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下调蛋白激酶Wee1B表达对小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂的促进作用 被引量:3
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作者 任丽莉 刘超 +4 位作者 刘乙蒙 孟智超 孙静 于秉治 肖建英 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期44-48,I0001,共6页
目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细... 目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B shRNA的干涉效能;荧光显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定Wee1B活性。结果:与TE缓冲液和Control shRNA注射组比较,Wee1BshRNA注射组小鼠1-细胞期受精卵Wee1BmRNA水平和蛋白表达显著降低;与其他3组比较,Wee1BshRNA注射组Wee1B的激酶活性明显降低;未注射组、TE缓冲液注射组和Control shRNA注射组在hCG注射33h后1-细胞期受精卵的卵裂率分别为71.91%±1.74%、72.90%±2.25%和72.28%±2.06%,3组间比较差异无统计学意义(P>0.05);而Wee1BshRNA注射组的卵裂率提高18.00%,为90.00%±0.77%,与其他3组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:Wee1B表达沉默可提高小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,说明Wee1B负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程。 展开更多
关键词 Wee1B 短发夹RNA 有丝分裂 受精卵 小鼠
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蛋白激酶A抑制剂H-89通过Wee1B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育
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作者 张苧兮 刘超 +4 位作者 任丽莉 刘乙蒙 齐川 于秉治 肖建英 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期137-141,共5页
目的:探讨蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89通过调控小鼠蛋白激酶WeelB蛋白S15位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵,经H-89预处理后显微注射WeelB-mRNAs,相差显微镜观察受精卵的形态变... 目的:探讨蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89通过调控小鼠蛋白激酶WeelB蛋白S15位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵,经H-89预处理后显微注射WeelB-mRNAs,相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性;免疫印迹检测WeelB蛋白表达、CDC2-pTyr15和WeelB-pSer15磷酸化及WeelB-pSerl5非磷酸化状态。结果:H-89持续存在时,在受精卵G1和S期检测到WeelB-Ser15的磷酸化条带,在G2期和M期检测到WeelB-Serl5的非磷酸化条带;小鼠受精卵有丝分裂进程加快,但过表达WeelB-WT和过表达突变体weelBSl5A/D均能延缓受精卵有丝分裂进程,逆转由H-89引起的促进分裂作用。结论:H-89抑制PKA活性,从而抑制WeelB蛋白S15位点的磷酸化状态,但过表达WeelB-S15A/D有效逆转H-89加速的G2/M期转换,使受精卵的分裂延迟。提示weelB蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点。 展开更多
关键词 weelb 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 H-89 受精卵 小鼠
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双丁酰环腺苷酸通过蛋白激酶Wee1B调控小鼠1-细胞期受精卵的发育研究 被引量:1
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作者 任丽莉 刘超 +2 位作者 刘乙蒙 张苧兮 肖建英 《中国现代医生》 2017年第22期34-38,F0003,共6页
目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。... 目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。方法将2 mmol/L dbc AMP作用于小鼠1-细胞期受精卵1 h,并显微注射Wee1Bm RNAs,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Wee1B-WT/KD注射组、Wee1B-S15A/D注射组,继续在M16培养基中培养。相差显微镜下观察小鼠受精卵的形态变化和卵裂情况,放射自显影测定各期细胞有丝分裂促进因子(MPF)活性,Western blotting方法检测Wee1B蛋白的表达、CDC2-p Tyr15和Wee1B-p Ser15的磷酸化水平。结果小鼠受精卵在有dbc AMP存在时,G_1、S、G_2和M各细胞周期均检测到磷酸化的Wee1B表达,非磷酸化条带在G_2期和M期才能检测到;各组受精卵卵裂出现时间延迟,卵裂率显著降低;h CG注射后35 h内,MPF活性一直处于低水平,CDC2-p Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化趋势相一致。结论dbc AMP激活PKA后,PKA磷酸化Wee1B蛋白的S15位点,Wee1B活性增加,阻滞受精卵分裂,本研究提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点,可以更好地认识早期胚胎发育的分子事件。 展开更多
关键词 weelb 双丁酰环腺苷酸 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 小鼠受精卵
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