl),将其连接到pPICZαA载体上,得到重组表达载体pPICZαA-rnl。将表达载体pPICZαA-rnl用限制性内切酶SacI线性化后,电击转入毕赤酵母X-33中。雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母X-33中成功表达,重组菌株摇瓶培养144 h后,酶活可达48 U/mL。重组酶最适pH值为8.5,最适反应温度为35℃。1 mmol/L的Mn2+,Ca2+和K+以及1%的表面活性剂吐温20,吐温80,曲通100对重组脂肪酶具有激活作用。重组酶的最适底物为三月桂酸甘油酯(C12)。 展开更多

关键词 雪白根霉 脂肪酶 毕赤酵母x-33

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番鸭细小病毒VP2基因在毕赤酵母中的表达及表达产物的鉴定 被引量：3

15

作者 娄华 白挨泉 +3 位作者 顾万军 陆英杰 贺东升 刘福安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期202-206,共5页

通过DNA重组技术,将克隆到的MDPV＿Q和MDPV＿26的VP2基因片段,经两种限制性核酸内切酶SacII和Kp nI的酶切,将酶切产物再克隆到表达载体pPICZαA中,得到表达重组质粒pPICZαA＿M＿QVP2和pPICZαA＿M＿26VP2。将这两种表达重组质粒分别转... 通过DNA重组技术,将克隆到的MDPV＿Q和MDPV＿26的VP2基因片段,经两种限制性核酸内切酶SacII和Kp nI的酶切,将酶切产物再克隆到表达载体pPICZαA中,得到表达重组质粒pPICZαA＿M＿QVP2和pPICZαA＿M＿26VP2。将这两种表达重组质粒分别转化到毕赤酵母(PichiaPastorisX＿33)中进行表达,经甲醇诱导和SDS＿PAGE分析结果表明,MDPV＿QVP2和MDPV＿26VP2基因片段的表达产物大小约为73kD,与理论预计相符。此外,本研究还意外地发现,重组质粒转化到酵母菌进行表达,在表达VP2结构蛋白的同时,还表达了一条大小约为60kD的蛋白条带。 展开更多

关键词 番鸭细小病毒 毕赤酵母x-33 表达 VP2基因

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β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的克隆与表达 被引量：2

16

作者 陈龙军 陈济琛 +2 位作者 陈亚兰 林戎斌 林新坚 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期170-174,共5页

β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶是一类专一性降解β-1,3-1,4-葡糖苷键中的β-1,4-糖苷键,产生小分子还原糖的水解酶,广泛应用于啤酒工业和饲料工业中。本研究根据毕赤酵母密码子偏好性优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列,采用PCR法将其插入毕赤酵... β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶是一类专一性降解β-1,3-1,4-葡糖苷键中的β-1,4-糖苷键,产生小分子还原糖的水解酶,广泛应用于啤酒工业和饲料工业中。本研究根据毕赤酵母密码子偏好性优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列,采用PCR法将其插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,经SacI线性化后电击整合入毕赤酵母X-33基因组,构建重组酵母;经菌落PCR验证和摇瓶筛选,获得一株X-33/pPICZαA-bgl,甲醇诱导96h后,酶活力达308.5U/mL,经SDS-PAGE电泳,实际蛋白分子量约为33ku。β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃。 展开更多

关键词 毕赤酵母x-33 β-1 3-1 4-葡聚糖酶 诱导

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改构的野生革耳漆酶基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定 被引量：7

17

作者 杨建强 刘刚 +2 位作者 汤国营 戴红梅 朱厚础 《生物技术通讯》 CAS 2005年第3期255-258,共4页

在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT。将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞。经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达... 在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT。将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞。经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多。其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4.5时测得比活为3.68U/mg。根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600。 展开更多

关键词 毕赤酵母 酶基因 活性鉴定 野生 SDS-PAGE cDNA序列 离子交换层析 凝胶过滤层析 相对分子质量 PCR鉴定 突变基因 表达载体 重组质粒 x-33 电击转化 活性重组 分泌表达 ABTS 核苷酸 漆酶 线性化 PME 转化子 lcc 培养液 酶蛋白

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类升力体外形俯仰阻尼特性数值研究 被引量：1

18

作者 刘伟 牟斌 《空气动力学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期331-337,共7页

采用有限差分方法求解薄层近似的非定常Navier Stokes方程 ,定常流场采用交替方向隐式分解的NND格式 ,非定常流场采用四步Runge Kutta方法 ,在保证时、空二阶精度前提下引入变系数残值光顺技术提高非定常流场计算效率 ,复杂带翼外形的... 采用有限差分方法求解薄层近似的非定常Navier Stokes方程 ,定常流场采用交替方向隐式分解的NND格式 ,非定常流场采用四步Runge Kutta方法 ,在保证时、空二阶精度前提下引入变系数残值光顺技术提高非定常流场计算效率 ,复杂带翼外形的空间网格通过求解抛物化的椭圆型方程生成。 展开更多

