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大黄鱼Wap65-2基因成熟肽区酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 裘天休 李长红 陈炯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期108-113,共6页
用大黄鱼Wap65-2基因成熟肽区构建酵母双杂交诱饵质粒,并对诱饵质粒进行自激活活性及毒性检测。从大黄鱼(Larimichthys crocea)肝组织c DNA中扩增Wap65-2基因成熟肽片段(Lc Wap65-2m),将其克隆至p GBKT7载体中,获得诱饵载体p GBKT7-Lc W... 用大黄鱼Wap65-2基因成熟肽区构建酵母双杂交诱饵质粒,并对诱饵质粒进行自激活活性及毒性检测。从大黄鱼(Larimichthys crocea)肝组织c DNA中扩增Wap65-2基因成熟肽片段(Lc Wap65-2m),将其克隆至p GBKT7载体中,获得诱饵载体p GBKT7-Lc Wap65-2m,经PCR、酶切和测序验证无误后,转化至酵母菌株Y187中,在营养缺陷培养基中观察重组蛋白的毒性作用和自激活活性,同时利用Western blot分析重组蛋白的表达。成功扩增Lc Wap65-2m,并克隆至p GBKT7载体中;Western blot检测结果表明,p GBKT7-Lc Wap65-2m在酵母细胞中表达诱饵蛋白Lc Wap65-2m;表型筛选结果显示,Lc Wap65-2m无毒性作用和自激活活性。成功构建了Lc Wap65-2m酵母双杂交诱饵载体,为进一步利用酵母双杂交技术筛选与Wap65-2相互作用的蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 wap65-2 酵母双杂交 表达 自激活 毒性
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花鲈Wap65-2基因的克隆、理化性质及其表达与哈维氏弧菌感染的相关性 被引量:8
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作者 史雨红 陈炯 +3 位作者 高姗姗 沈广强 陆新江 李明云 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期481-486,共6页
Wap65-2(warm temperature acclimation related 65 kDa protein-2)是鱼类中发现的一种血浆糖蛋白,与细菌感染性免疫应激紧密相关。该研究首次克隆了花鲈Wap65-2基因全长cDNA序列。它由1601个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,预期编... Wap65-2(warm temperature acclimation related 65 kDa protein-2)是鱼类中发现的一种血浆糖蛋白,与细菌感染性免疫应激紧密相关。该研究首次克隆了花鲈Wap65-2基因全长cDNA序列。它由1601个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,预期编码一个由436个氨基酸组成、相对分子质量为4.87×104的前体蛋白,N端19个残基为信号肽序列。序列和系统进化树分析表明,花鲈Wap65-2与欧洲海鲈进化关系最近,两者氨基酸同源性高达80.7%。健康花鲈Wap65-2基因mRNA主要在肝中表达,心和肌肉中少量表达。qRT-PCR分析揭示,哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染感染12h后,花鲈肝中Wap65-2基因mRNA表达显著上调,24h时达到峰值,为健康对照的6.89倍。原核表达花鲈Wap65-2并制备抗血清。Western blot分析表明,哈维氏弧菌感染12h后,花鲈血清中Wap65-2含量显著增加,36h时达到最大值,为健康对照的5.33倍。综上所述,花鲈Wap65-2基因的表达与其细菌感染性免疫应激紧密相关。 展开更多
关键词 wap652基因 花鲈 哈维氏弧菌 实时荧光定量PCR WESTERN BLOT
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