目的探讨头框转录因子O家族4(class O of forkhead box transcriptionfactor 4,FOXO4)对喉癌细胞增殖凋亡能力的影响。方法应用Western blot法检测喉癌组织及对应癌旁组织中FOXO4的表达水平。细胞转染FOXO4过表达载体(p-EGFP-C1/FOXO4组...目的探讨头框转录因子O家族4(class O of forkhead box transcriptionfactor 4,FOXO4)对喉癌细胞增殖凋亡能力的影响。方法应用Western blot法检测喉癌组织及对应癌旁组织中FOXO4的表达水平。细胞转染FOXO4过表达载体(p-EGFP-C1/FOXO4组)和空载体(p-EGFP-C1组),同时设置未转染组,未转染组中只加入转染试剂。Western blot法检测转染后细胞中FOXO4蛋白水平。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-3、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、Caspase-9、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt1表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂作用于转染p-EGFP-C1/FOXO4后的喉癌细胞(激活剂组),检测细胞增殖、凋亡情况。结果 FOXO4在喉癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P=0.000)。p-EGFP-C1/FOXO4组细胞中FOXO4表达水平明显高于未转染组(P=0.000)。p-EGFP-C1/FOXO4组细胞存活率及β-catenin、Wnt1水平明显低于未转染组(P=0.002,P=0.004,P=0.006),细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Cleaved Caspase-9、C a s p a s e-9表达水平均明显高于未转染组(P=0.0 0 2,P=0.001,h P<0.05,P=0.004,j P<0.05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以部分逆转FOXO4抑增殖和促凋亡作用。结论 FOXO4能够促进人喉癌细胞凋亡,抑制喉癌细胞增殖,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。展开更多
目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动...目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化。设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组。结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05)。加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性。激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低。加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度。荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05)。LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05)。结论ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性。展开更多
文摘目的以卷曲受体4(FZD4)为例,探索细胞膜上受体蛋白的表达变化能否作为损伤时间推断的指标。方法 78只大鼠随机分为对照组和损伤后4h、8h、12h、16h、20h、24h、28h、32h、36h、40h、44h和48 h组(n=6)。麻醉后,采用重力锤自由落体方式砸伤大鼠右后肢,取股四头肌处挫伤的组织。应用免疫荧光、real-time PCR和western blotting方法检测肌肉中FZD4蛋白及m RNA的表达量。结果免疫荧光结果显示FZD4表达于骨骼肌细胞膜上,胞浆和细胞核内均未见表达;Real-time PCR结果表明FZD4 m RNA在损伤后8h、12h、36h和40h显著上调(P<0.05),均超过对照组的两倍;Western blotting结果示FZD4蛋白的表达在8h、36h、40h、44h和48h组明显增加(P<0.05),但均未超过对照组的两倍。结论 FZD4 m RNA和蛋白在肌肉挫伤后呈时序性变化规律可作为损伤时间推断的指标,在一定程度上FZD4 m RNA比FZD4更适用于损伤时间推断。
文摘目的探讨头框转录因子O家族4(class O of forkhead box transcriptionfactor 4,FOXO4)对喉癌细胞增殖凋亡能力的影响。方法应用Western blot法检测喉癌组织及对应癌旁组织中FOXO4的表达水平。细胞转染FOXO4过表达载体(p-EGFP-C1/FOXO4组)和空载体(p-EGFP-C1组),同时设置未转染组,未转染组中只加入转染试剂。Western blot法检测转染后细胞中FOXO4蛋白水平。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-3、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、Caspase-9、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt1表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂作用于转染p-EGFP-C1/FOXO4后的喉癌细胞(激活剂组),检测细胞增殖、凋亡情况。结果 FOXO4在喉癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P=0.000)。p-EGFP-C1/FOXO4组细胞中FOXO4表达水平明显高于未转染组(P=0.000)。p-EGFP-C1/FOXO4组细胞存活率及β-catenin、Wnt1水平明显低于未转染组(P=0.002,P=0.004,P=0.006),细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Cleaved Caspase-9、C a s p a s e-9表达水平均明显高于未转染组(P=0.0 0 2,P=0.001,h P<0.05,P=0.004,j P<0.05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以部分逆转FOXO4抑增殖和促凋亡作用。结论 FOXO4能够促进人喉癌细胞凋亡,抑制喉癌细胞增殖,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。
文摘目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化。设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组。结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05)。加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性。激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低。加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度。荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05)。LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05)。结论ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性。