关键词 Navier-Stokes方程 非定常流动 数值模拟 俯仰阻尼导数 类升力体外形 动导数 Etkin理论 可重复使用运载器 RLV x-33缩比验证机 飞机

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指状青霉cyt b_5和cyt b_5r基因克隆及与cyp51A的共表达

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作者 秦婷婷 耿辉 +3 位作者 王胜强 牛玉慧 伍志 刘德立 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期179-188,共10页

为探究指状青霉细胞色素b5(Cyt b5)与细胞色素b5还原酶(Cyt b5r)在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用,研究了指状青霉CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达机制;并检测了其对于cyp51A基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得... 为探究指状青霉细胞色素b5(Cyt b5)与细胞色素b5还原酶(Cyt b5r)在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用,研究了指状青霉CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达机制;并检测了其对于cyp51A基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得了cyt b5与cyt b5r基因,分别命名为HS-Pdcyt b5和HS-Pdcyt b5r。以多基因串联克隆载体p PICZαA为骨架构建了指状青霉共表达质粒ppbr A(p PIC-Pdcyp51A-cyt b5-cyt b5r);电转化法将重组质粒ppbr A导入毕赤酵母X-33中。q RT-PCR分析结果显示,CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达后,其基因表达水平升高54%-97%,并维持较长时间(48-72 h)。表明Cyt b5-Cyt b5r系统可将电子高效转移给CYP51A,从而增强cyp51A基因的转录表达。从指状青霉中克隆表达HS-Pd Cyt b5和HS-Pd Cyt b5r蛋白,并通过共表达的方式研究cyp51A基因的功能尚为首次报道。 展开更多

关键词 指状青霉CYP51A 共表达 细胞色素B5 细胞色素b5还原酶 毕赤酵母x-33

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熔融制样X射线荧光光谱法测定高铬赤泥中主次量组分 被引量：9

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作者 朱忠平 曾精华 +1 位作者 王长根 吕立超 《岩矿测试》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期822-827,共6页

高铬红土型铝铁复合矿经钠盐还原焙烧-磁选-浸出后,铬等有价金属在赤泥中富集（Cr2O3含量达到3%-30%）,属难熔复合矿物,目前主要以化学分析方法为主,但操作复杂,且步骤繁琐,分析周期长。而应用X射线荧光光谱法分析测定,一般采用钠盐熔... 高铬红土型铝铁复合矿经钠盐还原焙烧-磁选-浸出后,铬等有价金属在赤泥中富集（Cr2O3含量达到3%-30%）,属难熔复合矿物,目前主要以化学分析方法为主,但操作复杂,且步骤繁琐,分析周期长。而应用X射线荧光光谱法分析测定,一般采用钠盐熔剂、较高稀释比等熔融制样,不利于钠及低含量元素的测定。本文采用四硼酸锂-偏硼酸锂（67∶33）作混合熔剂,硝酸铵作氧化剂,饱和溴化锂溶液作脱模剂制备玻璃熔片,建立了波长色散型XRF测定高铬赤泥中主次量组分（铬硅铝铁镁钙钠钾硫磷钛锰钒）的分析方法。研究表明,熔样稀释比低于24∶1时,稀释比越低,对铂金坩埚腐蚀越严重;稀释比在24∶1时,制样方法的相对标准偏差（RSD,n=10）最低;熔样时间越长,温度越高,RSD越低。由此确定熔样最优条件为稀释比24∶1,熔样时间15 min,熔样温度1100℃。分析中采用铬铁矿、铝土矿、黏土、铁矿石国家标准物质及人工标准样品校准,基本参数法进行基体校正,方法精密度（RSD,n=10）为0.3%-3.9%。与国内外其他含铬矿物的XRF分析方法相比,本方法采用不添加钠盐、一次熔片、常规熔样温度（1100℃）、低稀释比（24∶1）等进行制样,制样方法的精密度和分析精密度均低,解决了高铬赤泥的XRF分析方法问题,还可扩展到高铬、铝、硅、铁等复合矿原矿及其钠盐处理焙烧矿、精矿及尾矿的XRF分析。 展开更多

关键词 赤泥 高铬 玻璃熔融制样 四硼酸锂-偏硼酸锂(67∶33)熔剂 X射线荧光光谱法

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